根皮苷衍生物及其制备方法和在变叶海棠质量标志物中的应用与流程

本发明涉及根皮苷衍生物及其制备方法和在变叶海棠质量标志物中的应用，属于药材质量检测领域。

背景技术：

1、蔷薇科植物变叶海棠malus toringoides (rehd)hughes.的干燥叶及叶芽作为藏族习用药材“俄色”被收载于《四川省藏药材标准2014年版》，是仅生长于海拔2500m至3500m雪域高原地区的独特树种。经考证在民间有用其叶制作饮品使用的习惯，藏医传统用法为：取“俄色”适量，和酥油同煮口服，因其味酸，性温，具有消解培根的功效，因此具有缓解“京尼萨库”症状和降低人体脂肪的功效，用于降血糖、降血脂、治疗消化不良、高血压等。

2、目前对于变叶海棠质量标准研究较少，主要是以其中的根皮素、根皮苷作为质量标志物，如夏冬梅，藏药“俄色叶”的质量标准研究，成都中医药大学，硕士论文，2014年，变叶海棠和花叶海棠均以高剂量(2g/kg)最佳,而根皮素以中剂量(10mg/kg)最佳,根皮苷以低剂量(5mg/kg)最佳。根据药材的有效剂量,确定俄色叶的每日给药量为3.3-13.2g,这与本草中记载基本相符,根皮素和根皮苷为俄色叶的有效成分。 申请号：cn201910351532.2，发明名称：俄色果中枸杞酸的提取方法和检测方法 ，公开了一种俄色果提取物，俄色果中枸杞酸的制备方法和检测方法。实验结果证明，该发明成功从俄色果中分离出了枸杞酸，其在俄色果中属于首次发现，因此，枸杞酸可用于俄色果的鉴别和质量控制。申请号:cn202310223755.7 ，发明名称：一种俄色果配方颗粒的薄层色谱检测方法，公开了一种俄色果配方颗粒的薄层色谱检测方法，它包括如下步骤：a、供试品溶液的制备；b、对照品溶液的制备；c、薄层层析测定：取供试品溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶g板上，用乙酸丁酯：甲酸：水展开，干燥后用溴甲酚绿溶液浸板，加热至斑点清晰，冷却，再置于碘蒸气中熏至斑点显色清晰，检视。该发明通过特定的薄层色谱条件，使俄色果配方颗粒中的特征成分l-苹果酸被有效分离，专属性很好，检测限较低。

3、由于变叶海棠叶及叶芽可长年采摘，研究发现药材质量不稳定。目前的检测指标还不能满足质量控制的需求。

技术实现思路

1、本发明的技术方案是提供了一种新的根皮苷衍生物，本发明还提供了利用该根皮苷衍生物用于控制变叶海棠的质量的方法。

2、本发明提供了一种根皮苷衍生物，具有式（1）或式（3）结构式：

3、式（1）：

4、、

5、式（3）：

6、

7、本发明还提供了所述的根皮苷衍生物在用于蔷薇科植物变叶海棠malustoringoides (rehd)hughes.的干燥叶的质量标志物中的应用。

8、本发明还提供了一种所述的根皮苷衍生物的提取分离方法，它是以蔷薇科植物变叶海棠malus toringoides (rehd)hughes.的干燥叶为原料，经提取、分离、纯化制备而成。

9、它包括如下步骤：

10、a 、取蔷薇科植物变叶海棠malus toringoides (rehd)hughes.的干燥叶，粉碎成粗粉；

11、b、加入90%甲醇浸提2次，每次24h，合并提取液，50℃减压浓缩，加水稀释1倍，用等体积的乙酸乙酯萃取三次；

12、c、合并乙酸乙酯相50℃浓缩至小体积，加60-80目硅胶拌样，50℃恒温鼓风干燥后硅胶柱层析分离；

13、d、经二氯甲烷-甲醇（30：1-1：1）梯度洗脱，在薄层色谱参考下合并洗脱液，其中二氯甲烷：甲醇（10:1～5：1）段经高压液相反复制备得到化合物1、化合物3。

