肽化合物的制造方法与流程

本发明涉及肽化合物的制造方法。

背景技术：

1、肽是多个氨基酸连接而成的分子，其在生物进行生命活动方面发挥着不可或缺的作用。随着生物学、化学的发展，肽的理解加深，并且积极地进行了以创造出新型药物为目标的天然肽的有效利用、基于肽的人工设计的功能性肽的研究、开发(非专利文献1)。尤其是报道了肽的环化、构成氨基酸的n-烷基化、特别是n-甲基化有助于膜透过性、代谢稳定性提高(非专利文献2、非专利文献3)、成为细胞内转移、口服剂的开发的关键的类似药物的环状肽结构的见解、考察，肽制药中的该结构的重要性的认知度正在提高(专利文献1)。

2、肽的合成通过形成酰胺键而延伸至所需序列得以实现。作为更具体的方法，可举出液相法和固相法(非专利文献4)。其中，固相法是通过将聚合物树脂(固相合成用树脂)作为固定相，使氨基酸依次键合从而合成目标肽的方法(非专利文献5)。此外，近年来，以纤维素等的膜为固定相的肽阵列技术不断发展，作为迅速地自动合成少量多检体的肽的技术而备受关注(非专利文献6)。

3、现有技术文献

4、专利文献

5、专利文献1：wo2013/100132

6、专利文献2：wo2018/225851

7、非专利文献

8、非专利文献1：future med.chem.，2009，1，1289-1310.

9、非专利文献2：acc chem.res.，2008，41，1331-1342.

10、非专利文献3：angew.chem.int.ed.，2013，52，254-269.

11、非专利文献4：amino acids，peptides and proteins in organicchemistry：building blocks，catalysis and coupling chemistry，volume 3，2011.

12、非专利文献5：solid phase peptide synthesis(bachem公司发行)[2022年1月18日检索]，网络＜url：https：//www.bachem.com/wp-admin/admin-ajax.php？juwpfisadmin＝false&action＝wpfd&task＝file.download&wpfd_category_id＝180&wpfd_file_id＝213490&token＝&preview＝1>

13、非专利文献6：biotechnology and bioprocess engineering，2016，21，119-127.

14、非专利文献7：methods mol.biol.，2009，570，157-174.

15、非专利文献8：org.lett.2021，23，6900-6904.

技术实现思路

1、发明要解决的课题

2、在肽固相合成中，将纤维素等膜作为固定相的肽阵列技术不断发展，作为迅速地自动合成少量多检体的肽的技术而备受关注(非专利文献6)。因此，本发明人等为了合成类似药物的肽而尝试将其应用于以膜为固定相的肽阵列技术。然而，由于类似药物的肽含有大量n-烷基氨基酸，所以酰胺化反应的合成难度高，在使用了肽阵列的合成中应用了现有的酰胺化条件，结果均为低收率，明确了不存在充分满足的酰胺化的条件。例如，在与膜固相键合的n-甲基苯丙氨酸与接下来的fmoc-正亮氨酸的酰胺化反应中，使用非专利文献7中记载的反应条件，结果反应转化率为3～4％。另外，参考包含n-取代氨基酸的肽的合成方法(专利文献2)中记载的、使用二异丙基碳二亚胺(dic)和1－羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)的条件实施，结果反应转化率为50～64％。

3、详细研究了反应的详细情况，结果确认到反应体系中的活性酯的失活。出于提高反应转化率的目的，将试剂浓度设为2倍进行了研究，结果析出了n，n’-二异丙基脲的晶体。在肽阵列技术中，通过将送液自动化而实现迅速化和效率化，但由于晶体析出而引起堵塞和/或伴随清洗不足的杂质的增加，因此难以在现有条件下直接应用高试剂浓度的条件。

4、一方面，本发明的课题在于，在肽合成法的、特别是缩合反应的工序中提高反应转化率。另外，一方面，本发明的课题在于提供一种使用通过避免晶体析出而能够应用于自动合成的酰胺化条件从而高效地制造高纯度的肽化合物的方法。

5、用于解决课题的手段

6、鉴于上述情况，本发明人等进行了深入研究，结果完成了本发明。本发明的方法并不限定于以膜为固定相的肽阵列技术，是也能够应用于以聚合物树脂(固相合成用树脂)为固定相的固相合成的方法。

7、例如，本发明提供以下的[a1]～[a64]。

8、[a 1]一种基于固相法的肽化合物的制造方法，其包括：

9、准备工序，准备担载于固相的、具有氨基的第一氨基酸或具有氨基的第一肽；以及

10、缩合工序，使第一氨基酸或第一肽与具有保护氨基和/或保护羟基、以及羧基的第二氨基酸，或者与具有保护氨基和/或保护羟基、以及羧基的第二肽在下述通式(a)所示的至少1种碳二亚胺系缩合剂和添加剂的存在下进行缩合，

11、ra-n＝c＝n-rb···(a)

12、(式中，ra为c4～c10仲烷基或叔烷基，rb为c2～c10烷基、c6～c10芳基或c7～c14芳基烷基，ra和rb中的各基团可以被独立地选自卤素、c1～c6烷氧基、二c1～c6烷基氨基、或4～8元环状氨基中的1个或多个基团取代。)。

13、[a2]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为c4～c10仲烷基。

14、[a2-1]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为c4～c8仲烷基。

15、[a2-2]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为具有不对称碳的c4～c8仲烷基或叔烷基。

