一种病毒保存液及其制备方法与流程

本申请涉及病毒保存，特别是涉及一种病毒保存液及其制备方法。

背景技术：

1、病毒是一种没有细胞结构的特殊生物。它们的结构非常简单，由蛋白质外壳和内部的遗传物质组成。病毒不能独立生存，必须生活在其他生物的细胞内，一旦离开活细胞就不表现任何生命活动迹象。

2、病毒从结构上分为：rna病毒和dna病毒；病毒核酸的检测，适用于人类疾病的早期诊断、疑难样本的辅助诊断、耐药性监测、病程监控及预测、指导抗病毒治疗及疗效判定等重要领域。因此，保存完整的病毒核酸对下游的基因分析具有重要的意义。然而，病毒的核酸比较容易降解，尤其是rna病毒，非常容易被广泛存在的内源性或者外源性rna酶降解。并且，rna酶性质稳定，即使高温高压处理也无法使其失活，所以病毒核酸需要严格的储存条件。

3、目前用于对灭活后的病毒核酸样本进行保存的病毒存放液，虽然能够通过核酸酶抑制剂来抑制病毒核酸的降解，但是其在使用过程中通常会配合蛋白变性剂使用，导致病毒核酸样本在保存过程中会不可避免的出现功能蛋白破坏以及核酸片段丢失的情况，从而使得病毒核酸的保存质量较差，降低了后续核酸检测结果的精准度。

4、因此，如何更有效的保障病毒核酸的保存质量，仍然是病毒保存技术领域的研究重点和难点。

技术实现思路

1、本申请的目的是提供一种新的病毒保存液及其制备方法。

2、为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：

3、本申请的一方面公开了一种病毒保存液，每1l病毒保存液中含有异硫氰酸胍100-400g、十二烷基磺酸钠1-5g、triton x-1000.1-1ml、tris-hcl缓冲液5-50ml、柠檬酸三钠二水10-30g、二硫苏糖醇1-5g、酚红1-10mg，余量为水。

4、需要说明的是，本申请的病毒保存液，通过各组分的有机协同作用，能够在常温下实现病毒的长期保存，并且能够很好的保障病毒核酸质量，为病毒后续的核酸检测奠定基础。其中，异硫氰酸胍不仅可以迅速裂解细胞释放病毒，还能使蛋白质变性将病毒核酸释放出来，同时还能使rna酶失活，防止病毒rna在保存液中降解；十二烷基磺酸钠在保存液中可协助破坏细胞结构释放病毒，抑制rna病毒核酸的损伤，提高了病毒的保存效果；二硫苏糖醇在保存液中发挥还原作用，破坏蛋白质的二硫键结构使rna酶失活，提高病毒的保存效果；triton x-100是一种非离子型表面活性剂，帮助分解蛋白酶，能够溶解脂质以增加细胞膜的通透性，还能提高二硫苏糖醇和异硫氰酸胍的稳定性；柠檬酸三钠二水作为保存液中的金属螯合剂，降低保存液中的金属离子对病毒核酸的影响；tris-hcl缓冲液和酚红，可以使使保存液的ph保持在一定范围内，保证样本的稳定性；本申请中各组分协同作用可以使病毒核酸充分释放，并且可以在常温环境下长时保持样本核酸的稳定，从而保证后续病毒核酸检测的准确性。

5、本申请的一种实现方式中，病毒保存液的ph值为7-10。

6、本申请的一种实现方式中，tris-hcl缓冲液的摩尔溶度为2mol/l。

7、本申请的一种实现方式中，tris-hcl缓冲液的ph值为7.2。

8、本申请的另一面公开了本申请的病毒保存液的制备方法，包括将异硫氰酸胍、十二烷基磺酸钠、柠檬酸三钠二水、二硫苏糖醇、酚红溶于部分水中，加入triton x-100、tris-hcl缓冲液，混匀后，加水定容至1l，即获得本申请的病毒保存液。

9、本申请的一种实现方式中，本申请的制备方法还包括对定容后的溶液进行过滤除菌。

10、由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：

11、本申请的病毒保存液，通过各组分的有机结合、协同作用，不仅能够使病毒核酸充分释放，并且还能够在常温环境下长时保持样本核酸的稳定，进而保障后续病毒核酸检测的准确性。

技术特征：

1.一种病毒保存液，其特征在于：每1l病毒保存液中含有异硫氰酸胍100-400g、十二烷基磺酸钠1-5g、triton x-1000.1-1ml、tris-hcl缓冲液5-50ml、柠檬酸三钠二水10-30g、二硫苏糖醇1-5g、酚红1-10mg，余量为水。

2.根据权利要求1所述的病毒保存液，其特征在于：所述病毒保存液的ph值为7-10。

3.根据权利要求1所述的病毒保存液，其特征在于：所述tris-hcl缓冲液的摩尔溶度为2mol/l。

4.根据权利要求3所述的病毒保存液，其特征在于：所述tris-hcl缓冲液的ph值为7.2。

5.权利要求1-4任一项所述的病毒保存液的制备方法，其特征在于：包括将异硫氰酸胍、十二烷基磺酸钠、柠檬酸三钠二水、二硫苏糖醇、酚红溶于部分水中，加入triton x-100、tris-hcl缓冲液，混匀后，加水定容至1l，即获得所述病毒保存液。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：还包括对定容后的溶液进行过滤除菌。

技术总结
本申请公开了一种病毒保存液及其制备方法。本申请的病毒保存液，每1L病毒保存液中含有异硫氰酸胍100‑400g、十二烷基磺酸钠1‑5g、Triton x‑1000.1‑1mL、Tris‑HCl缓冲液5‑50mL、柠檬酸三钠二水10‑30g、二硫苏糖醇1‑5g、酚红1‑10mg，余量为水。本申请的病毒保存液，通过各组分的有机结合、协同作用，不仅能够使病毒核酸充分释放，并且还能够在常温环境下长时保持样本核酸的稳定，保障后续病毒核酸检测的准确性。

技术研发人员：曾智驰,陈建国,甘良波,李翠萍,许诗敏,陈川
受保护的技术使用者：深圳乐土生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10