一种特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssDNA核酸适体及其应用

本发明属于生物工程，具体地，涉及一种特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体及其应用。

背景技术：

1、石斑鱼是一种具有较高的经济价值和营养价值的名贵海水养殖鱼类。近些年随着水产养殖行业的蓬勃发展，石斑鱼养殖规模不断扩大，随之而来的是各种病害频发暴发，对石斑鱼养殖行业造成了巨大的经济损失。石斑鱼虹彩病毒(singapore grouperiridovirus，sgiv)是一种目前公认严重危害石斑鱼养殖健康发展的传染性病原之一，其死亡率可高达90％以上。目前针对石斑鱼虹彩病毒的检测方法主要是基于抗体的免疫学检测、基于分子生物学的聚合酶链式反应及实时荧光定量核酸扩增检测系统。这些方法均有较高的特异性、灵敏性和精确性等优点。但是免疫学方法存在制备周期长，不易保存；聚合酶链式反应耗时长，操作繁琐，灵敏度不够；实时荧光定量核酸扩增检测虽然灵敏度高，但是耗时长，对操作人员的专业要求高，所以各种方法均有不适合现场使用的缺点，因而仅局限于实验室内的样品检测。因此研发操作便捷、成本低、耗时短、准确度高的快速检测技术，来监控石斑鱼虹彩病毒的感染，对石斑鱼养殖业是极其重要的。

2、核酸适体是一类大小为20～100个碱基的核苷酸，可通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，selex)针对特定靶标物质进行多轮严格特异性筛选获得。selex技术筛选是通过将随机寡核苷酸文库与靶标物质孵育结合，再通过滤膜过滤、磁性分离等方法获得与靶标物质能够特异性结合的核酸单链，再经过多轮筛选最后得到与靶标物质特异性结合能力最强的核酸单链，即核酸适体。核酸适体结构稳定，耐受性高、具有易于体外合成和修饰等优点，目前被国内外学者广泛应用于病原或疾病诊断治疗等领域。因此利用核酸适体开发精准快速检测石斑鱼虹彩病毒的产品具有广阔的应用前景。

技术实现思路

1、本发明提供一种特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体及其应用，该核酸适体对石斑鱼虹彩病毒具有较高的灵敏性和特异性。

2、根据本发明的一个方面，提供一种特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体，其核苷酸序列如seq id no：1所示。

3、优选地，上述核苷酸序列的二级结构如下所示：

4、

5、优选地，核苷酸序列接有标记物。

6、优选地，标记物选自生物素标记物、发光标记物、酶标记物中的至少一种。

7、根据本发明的另一个方面，提供上述特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体在制备特异性识别石斑鱼虹彩病毒的产品中的应用。

8、优选地，特异性识别石斑鱼虹彩病毒的产品包括上述特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体。

9、根据本发明的另一个方面，提供一种检测石斑鱼虹彩病毒的产品，包括上述特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体。

10、优选地，上述产品为分子探针和/或试剂盒。

11、本发明所提供的核酸适体对石斑鱼虹彩病毒具有高亲和力和高特异性，与现有的免疫学检测方法相比，本发明所提供的核酸适体分子量小、制备周期短、易于获得、稳定性强。应用本发明所提供的核酸适体对石斑鱼虹彩病毒进行检测时，操作简单、耗时短且具有较高的准确率和灵敏度。基于该核酸适体，能够构建特异性识别石斑鱼虹彩病毒的产品，以便于实现对石斑鱼虹彩病毒的快速诊断，这在石斑鱼绿色健康养殖方面具有良好的应用前景。

技术特征：

1.一种特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体，其特征在于：所述特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体的核苷酸序列如seq id no：1所示。

2.如权利要求1所述特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体，其特征在于：所述核苷酸序列的二级结构如下所示：

3.如权利要求1或2所述特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体，其特征在于：所述核苷酸序列结合有标记物。

4.如权利要求3所述特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体，其特征在于：所述标记物选自生物素标记物、发光标记物、酶标记物中的至少一种。

5.如权利要求1～4任一项所述特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体在制备特异性识别石斑鱼虹彩病毒的产品中的应用。

6.如权利要求5所述应用，其特征在于：所述特异性识别石斑鱼虹彩病毒的产品包括如权利要求1～4任一项所述特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体。

7.一种检测石斑鱼虹彩病毒的产品，其特征在于：包括如权利要求1～4任一项所述特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssdna核酸适体。

8.如权利要求7所述检测石斑鱼虹彩病毒的产品，其特征在于：所述产品为分子探针和/或试剂盒。

技术总结
本发明提供一种特异性识别石斑鱼虹彩病毒的ssDNA核酸适体，其核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。本发明所提供的核酸适体对石斑鱼虹彩病毒具有较高的亲和力和特异性，此外，该核酸适体还具有易于制备及标记、对机体无毒副作用、稳定性强、易于储存等优点。应用本发明所提供的核酸适体对石斑鱼虹彩病毒进行检测时，操作简单、耗时短且具有较高的准确率和灵敏度。基于该核酸适体，能够构建特异性识别石斑鱼虹彩病毒的试剂盒或分子探针，以便于实现对石斑鱼虹彩病毒的快速诊断，这在石斑鱼绿色健康养殖方面具有良好的应用前景。

技术研发人员：许贵林,李鹏飞,余庆,刘明珠,邬满,邱衡通,刘小宁,黄静,陆柳霖,竺利波,柯珂,师德强,杨辉,牟容丽,元昌安
受保护的技术使用者：广西科学院
技术研发日：
技术公布日：2024/4/7