16、[a2-3]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为具有不对称碳的c4～c8仲烷基。

17、[a2-4]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为具有不对称碳的c4～c6仲烷基。

18、[a2-5]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为1-甲基庚基、1-甲基丁基、1-乙基丙基或仲丁基。

19、[a2-6]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为仲丁基。

20、[a3]根据[a1]或[a2]中记载的方法，其中，rb为c3～c10仲烷基或叔烷基、c6～c10芳基或c7～c14芳基烷基，rb中的各基团可以被独立地选自卤素、c1～c6烷氧基、二c1～c6烷基氨基、或4～8元环状氨基中的1个或多个基团取代。

21、[a3-1]根据[a1]或[a2]中记载的方法，其中，rb为c3～c10仲烷基或叔烷基。

22、[a3-2]根据[a1]或[a2]中记载的方法，其中，rb为c3～c10仲烷基或叔烷基、或者c7～c14芳基烷基。

23、[a3-3]根据[a1]或[a2]中记载的方法，其中，rb为c3～c10仲烷基、或者c7～c10芳基烷基。

24、[a3-4]根据[a1]或[a2]中记载的方法，其中，rb为c3～c6仲烷基。

25、[a3-5]根据[a1]或[a2]中记载的方法，其中，rb为1-甲基苄基、1-甲基庚基、1-甲基丁基、1-乙基丙基或仲丁基。

26、[a3-6]根据[a1]或[a2]中记载的方法，其中，rb为仲丁基。

27、[a4]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为c4～c8仲烷基或叔烷基，rb为c4～c10仲烷基或叔烷基、或c7～c14芳基烷基。

28、[a4-1]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为c4～c8仲烷基，rb为c4～c10仲烷基、或c7～c14芳基烷基。

29、[a4-2]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为c4～c6仲烷基，rb为c4～c8仲烷基、或c7～c10芳基烷基。

30、[a5]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为具有不对称碳的c4～c8仲烷基或叔烷基，rb为c3～c10仲烷基或叔烷基。

31、[a5-1]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为具有不对称碳的c4～c8仲烷基，rb为c4～c10仲烷基、或c7～c14芳基烷基。

32、[a5-2]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为具有不对称碳的c4～c8仲烷基，rb为c4～c10仲烷基、或c7～c10芳基烷基。

33、[a5-3]根据[a1]中记载的方法，其中，ra为具有不对称碳的c4～c6仲烷基，rb为c4～c8仲烷基、或c7～c10芳基烷基。

34、[a6]根据[a1]～[a5]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂包含选自n，n’-二仲丁基碳二亚胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)、n，n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)、n，n’双(1-乙基丙基)碳二亚胺(ss29)和n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)中的至少1种。

35、[a6-1]根据[a1]～[a5]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂包含选自n，n’-二仲丁基碳二亚胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)、n，n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)、或n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)中的至少1种。

36、[a6-2]根据[a1]～[a5]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n，n’-二仲丁基碳二亚胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)、n，n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)、或n’-(1-乙基丙基)-n-(1－甲基丁基)碳二亚胺(ss30)。

37、[a6-3]根据[a1]～[a5]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n，n’-二仲丁基碳二亚胺(dsbc)。

38、[a6-4]根据[a1]～[a5]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)。

39、[a6-5]根据[a1]～[a5]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)。

40、[a6-6]根据[a1]～[a5]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n,n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)。

41、[a6-7]根据[a1]～[a5]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n,n’-双(1-乙基丙基)碳二亚胺(ss29)。

42、[a6-8]根据[a1]～[a5]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)。

43、[a7]根据[a1]～[a6]中任一项记载的方法，其中，添加剂为选自1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)、1-羟基苯并三唑(hobt)、3，4-二氢-3-羟基-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪(hoobt)、氰基(羟基亚氨基)乙酸乙酯(oxyma)、和5-(羟基亚氨基)-1，3-二甲基嘧啶-2，4，6(1h，3h，5h)-三酮(oxyma b)中的至少1种。

44、[a8]根据[a1]～[a6]中任一项记载的方法，其中，添加剂为选自hoat、hoobt和oxyma中的至少1种。

45、[a9]根据[a1]～[a6]中任一项记载的方法，其中，添加剂为hoat、hoobt、或oxyma。

46、[a10]根据[a1]～[a9]中任一项记载的方法，其中，缩合工序在溶剂中进行，溶剂中的碳二亚胺系缩合剂的浓度为0.4mol/l以上、0.5mol/l以上、0.6mol/l以上、或0.7mol/l以上。

47、[a11]根据[a1]～[a10]中任一项记载的制造方法，其中，缩合工序在溶剂中进行，溶剂中的碳二亚胺系缩合剂的浓度为4.0mol/l以下、3.0mol/l以下、2.0mol/l以下、或1.0mol/l以下。

48、[a12]根据[a1]～[a11]中任一项记载的制造方法，其中，缩合工序在溶剂中进行，溶剂中的碳二亚胺系缩合剂的浓度为0.4～4.0mol/l、0.5～3.0mol/l、0.6～2.0mol/l、或0.7～1.0mol/l。

