一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用。

背景技术：

1、酸性成纤维细胞生长因子(afgf)是一种对来源于中胚层及神经外胚层的细胞，有广泛促分裂作用的活性物质。afgf在调节成纤维细胞、内皮细胞和角质细胞中起关键作用，通过与细胞膜上的特异性受体（afgfr）结合，使其磷酸化同时激活下游细胞内信号转导，促进组织胶原蛋白的局部表达，并增加转化生长因子和增殖细胞核抗原的水平，增加细胞的分裂增殖，在伤口修复和皮肤再生过程中，可直接作用于深层损伤组织，加速伤口愈合，迅速修复组织的各种创伤，从而促使皮肤创面愈合并减少皮肤疤痕和增生。另外，afgf还可以调节炎症因子的分泌，提高肌体免疫力，在皮肤受到外界刺激时（紫外线灼伤、过敏、脱皮、发红等），自动激活人体免疫系统，使肌肤细胞维持正常状态，修复重建肌肤屏障。afgf上述功能的实现是通过多个结构区域决定的，主要包括肝素结合域、受体结合域和核转位区域。其中，afgf通过受体结合域与下游细胞膜表面afgfr结合，再通过肝素结合域结合肝素来激活afgfr，形成三级复合物，增加afgf的稳定性，防止afgf被温度、 ph 及蛋白酶水解影响，延长afgf的半衰期。然而，afgf蛋白的三个半胱氨酸若存储条件不当可能会形成二硫键，影响功能域的结合活性，从而影响蛋白的活性及稳定性。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用。本发明的改构蛋白将半胱氨酸替换为丝氨酸和甘氨酸，增加其稳定性，并新增一段肝素结合区将两个结合区串联，增加其活性，去除非核心区减少蛋白分子量透皮性好，且不影响活性，具有良好的生物护肤品市场前景。

2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白，其氨基酸序列如seq id no:2所示。

3、人afgf含有3个半胱氨酸残基，具有生物活性的afgf单体分子的2个高度保守的半胱氨酸不形成二硫键，但在细胞外afgf活性蛋白中的半胱氨酸残基可能会形成分子间二硫键，导致afgf的非变性失活。本申请发明人基于野生型afgf，使用蛋白质工程技术精确地进行改构得到氨基酸序列如seq id no:2所示的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。将野生型afgf的半胱甘酸替换为丝氨酸和甘氨酸，并去除原非核心区的32个氨基酸（位点1-20和位点130-141），增加一段肝素结合区，用连接子gsg将两个结合区串联。通过将人afgf中半胱氨酸改造成结构相似的丝氨酸残基，可避免形成分子间二硫键，改构后的afgf与正常afgf显示出同样的促有丝分裂活性和肝素依赖性。本申请发明人经大量的实验验证，本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白比野生型afgf蛋白的具有更好的稳定性、透皮性、可促进表皮细胞再生，修复皮肤屏障受损。

4、本发明还提供一种编码所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的核酸。

5、本发明还提供一种含有所述核酸的重组质粒。

6、本发明还提供一种转染所述重组质粒的宿主细胞。

7、本发明还提供所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的制备方法，所述方法通过构建培养所述的宿主细胞，从而表达重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。

8、本发明还提供所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白、所述的核酸、所述的重组质粒或所述的宿主细胞在制备促进伤口愈合的产品中的应用。

9、本发明还提供所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白在制备护肤品或化妆品中的应用。本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白具有较强的抗氧化性和自由基清除作用，可促进表皮细胞再生修复皮肤屏障受损，舒缓皮肤敏感泛红症状，能用于护肤品或化妆品的制备。

10、作为本发明所述应用的优选实施方式，所述护肤品包括面霜、精华液、面膜。

11、本发明还提供一种护肤组合物，所述组合物包括所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。

12、作为本发明所述护肤组合物的优选实施方式，按护肤组合物的重量计，所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的含量为0.01~1%。更优选地，按护肤组合物的重量计，所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的含量为0.1%。

13、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用。本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白与野生型afgf相比，具有更好的稳定性，不易变性失活；本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白具有良好的透皮性、可促进表皮细胞再生，修复皮肤屏障受损；本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白具有较强的抗氧化性和自由基清除作用，可促进表皮细胞再生修复皮肤屏障，舒缓皮肤敏感泛红症状。

技术特征：

1.一种重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如seqid no:2所示。

2.一种编码权利要求1所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的核酸。

3.一种含有权利要求2所述核酸的重组质粒。

4.一种转染权利要求3所述重组质粒的宿主细胞。

5.权利要求1所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法通过构建培养权利要求4所述的宿主细胞，从而表达重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。

6.权利要求1所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白、权利要求2所述的核酸、权利要求3所述的重组质粒或权利要求4所述的宿主细胞在制备促进伤口愈合的产品中的应用。

7.权利要求1所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白在制备护肤品或化妆品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述护肤品包括面霜、精华液、面膜。

9.一种护肤组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。

10.根据权利要求9所述的护肤组合物，其特征在于，按护肤组合物的重量计，所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的含量为0.01~1%。

技术总结
本发明公开了一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用，涉及生物技术领域。本发明提供了一种重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本申请发明人基于野生型aFGF，使用蛋白质工程技术精确地进行改构得到氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白与野生型aFGF相比，（1）具有更好的稳定性，不易变性失活；（2）具有良好的透皮性、可促进表皮细胞再生，修复皮肤屏障受损；（3）具有较强的抗氧化性和自由基清除作用，可促进表皮细胞再生修复皮肤屏障，舒缓皮肤敏感泛红症状。

技术研发人员：谭雅超,石俊芳,付廷灵,李丽丽,梁庆,余成基,黄海清,谢钰怡,李丽婷
受保护的技术使用者：朗肽生物制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/6