一种虎斑乌贼内脏多糖的制备方法及其应用

本发明属于虎斑乌贼内脏多糖提取。更具体地，涉及一种虎斑乌贼内脏多糖的制备方法及其应用。

背景技术：

1、虎斑乌贼(sepia pharaonis)隶属软体动物门(mollusca)、头足纲(cephalopoda)、十腕目(decapoda)、乌贼科(sepiidae)、乌贼属(sepia)，主要分布在印度洋、西太平洋及我国的南海海域，常栖息于水深15～100m的地方，个体大，雄体可达5kg，因其营养丰富，口感良好，其已成为我国主要的水产加工原料。据统计，全国每年加工虎斑乌贼40～50万吨。虎斑乌贼内脏约占其体重的30％左右，并且其中含有大量蛋白质、脂质，牛磺酸、软骨素、多糖等活性物质，但是在虎斑乌贼产品加工过程中其内脏往往作为废弃物扔掉，造成极大的资源浪费。

2、现有研究表明乌贼多糖具有免疫增强、抗氧化、抗肿瘤以及抗菌防腐等生物活性。因此，将虎斑乌贼内脏进行综合利用，提取活性多糖，变废为宝，可以极大地提高虎斑乌贼的经济附加值。目前对于虎斑乌贼内脏多糖的研究较少，孙玉林等通过盐法提取虎斑乌贼内脏多糖，最终多糖得率为1.08％，且具有优异的抗氧化及吸吸湿保湿性能(孙玉林,罗琴琴,冯梓欣,文菁,赵娟,田丽,许乐乐,李永芹,李锐,陈道海.响应面法优化虎斑乌贼内脏多糖提取工艺及抗氧化活性、吸湿保湿性能研究[j].食品工业科技,2018,39(10):182-189.)，但其得率和活性均有限，有待开发更多活性，拓宽其应用渠道，增强经济效益。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服现有技术对虎斑乌贼内脏多糖得提取得率和活性有限的缺陷和不足，提供一种虎斑乌贼内脏多糖的制备方法，利用本发明所述制备方法制备得到的多糖得率较高，且免疫调节和降血脂活性较好。

2、本发明的目的是提供一种虎斑乌贼内脏多糖或本发明所述制备方法所得虎斑乌贼内脏多糖在制备具有降血脂作用药物中的应用。

3、本发明的另一目的是提供一种本发明所述制备方法所得虎斑乌贼内脏多糖在制备具有免疫调节作用药物中的应用。

4、本发明上述目的通过以下技术方案实现：

5、一种虎斑乌贼内脏多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

6、s1.虎斑乌贼内脏除去脂溶性物质后，干燥，得虎斑乌贼内脏干粉；

7、s2.取步骤s1虎斑乌贼内脏干粉，在30～70℃下用0.1～0.5mol/l naoh溶液浸提，沉淀过滤，浓缩，浓缩液醇沉，脱蛋白，透析，干燥，得虎斑乌贼内脏多糖。

8、优选地，步骤s2中，所述naoh溶液的浓度为0.1～0.2mol/l；更优选地，所述naoh溶液的浓度为0.2mol/l。

9、进一步地，步骤s2中，所述虎斑乌贼内脏干粉与naoh溶液的质量体积比为1:10～30g/ml。

10、优选地，步骤s2中，所述虎斑乌贼内脏干粉与naoh溶液的质量体积比为1:15～25g/ml；更优选地，所述虎斑乌贼内脏干粉与naoh溶液的质量体积比为1:20g/ml。

11、优选地，步骤s2中，所述浸提温度为40～60℃；更优选地，所述浸提温度为50℃。

12、进一步地，步骤s2中，所述浸提的时间为1.5～3.5h。

13、优选地，所述浸提的时间为2～3h；更优选地，所述浸提的时间为2.5h。

14、进一步地，步骤s2中，所述醇沉的具体条件是：浓缩液中加乙醇至乙醇体积分数为70～80％，于4～8℃沉淀24～48h，离心，沉淀加水复溶。

15、优选地，步骤s2中，所述醇沉的具体条件是：浓缩液中加乙醇至乙醇体积分数为75％，于4沉淀24h，离心，沉淀加水复溶。

16、进一步地，步骤s2中，所述脱蛋白方法为sevage试剂法、等电点法或三氯乙酸法。

17、优选地，所述脱蛋白方法为sevage试剂法；具体地，取醇沉后的溶液与sevage试剂按体积比为1:1混合，震荡，离心，取上清液，重复处理5次，即得脱蛋白溶液；其中，sevag试剂为氯仿:正丁醇＝4:1(v/v)的混合溶液。