49、[a13]根据[a1]～[a11]中任一项记载的制造方法，其中，缩合工序在溶剂中进行，溶剂中的碳二亚胺系缩合剂的浓度为0.7～1.0mol/l。

50、[a14]根据[a1]～[a13]中任一项记载的制造方法，其中，固相为膜或固相合成用树脂。

51、[a15]根据[a1]～[a13]中任一项记载的制造方法，其中，固相为膜。

52、[a16]根据[a15]中记载的方法，其中，膜为纤维素膜、聚丙烯膜、或聚氨基乙基甲基丙烯酰胺膜。

53、[a17]根据[a15]中记载的方法，其中，膜为纤维素膜。

54、[a18]根据[a1]～[a13]中任一项记载的制造方法，其中，固相为固相合成用树脂。

55、[a19]根据[a 18]中记载的方法，其中，固相合成用树脂为氯三苯甲基(ctc)树脂、三苯甲基(trt)树脂、sasrin树脂、rink酰胺树脂、merrifield树脂、或wang树脂。

56、[a20]根据[a 18]中记载的方法，其中，固相合成用树脂为氯三苯甲基(ctc)树脂。

57、[a21]根据[a1]～[a20]中任一项记载的方法，其中，固相与第一氨基酸或第一肽经由光裂解性部位、二硫键、或酸不稳定部位进行键合。

58、[a21-1]根据[a1]～[a20]中任一项记载的方法，其中，固相与第一氨基酸或第一肽经由光裂解性部位进行键合。

59、[a21-2]根据[a1]～[a20]中任一项记载的方法，其中，固相与第一氨基酸或第一肽经由二硫键进行键合。

60、[a21-3]根据[a1]～[a20]中任一项记载的方法，其中，固相与第一氨基酸或第一肽经由酸不稳定部位进行键合。

61、[a22]根据[a21-1]中记载的方法，其中，光裂解性部位具有硝基藜芦氧基羰基残基或香豆素残基。

62、[a22-1]根据[a21-1]中记载的方法，其中，光裂解性部位为硝基藜芦氧基羰基残基。

63、[a23]根据[a21-3]中记载的方法，其中，酸不稳定部位具有三苯甲基酯结构、氯三苯甲基酯结构、烷氧基苄基醚结构、三烷氧基苄基氨基羰基结构、二烷氧基苯基-烷氧基苯基甲基氨基羰基结构、或烷氧基咕吨-9-基氨基羰基结构。

64、[a23-1]根据[a21-3]中记载的方法，其中，酸不稳定部位具有氯三苯甲基酯结构。

65、[a24]根据[a1]～[a23]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用1.0当量以上、1.1当量以上、或1.2当量以上的碳二亚胺系缩合剂。

66、[a25]根据[a1]～[a24]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用5.0当量以下、4.0当量以下、3.0当量以下、2.0当量以下、或1.5当量以下的碳二亚胺系缩合剂。

67、[a26]根据[a1]～[a25]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用1.0～5.0当量、1.1～4.0当量、1.1～3.0当量、1.2～2.0当量、或1.2～1.5当量的碳二亚胺系缩合剂。

68、[a27]根据[a1]～[a25]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用1.2～1.5当量的碳二亚胺系缩合剂。

69、[a28]根据[a1]～[a27]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用0.01当量、0.05当量、0.1当量、0.2当量以上、或0.3当量以上的添加剂。

70、[a29]根据[a1]～[a28]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用1.0当量以下、0.9当量以下、0.8当量以下、或0.7当量以下的添加剂。

71、[a30]根据[a1]～[a29]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用0.05～1.0当量、0.1～0.9当量、0.2～0.8当量、或0.3～0.7当量的添加剂。

72、[a31]根据[a1]～[a29]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用0.3～0.7当量的添加剂。

73、[a32]根据[a1]～[a31]中任一项记载的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸为非天然氨基酸。

74、[a33]根据[a1]～[a32]中任一项记载的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸为α，α-二取代氨基酸、β-支链氨基酸、或n-烷基氨基酸(其中，n-烷基氨基酸中的烷基可以被独立地选自c3～c6环烷基、c2～c6烯基、c2～c6炔基、或c6～c10芳基中的1个或多个基团取代)。

75、[a34]根据[a1]～[a32]中任一项记载的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸为烷基的碳原子数为1～8的n-烷基氨基酸(其中，烷基可以被独立地选自卤素、氰基、c3～c6环烷基、c2～c6烯基、c2～c6炔基、或c6～c10芳基中的1个或多个基团取代)。

76、[a35]根据[a1]～[a32]中任一项记载的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸为n-烷基氨基酸、烷基的碳原子数为1～8的n-烷基氨基酸、烷基的碳原子数为1～6的n-烷基氨基酸、烷基的碳原子数为1～3的n-烷基氨基酸、或n-甲基氨基酸。

77、[a36]根据[a1]～[a32]中任一项记载的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸为n-甲基氨基酸。

78、[a37]根据[a1]～[a36]中任一项记载的方法，其中，第二氨基酸或第二肽的c末端的氨基酸为非天然氨基酸。

79、[a38]根据[a1]～[a37]中任一项记载的方法，其中，第二氨基酸或第二肽的c末端的氨基酸为α，α-二取代氨基酸、β-支链氨基酸、或n-烷基氨基酸。

80、[a39]根据[a1]～[a38]中任一项记载的方法，其中，保护氨基中的保护基为下述式(1)所示的基团，

81、[化学式1]