14、其中，a步骤所述的干燥叶来源于产地四川省甘孜州炉霍县，9月份采集。

15、本发明还提供了一种变叶海棠药材的质量检测方法，它是采用lc-ms方法检测变叶海棠药材中的化合物，化合物包括所述的根皮苷衍生物、化合物2，化合物2的结构如式（2）所示：

16、。

17、具体地，所述的lc-ms的色谱条件为：

18、色谱柱：waters acquity uplc hss t3 2.1×100mm×1.8um （lc-147）；流动相：a-乙腈、b-0.1%甲酸溶液；洗脱条件为：

19、 时间（min） 0 10 16 22 28 30 32 36 36.5 40 a% 15 22 22 30 30 34 90 90 22 22

20、流速：0.3ml/min，波长：286nm，柱温：35℃，进样量：0.2μl，离子源：esi，喷雾电压：4 kv，鞘气温度：350 ℃，鞘气流速：11l/min，干燥气流速：8l/min，干燥气温度：300℃，扫描模式：全扫描，扫描范围：m/z 100 ～1500，碰撞电压：100v，碰撞能量梯度：10，20，40 ev。

21、本发明还提供了一种鉴别变叶海棠药材的生长期的方法，它包括如下步骤：

22、a、采用所述质量检测方法检测待检药材；

23、b、检测结果分析：

24、若uplc含有2个特征峰，为9月份采集的药材；所述的2个特征峰的相对保留时间为：所述的2个特征峰的相对保留时间分别为：26.6min、28min，相对保留时间在±10%范围内波动。

25、本发明将发现的根皮苷衍生物用于控制变叶海棠的质量，能分辨不同生长期的药材，使得变叶海棠的质量更可控，且容易分离纯化根皮苷衍生物等质量标志物，本发明还提供了一种新的根皮苷衍生物的制备方法，为变叶海棠的质量标准提供了新的选择。

技术特征：

1.根皮苷衍生物，其特征在于：具有式（1）或式（3）结构式：

2.权利要求1所述的根皮苷衍生物在用于蔷薇科植物变叶海棠malus toringoides(rehd)hughes.的干燥叶的质量标志物中的应用。

3.权利要求1所述的根皮苷衍生物的提取分离方法，其特征在于：它是以蔷薇科植物变叶海棠malus toringoides (rehd)hughes.的干燥叶为原料，经提取、分离、纯化制备而成。

4.根据权利要求3所述的根皮苷衍生物的提取分离方法，其特征在于：它包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的根皮苷衍生物的提取分离方法，其特征在于：a步骤所述的干燥叶来源于产地四川省甘孜州炉霍县，9月份采集。

6.一种变叶海棠药材的质量检测方法，其特征在于：它是采用lc-ms方法检测变叶海棠药材中的化合物，化合物包括权利要求1所述的根皮苷衍生物、化合物2，化合物2的结构如式（2）所示：。

7.根据权利要求6所述的变叶海棠药材的质量检测方法，其特征在于：所述的lc-ms的色谱条件为：

8.一种鉴别变叶海棠药材的生长期的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

技术总结
本发明涉及根皮苷衍生物及其制备方法和在变叶海棠质量标志物中的应用，属于药材质量检测领域。本发明将发现的根皮苷衍生物用于控制变叶海棠的质量，能分辨不同生长期的药材，使得变叶海棠的质量更可控，且容易分离纯化根皮苷衍生物等质量标志物。本发明还提供了一种新的根皮苷衍生物的制备方法，以及一种变叶海棠药材的质量检测方法和鉴别变叶海棠药材的生长期的方法，为变叶海棠的质量标准提供了新的选择。

技术研发人员：华桦,刘俐,赵军宁
受保护的技术使用者：四川省中医药转化医学中心
技术研发日：
技术公布日：2024/1/25