18、优选地，步骤s2中，所述透析为在4℃透析48h，期间每6h换一次水；所述透析袋的规格是截留分子量为3500da。

19、进一步地，步骤s1中，除去脂溶性物质的具体步骤为：取虎斑乌贼内脏，加水打成匀浆状，依次用乙醇、丙酮和石油醚浸提，最后过滤取沉淀。

20、优选地，除去脂溶性物质的具体步骤为：将虎斑乌贼内脏的匀浆先用无水乙醇(v无水乙醇:v脂溶物＝3:1)浸提3次，过滤除去无水乙醇，将沉淀再用丙酮(v丙酮:v脂溶物＝3:1)浸提3次，过滤除去丙酮；最后用石油醚(v石油醚:v脂溶物＝3:1)浸提3次，过滤除去石油醚，置于通风橱过夜挥干溶剂后，采用冷冻干燥机进行冷冻干燥，最后用中草药粉碎机进行粉碎，得到虎斑乌贼内脏干粉。

21、另外地，本发明保护虎斑乌贼内脏多糖或本发明所述虎斑乌贼内脏多糖的制备方法在制备具有降血脂作用药物中的应用。

22、同时，本发明保护所述虎斑乌贼内脏多糖的制备方法在制备具有免疫调节作用药物中的应用。

23、本发明具有以下有益效果：

24、本发明提供了一种虎斑乌贼内脏多糖的制备方法及其应用，本发明依次将虎斑乌贼内脏预处理、碱法提取、乙醇醇沉、脱蛋白、透析等步骤，最后得到虎斑乌贼内脏多糖粉末。动物实验表明，虎斑乌贼内脏多糖能降低甘油三酯(tg)、总胆固醇(tc)和低密度脂蛋白(ldl-c)水平，升高高密度脂蛋白(hdl-c)水平，从而改善高血脂症状；并且能在细胞水平上促进免疫因子的分泌，调节免疫功能。可见，本发明制备得到的虎斑乌贼内脏多糖具有较好的降血脂和提高免疫的功效，能为海洋新型药品或功能性食品的研发提供理论依据和物质基础。

技术特征：

1.一种虎斑乌贼内脏多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述naoh溶液的浓度为0.1～0.2mol/l。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述虎斑乌贼内脏干粉与naoh溶液的质量体积比为1:10～30g/ml。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述浸提温度为40～60℃。

5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述浸提的时间为1.5～3.5h。

6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述醇沉的具体条件是：浓缩液中加乙醇至乙醇体积分数为70～80％，于4～8℃沉淀24～48h，离心，沉淀加水复溶。

7.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述脱蛋白方法为sevage试剂法、等电点法或三氯乙酸法。

8.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤s1中，除去脂溶性物质的具体步骤为：取虎斑乌贼肝脏，加水打成匀浆状，依次用乙醇、丙酮和石油醚浸提，最后过滤取沉淀。

9.虎斑乌贼内脏多糖或权利要求1～8任一所述制备方法所得虎斑乌贼内脏多糖在制备具有降血脂作用药物中的应用。

10.权利要求1～8任一所述制备方法所得虎斑乌贼内脏多糖在制备具有免疫调节作用药物中的应用。

技术总结
本发明属于虎斑乌贼内脏多糖提取技术领域，具体涉及一种虎斑乌贼内脏多糖的制备方法及其应用。本发明通过斑乌贼内脏预处理、碱法提取、乙醇醇沉、脱蛋白、透析、干燥等步骤，最后得到虎斑乌贼内脏多糖粉末，原料来源丰富，生产成本低，制备工艺简单；并且所得多糖具有较好的降血脂和提高免疫的功效，能为海洋新型药品或功能性食品的研发提供理论依据和物质基础。

技术研发人员：孙玉林,罗琴琴,黄珊珊,蒙卓莹,劳晓婷,王粤林
受保护的技术使用者：岭南师范学院
技术研发日：
技术公布日：2024/3/31