82、

83、(式中，r1～r8独立地选自氢、c1-c8烷基、c1-c8氟烷基、卤素、磺基和三甲基甲硅烷基，r9～r10独立地为氢或甲基)。

84、[a40]根据[a1]～[a38]中任一项记载的方法，其中，保护氨基中的保护基为9-芴基甲基氧基羰基(fmoc)基、fmoc(2，7tb)基、fmoc(1me)基、fmoc(2f)基、fmoc(2，7br)基、mio-fmoc基、dio-fmoc基、tdf-fmoc基、fmoc(2tms)基、fmoc(2so3h)基、sm-fmoc基、或rm-fmoc基。

85、[a41]根据[a1]～[a38]中任一项记载的方法，其中，保护氨基中的保护基为fmoc基。

86、[a42]根据[a 1]～[a41]中任一项记载的方法，其中，缩合工序在溶剂中进行。

87、[a43]根据[a42]中记载的方法，其中，溶剂包含选自酰胺系溶剂、脲系溶剂、醚系溶剂、卤素系溶剂、腈系溶剂和苯系溶剂中的至少1种。

88、[a44]根据[a43]中记载的方法，其中，溶剂为酰胺系溶剂。

89、[a45]根据[a44]中记载的方法，其中，酰胺系溶剂选自n,n-二甲基甲酰胺(dmf)、n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)、二甲基乙酰胺(dma)、n-乙基-2-吡咯烷酮(nep)、n-丁基-2-吡咯烷酮(nbp)和甲酰胺。

90、[a46]根据[a43]中记载的方法，其中，溶剂为脲系溶剂。

91、[a47]根据[a46]中记载的方法，其中，脲系溶剂选自1，3-二甲基-2-咪唑啉酮(dmi)和n,n’-二甲基丙烯基脲(dmpu)。

92、[a48]根据[a43]中记载的方法，其中，溶剂为醚系溶剂。

93、[a49]根据[a48]中记载的方法，其中，醚系溶剂选自四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、4-甲基四氢吡喃。

94、[a50]根据[a43]中记载的方法，其中，溶剂为卤素系溶剂。

95、[a51]根据[a50]中记载的方法，其中，卤素系溶剂选自二氯甲烷、1，2-二氯乙烷。

96、[a52]根据[a43]中记载的方法，其中，溶剂为腈系溶剂。

97、[a53]根据[a52]中记载的方法，其中，腈系溶剂为乙腈。

98、[a54]根据[a43]中记载的方法，其中，溶剂为苯系溶剂。

99、[a55]根据[a54]中记载的方法，其中，苯系溶剂选自苯、甲苯、二甲苯。

100、[a56]根据[a1]～[a55]中任一项记载的方法，其中，缩合工序在0℃～100℃、10℃～80℃、10℃～60℃、10℃～50℃、10℃～40℃、10℃～35℃、15℃～60℃、20℃～60℃、20℃～40℃、或25℃～40℃下进行。

101、[a57]根据[a1]～[a55]中任一项记载的方法，其中，缩合工序在20℃～60℃下进行。

102、[a58]根据[a1]～[a57]中任一项记载的方法，其中，将缩合工序重复2次以上。

103、[a59]根据[a1]～[a57]中任一项记载的方法，其中，将缩合工序重复2次。

104、[a60]根据[a1]～[a59]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序之后还包括将担载于固相的、第二氨基酸或第二肽中的保护氨基和/或保护羟基的保护基进行脱保护的脱保护工序。

105、[a61]根据[a60]中记载的方法，其中，在缩合工序与脱保护工序之间还包括对固相进行清洗的清洗工序。

106、[a62]根据[a60]或[a61]中记载的方法，其中，将缩合工序和脱保护工序重复多次(其中，多次缩合工序中使用的多个第二氨基酸和/或第二肽分别可以相同也可以不同)。

107、[a63]上述式(a)所示的碳二亚胺系缩合剂在[a1]～[a62]中任一项记载的方法中的应用。

108、[a64]dsbc在[a1]～[a62]中任一项记载的方法中的应用。

109、关于上述通式(a)中的ra和rb的组合，从在反应体系中活性酯能够长时间维持高浓度、在缩合反应的工序中能够进一步提高反应转化率的观点出发，优选[a4]～[a4-2]，从即使在高浓度下也能够通过高度避免源自碳二亚胺的脲的析出而在自动合成中也能够高效地酰胺化的观点出发，优选[a5]～[a5-3]。

110、在[a1]～[a64]中，对基于固相法的肽化合物的制造方法进行了说明，但这些制造方法也能够应用于液相法。即，本发明的一个方面提供以下的[a1’]。[a1’]也可以包括[a2]～[a64]中的涉及除固相以外的特征。

111、[a1’]一种基于液相法的肽化合物的制造方法，其包括：

112、准备工序，准备具有氨基的第一氨基酸或具有氨基的第一肽；以及

113、缩合工序，使第一氨基酸或第一肽与具有保护氨基和/或保护羟基、以及羧基的第二氨基酸，或者与具有保护氨基和/或保护羟基、以及羧基的第二肽在上述通式(a)所示的至少1种碳二亚胺系缩合剂和添加剂的存在下进行缩合。

114、根据该方法，能够以高反应转化率得到目标肽化合物。

115、例如，本发明还提供以下的[b1]～[b63]。

116、[b1]一种基于固相法的肽化合物的制造方法，其包括：

117、准备工序，准备担载于固相的、具有n-烷基氨基的第一氨基酸或在n末端具有n-烷基氨基的第一肽；以及

118、缩合工序，使第一氨基酸或第一肽与具有保护氨基和/或保护羟基、以及羧基的第二氨基酸，或者与具有保护氨基和/或保护羟基、以及羧基的第二肽在下述通式(a’)所示的至少1种碳二亚胺系缩合剂和添加剂的存在下，在溶剂中进行缩合，溶剂中的碳二亚胺系缩合剂的浓度为0.4～4.0mol/l，

