一种新型杀虫蛋白的制作方法

本发明公开了一种新型杀虫蛋白及其应用，属于基因工程领域。

背景技术：

1、源于苏云金芽孢杆菌中的杀虫蛋白是目前转基因作物和生物农药开发过程中普遍使用的目的蛋白。然而随着这些商品化的杀虫剂和抗虫作物的大规模应用，害虫普遍产生了对已有杀虫蛋白的抗药性，迫切需要找到或创制出新型的杀虫蛋白。

2、草地贪夜蛾(学名：spodoptera frugiperda)属于夜蛾科灰翅夜蛾属，其幼虫可大量啃食水稻、甘蔗和玉米之类禾本科以及菊科、十字花科等多种农作物，造成严重的经济损失。该物种原产于美洲热带地区，具有很强的迁徙能力，2016年起，草地贪夜蛾散播至非洲、亚洲各国，已造成巨大的农业损失。美国等转基因作物种植大国主要使用cry1fa、vip3aa蛋白培育玉米和大豆新品种防治草地贪夜蛾，然而由于该昆虫强迁徙、繁殖快的特点，越来越多的针对cry1fa、vip3aa的抗性品系已经被发现(fatoretto j c,michel ap,silva filhom c,silva n.adaptive potential of fall armyworm(lepidoptera:noctuidae)limitsbt trait durability in brazil[j].j.integr.pest manag.2017,8,17)。因此，未来的抗草地贪夜蛾作物品种需要获得与cry1fa和vip3aa完全不同的新型杀虫蛋白。

3、cry1b、cry1c、cry1d类蛋白相对其他cry类蛋白具备更高的草地贪夜蛾杀虫活性，然而这些天然蛋白的杀虫活性依然不足以满意草地贪夜蛾害虫防治的需要，因此需要通过人工改造的方式提高其杀虫活性。在保证高活性的基础上，还需要拓宽蛋白的杀虫谱，使得其能够用于制备防治多种害虫的杀虫剂或基因工程植物，从而具备更高的商业价值。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明采用如下技术方案：

2、本发明提供一种新型杀虫蛋白，其特征在于，该蛋白的氨基酸序列如seq id no.5或seq id no.9所示。

3、本发明还提供一种核酸分子，其特征在于，所述的核酸分子编码上述的蛋白。

4、在一些实施方案中，编码seq id no.5蛋白的核酸分子的核苷酸序列如seq idno.6所示，编码seq id no.9蛋白的核酸分子的核苷酸序列如seq id no.10所示。

5、本发明还提供一种载体，其特征在于，所述载体包含上述的核酸分子。

6、本发明还提供一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有上述的核酸分子或上述的载体。

7、在一些实施方案中，上述重组细胞为原核生物细胞。

8、在一些实施方案中，上述重组细胞为大肠杆菌细胞。

9、本发明还提供上述蛋白、核酸分子、载体、重组细胞在抗虫或制备抗虫制剂或培育抗虫植物中的应用。

10、在一些实施方案中，上述抗虫为对草地贪夜蛾具有杀虫活性。

11、本发明的有益效果在于：本发明通过大范围结构域互换，获得了2种具有高杀虫活性的新型草地贪夜蛾杀虫蛋白，可用于开发生物农药或培育新型抗虫植物。

1.一种蛋白，其特征在于，该蛋白的氨基酸序列如seq id no.5或seq id no.9所示。

2.一种核酸分子，其特征在于，所述的核酸分子编码权利要求1所述的蛋白。

3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如seq idno.6或seq id no.10所示。

4.一种载体，其特征在于，所述载体包含权利要求2～3任一项所述的核酸分子。

5.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求2～3任一项所述的核酸分子或权利要求4所述的载体。

6.根据权利要求5所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞为原核生物细胞。

7.根据权利要求6所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞为大肠杆菌细胞。

8.权利要求1所述的蛋白，或权利要求2～3任一项所述的核酸分子，或权利要求4所述的载体，或权利要求5～7任一项所述的重组细胞在抗草地贪夜蛾或制备抗草地贪夜蛾制剂或培育抗草地贪夜蛾植物中的应用。