119、ra’-n＝c＝n-rb’...(a’)

120、(式中，ra’为c3～c10烷基、c6～c10芳基或c7～c14芳基烷基，rb’为c1～c10烷基、c6～c10芳基或c7～c14芳基烷基，ra’和rb’中的各基团可以被独立地选自卤素、c1～c6烷氧基、二c1～c6烷基氨基、或4～8元环状氨基中的1个或多个基团取代。其中，ra’中的总碳原子数为4以上。)。

121、[b2]根据[b1]中记载的方法，其中，ra’为c4～c10烷基、c4～c6烷基、或c4烷基。

122、[b3]根据[b1]或[b2]中记载的方法，其中，rb’为c1～c10烷基、c6～c10芳基或c7～c14芳基烷基。

123、[b3-1]根据[b1]或[b2]中记载的方法，其中，rb’为c1～c10烷基。

124、[b3-2]根据[b1]或[b2]中记载的方法，其中，rb’为c2～c6烷基。

125、[b3-3]根据[b1]或[b2]中记载的方法，其中，rb’为c4烷基。

126、[b4]根据[b1]～[b3]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为选自dsbc、1-叔丁基-3-乙基碳二亚胺(tbec)、二叔丁基碳二亚胺(dtbc)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(edci)、n，n’-二仲丁基碳二亚胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)、n，n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)、n，n’-双(1-乙基丙基)碳二亚胺(ss29)和n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)中的至少1种。

127、[b4-1]根据[b1]～[b3]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为选自dsbc、1-叔丁基-3-乙基碳二亚胺(tbec)、二叔丁基碳二亚胺(dtbc)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(edci)中的至少1种。

128、[b5]根据[b1]～[b3]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂包含选自n,n’-二仲丁基碳二亚胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)、n，n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)、n，n’-双(1-乙基丙基)碳二亚胺(ss29)和n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)中的至少1种。

129、[b5-1]根据[b1]～[b3]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂包含选自n，n’-二仲丁基碳二亚胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)、n，n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)、或n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)中的至少1种。

130、[b5-2]根据[b1]～[b3]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n，n’-二仲丁基碳二亚胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)、n，n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)、或n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)。

131、[b5-3]根据[b1]～[b3]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为dsbc。

132、[b5-4]根据[b1]～[b3]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)。

133、[b5-5]根据[b1]～[b3]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)。

134、[b5-6]根据[b1]～[b3]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n，n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)。

135、[b5-7]根据[b1]～[b3]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n，n’-双(1-乙基丙基)碳二亚胺(ss29)。

136、[b5-8]根据[b1]～[b3]中任一项记载的方法，其中，碳二亚胺系缩合剂为n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)。

137、[b6]根据[b1]～[b5]中任一项记载的方法，其中，添加剂为选自hoat、hobt、hoobt和oxyma中的至少1种。

138、[b7]根据[b1]～[b5]中任一项记载的方法，其中，添加剂为选自hoat、hoobt和oxyma中的至少1种。

139、[b8]根据[b1]～[b5]中任一项记载的方法，其中，添加剂为hoat、hoobt或oxyma。

140、[b9]根据[b1]～[b8]中任一项记载的方法，其中，溶剂中的碳二亚胺系缩合剂的浓度为0.5mol/l以上、0.6mol/l以上、或0.7mol/l以上。

141、[b10]根据[b1]～[b9]中任一项记载的制造方法，其中，在缩合工序中，溶剂中的碳二亚胺系缩合剂的浓度为3.0mol/l以下、2.0mol/l以下、或1.0mol/l以下。

142、[b11]根据[b1]～[b10]中任一项记载的制造方法，其中，在缩合工序中，溶剂中的碳二亚胺系缩合剂的浓度为0.5～3.0mol/l、0.6～2.0mol/l、或0.7～1.0mol/l。

143、[b12]根据[b1]～[b10]中任一项记载的制造方法，其中，在缩合工序中，溶剂中的碳二亚胺系缩合剂的浓度为0.7～1.0mol/l。

144、[b13]根据[b1]～[b12]中任一项记载的制造方法，其中，固相为膜或固相合成用树脂。

145、[b14]根据[b1]～[b12]中任一项记载的制造方法，其中，固相为膜。

146、[b15]根据[b14]中记载的方法，其中，膜为纤维素膜、聚丙烯膜、或聚氨基乙基甲基丙烯酰胺膜。

147、[b16]根据[b14]中记载的方法，其中，膜为纤维素膜。

148、[b17]根据[b1]～[b12]中任一项记载的制造方法，其中，固相为固相合成用树脂。

149、[b18]根据[b17]中记载的方法，其中，固相合成用树脂为氯三苯甲基(ctc)树脂、三苯甲基(trt)树脂、sasrin树脂、rink酰胺树脂、merrifield树脂、或wang树脂。

150、[b19]根据[b17]中记载的方法，其中，固相合成用树脂为氯三苯甲基(ctc)树脂。

151、[b20]根据[b1]～[b19]中任一项记载的方法，其中，固相与第一氨基酸或第一肽经由光裂解性部位、二硫键、或酸不稳定部位进行键合。

152、[b20-1]根据[b1]～[b19]中任一项记载的方法，其中，固相与第一氨基酸或第一肽经由光裂解性部位而被担载。

153、[b20-2]根据[b1]～[b19]中任一项记载的方法，其中，固相与第一氨基酸或第一肽经由二硫键进行键合。

154、[b20-3]根据[b1]～[b19]中任一项记载的方法，其中，固相与第一氨基酸或第一肽经由酸不稳定部位进行键合。

155、[b21]根据[b20-1]中记载的方法，其中，光裂解性部位具有硝基藜芦氧基羰基残基、或香豆素残基。

156、[b21-1]根据[b20-1]中记载的方法，其中，光裂解性部位为硝基藜芦氧基羰基残基。

157、[b22]根据[b20-3]中记载的方法，其中，酸不稳定部位具有三苯甲基酯结构、氯三苯甲基酯结构、烷氧基苄基醚结构、三烷氧基苄基氨基羰基结构、二烷氧基苯基-烷氧基苯基甲基氨基羰基结构、或烷氧基咕吨-9-基氨基羰基结构。

158、[b22-1]根据[b20-3]中记载的方法，其中，酸不稳定部位具有氯三苯甲基酯结构。

159、[b23]根据[b1]～[b22]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用1.0当量以上、1.1当量以上、或1.2当量以上的碳二亚胺系缩合剂。

160、[b24]根据[b1]～[b23]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用5.0当量以下、4.0当量以下、3.0当量以下、2.0当量以下、或1.5当量以下的碳二亚胺系缩合剂。

161、[b25]根据[b1]～[b24]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用1.0～5.0当量、1.1～4.0当量、1.1～3.0当量、1.2～2.0当量、或1.2～1.5当量的碳二亚胺系缩合剂。

162、[b26]根据[b25]中记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用1.2～1.5当量的碳二亚胺系缩合剂。

163、[b27]根据[b1]～[b26]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用0.01当量以上、0.05当量以上、0.1当量以上、0.2当量以上、或0.3当量以上的添加剂。

164、[b28]根据[b1]～[b27]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用1.0当量以下、0.9当量以下、0.8当量以下、或0.7当量以下的添加剂。

165、[b29]根据[b1]～[b28]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用0.05～1.0当量、0.1～0.9当量、0.2～0.8当量、或0.3～0.7当量的添加剂。

166、[b30]根据[b1]～[b28]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序中，相对于第二氨基酸或第二肽，使用0.3～0.7当量的添加剂。

167、[b31]根据[b1]～[b30]中任一项记载的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸为非天然氨基酸。

168、[b32]根据[b1]～[b31]中任一项记载的方法，其中，第一氨基酸的n-烷基氨基中的烷基、或第一肽的n末端的氨基酸的n-烷基氨基中的烷基为c1～c10烷基、c1～c6烷基、或c1～c3烷基(此处的烷基可以被独立地选自卤素、氰基、c1～c6烷氧基、c3～c6环烷基、c2～c6烯基、c2～c6炔基、或c6～c10芳基中的1个或多个基团取代)。

169、[b33]根据[b1]～[b32]中任一项记载的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸是烷基的碳原子数为1～8的n-烷基氨基酸(其中，烷基可以被独立地选自卤素、氰基、c1～c6烷氧基、c3～c6环烷基、c2～c6烯基、c2～c6炔基、或c6～c10芳基中的1个或多个基团取代)。

170、[b34]根据[b1]～[b32]中任一项记载的方法，其中，第一氨基酸或第一肽的n末端的氨基酸为n-烷基氨基酸、烷基的碳原子数为1～8的n-烷基氨基酸、烷基的碳原子数为1～6的n-烷基氨基酸、烷基的碳原子数为1～3的n-烷基氨基酸、或n-甲基氨基酸。

171、[b35]根据[b1]～[b34]中任一项记载的方法，其中，第一氨基酸的n-烷基氨基中的烷基、或第一肽的n末端的氨基酸的n-烷基氨基中的烷基为甲基。

172、[b36]根据[b1]～[b35]中任一项记载的方法，其中，第二氨基酸或第二肽的c末端的氨基酸为非天然氨基酸。

173、[b37]根据[b1]～[b36]中任一项记载的方法，其中，第二氨基酸或第二肽的c末端的氨基酸为α，α-二取代氨基酸、β-支链氨基酸、或n-烷基氨基酸。

174、[b38]根据[b1]～[b37]中任一项记载的方法，其中，保护氨基中的保护基为下述式(1)所示的基团，

175、[化学式2]

176、

177、(式中，r1～r8独立地选自氢、c1-c8烷基、c1-c8氟烷基、卤素、磺基和三甲基甲硅烷基，r9～r10独立地为氢或甲基)。

178、[b39]根据[b1]～[b37]中任一项记载的方法，其中，保护氨基中的保护基为fmoc基、fmoc(2，7tb)基、fmoc(1me)基、fmoc(2f)基、fmoc(2，7br)基、mio-fmoc基、dio-fmoc基、tdf-fmoc基、fmoc(2tms)基、fmoc(2so3h)基、sm-fmoc基、或rm-fmoc基。

179、[b40]根据[b1]～[b37]中任一项记载的方法，其中，保护氨基中的保护基为fmoc基。

180、[b41]根据[b1]～[b40]中任一项记载的方法，其中，缩合工序在溶剂中进行。

181、[b42]根据[b41]中记载的方法，其中，溶剂包含选自酰胺系溶剂、脲系溶剂、醚系溶剂、卤素系溶剂、腈系溶剂和苯系溶剂中的至少1种。

182、[b43]根据[b42]中记载的方法，其中，溶剂为酰胺系溶剂。

183、[b44]根据[b43]中记载的方法，其中，酰胺系溶剂选自dmf、nmp、dma、nep、nbp和甲酰胺。

184、[b45]根据[b42]中记载的方法，其中，溶剂为脲系溶剂。

185、[b46]根据[b45]中记载的方法，其中，脲系溶剂选自dmi和dmpu。

186、[b47]根据[b42]中记载的方法，其中，溶剂为醚系溶剂。

187、[b48]根据[b47]中记载的方法，其中，醚系溶剂选自四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、4-甲基四氢吡喃。

188、[b49]根据[b42]中记载的方法，其中，溶剂为卤素系溶剂。

189、[b50]根据[b49]中记载的方法，其中，卤素系溶剂选自二氯甲烷、1，2-二氯乙烷。

190、[b51]根据[b42]中记载的方法，其中，溶剂为腈系溶剂。

191、[b52]根据[b51]中记载的方法，其中，腈系溶剂为乙腈。

192、[b53]根据[b42]中记载的方法，其中，溶剂为苯系溶剂。

193、[b54]根据[b53]中记载的方法，其中，苯系溶剂选自苯、甲苯、二甲苯。

194、[b55]根据[b1]～[b54]中任一项记载的方法，其中，缩合工序在0℃～100℃、10℃～80℃、10℃～60℃、10℃～50℃、10℃～40℃、10℃～35℃、15℃～60℃、20℃～60℃、20℃～40℃、或25℃～40℃下进行。

195、[b56]根据[b1]～[b54]中任一项记载的方法，其中，缩合工序在20℃～60℃下进行。

196、[b57]根据[b1]～[b56]中任一项记载的方法，其中，将缩合工序重复2次以上。

197、[b58]根据[b1]～[b56]中任一项记载的方法，其中，将缩合工序重复2次。

198、[b59]根据[b1]～[b58]中任一项记载的方法，其中，在缩合工序之后还包括将担载于固相的、第二氨基酸或第二肽中的保护氨基和/或保护羟基的保护基进行脱保护的脱保护工序。

199、[b60]根据[b59]中记载的方法，其中，在缩合工序与脱保护工序之间还包括对固相进行清洗的清洗工序。

200、[b61]根据[b59]或[b60]中记载的方法，其中，将缩合工序和脱保护工序重复多次(其中，多次缩合工序中使用的多个第二氨基酸和/或第二肽分别可以相同也可以不同。)。

201、[b62]式(a’)所示的碳二亚胺系缩合剂在[b1]～[b61]中任一项记载的方法中的应用。

202、[b63]dsbc在[b1]～[b61]中任一项记载的方法中的应用。

203、[b63-1]n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)在[b1]～[b61]中任一项记载的方法中的应用。

204、[b63-2]n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)在[b1]～[b61]中任一项记载的方法中的应用。

205、[b63-3]n，n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)在[b1]～[b61]中任一项记载的方法中的应用。

206、[b63-4]n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)在[b1]～[b61]中任一项记载的方法中的应用。

207、在[b1]～[b63]中，对基于固相法的肽化合物的制造方法进行了说明，但这些制造方法也能够应用于液相法。即，本发明的一个方面提供以下的[b1’]。[b1’]也可以包括[b2]～[b63]中的涉及除固相以外的特征。

208、[b1’]一种基于液相法的肽化合物的制造方法，其包括：

209、准备工序，准备具有n-烷基氨基的第一氨基酸或在n末端具有n-烷基氨基的第一肽；以及

210、缩合工序，使第一氨基酸或第一肽与具有保护氨基和/或保护羟基、以及羧基的第二氨基酸，或者具有保护氨基和/或保护羟基、以及羧基的第二肽在上述通式(a’)所示的至少1种碳二亚胺系缩合剂和添加剂的存在下，在溶剂中进行缩合，溶剂中的碳二亚胺系缩合剂的浓度为0.4～4.0mol/l。

211、根据该方法，能够以高反应转化率得到目标肽化合物。

212、例如，本发明还提供以下的[c1]～[c16]。

213、[c1]一种担载于膜的肽化合物的制造方法，其包括[a1]～[a64]或[b1]～[b63]中任一项记载的方法。

214、[c2]根据[c1]中记载的方法，其中，担载于膜的肽化合物具有2个以上的源自n-烷基氨基酸的结构单元。

215、[c3]根据[c1]或[c2]中记载的方法，其中，担载于膜的肽化合物具有3个以上、4个以上、5个以上、6个以上、或7个以上的源自n-烷基氨基酸的结构单元。

216、[c4]根据[c1]～[c3]中任一项记载的方法，其中，担载于膜的肽化合物具有7个以上的源自n-烷基氨基酸的结构单元。

217、[c5]根据[c1]～[c4]中任一项记载的方法，其中，担载于膜的肽化合物具有合计7个以上、8个以上、9个以上、或10个以上的源自氨基酸的结构单元。

218、[c6]根据[c1]～[c5]中任一项记载的方法，其中，肽化合物具有合计10个以上的源自氨基酸的结构单元。

219、[c7]根据[c1]～[c6]中任一项记载的方法，其中，肽化合物具有合计30个以下、25个以下、20个以下、18个以下、17个以下、16个以下、或15个以下的源自氨基酸的结构单元。

220、[c8]根据[c1]～[c7]中任一项记载的方法，其中，肽化合物具有合计15个以下的源自氨基酸的结构单元。

221、[c9]一种担载于膜的肽库的制造方法，其包括通过[c1]～[c8]中任一项记载的方法得到担载于膜的10种以上的肽化合物的工序。

222、[c10]一种担载于膜的肽库的制造方法，其包括通过[c1]～[c8]中任一项记载的方法得到担载于膜的20种以上、40种以上、80种以上、100种以上、200种以上、或384种以上的肽化合物的工序。

223、[c11]一种担载于膜的肽库的制造方法，其包括通过[c1]～[c8]中任一项记载的方法得到担载于膜的384种以上的肽化合物的工序。

224、[c12]根据[c1]～[c11]中任一项记载的方法，其使用自动合成机。

225、[c13]根据[c1]～[c12]中任一项记载的方法，其还包括从担载于膜的肽化合物中切出肽化合物的工序。

226、[c14]根据[c13]中记载的方法，其中，通过光照射来切出肽化合物。

227、[c15]一种环状肽或环状肽库的制造方法，其包括将通过[c13]或[c14]中记载的方法切出的肽化合物进行环化的工序。

228、[c16]根据[c15]中记载的方法，其使用自动合成机。

229、例如，本发明还提供以下的[d 1]～[d6]。

230、[d 1]一种肽化合物，其经由连接基团键合于膜，所述肽化合物具有2个以上的源自n-烷基氨基酸的结构单元。

231、[d2]根据[d 1]中记载的肽化合物，其中，肽化合物具有3个以上、4个以上、5个以上、6个以上、或7个以上的源自n-烷基氨基酸的结构单元。

232、[d3]根据[d 1]或[d2]中记载的肽化合物，其中，肽化合物具有合计7个以上、8个以上、9个以上、10个以上、或11个以上的源自氨基酸的结构单元。

233、[d4]根据[d 1]～[d3]中任一项记载的肽，其中，肽化合物具有合计30以下、25以下、20以下、18以下、17以下、16以下、或15以下的源自氨基酸的结构单元。

234、[d5]一种肽库，其包含10种以上的[d 1]～[d4]中任一项记载的、经由连接基团键合于膜的肽化合物。

235、[d6]根据[d5]中记载的肽库，其包含20种以上、40种以上、80种以上、100种以上、200种以上、或384种以上的经由连接基团键合于膜的肽化合物。

236、例如，本发明还提供以下的[e1]～[e3]。

237、[e1]一种筛选与靶分子键合的化合物的方法，其包括：

238、(1)通过[c9]～[c16]中任一项记载的方法合成肽库或环状肽库的步骤；

239、(2)使该肽库或环状肽库与靶分子接触的步骤；

240、(3)选择与靶分子键合的肽化合物的步骤。

241、[e2]根据[e1]中记载的方法，其中，靶分子为蛋白质、核酸、多肽或糖链。

242、[e3]根据[e1]或[e2]中记载的方法，其中，与靶分子键合的化合物的选择通过表面等离子体共振(surface plasmonresonance)或α筛选(amplified luminescentproximityhomogeneousassay)来实施。

243、例如，本发明还提供以下的[f1]～[f5]。

244、[f1]一种肽合成中的析出抑制剂，其包含dsbc。

245、[f2]一种肽合成中的析出抑制剂，其包含n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)。

246、[f3]一种肽合成中的析出抑制剂，其包含n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)。

247、[f4]一种肽合成中的析出抑制剂，其包含n,n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)。

248、[f5]一种肽合成中的析出抑制剂，其包含n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)。

249、例如，本发明还提供以下的[g1]～[g4]。

250、[g1]n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)

251、[g2]n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)

252、[g3]n,n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)

253、[g4]n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)

254、例如，本发明还提供以下的[h1]～[h7]。

255、[h1]一种化合物的制造方法，其包括使用n，n’-二仲丁基碳二亚胺(dsbc)、n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)、n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)、n，n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)、n，n’-双(1-乙基丙基)碳二亚胺(ss29)、或n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)作为缩合剂来形成酰胺键的工序。

256、[h2]一种化合物的制造方法，其包括使用n，n’-二仲丁基碳二亚胺(dsbc)作为缩合剂来形成酰胺键的工序。

257、[h3]一种化合物的制造方法，其包括使用n’-(1-苯基乙基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss26)作为缩合剂来形成酰胺键的工序。

258、[h4]一种化合物的制造方法，其包括使用n’-(1-甲基庚基)-n-仲丁基-碳二亚胺(ss27)作为缩合剂来形成酰胺键的工序。

259、[h5]一种化合物的制造方法，其包括使用n，n’-双(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss28)作为缩合剂来形成酰胺键的工序。

260、[h6]一种化合物的制造方法，其包括使用n，n’-双(1-乙基丙基)碳二亚胺(ss29)或n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)作为缩合剂来形成酰胺键的工序。

261、[h7]一种化合物的制造方法，其包括使用n’-(1-乙基丙基)-n-(1-甲基丁基)碳二亚胺(ss30)作为缩合剂来形成酰胺键的工序。

262、[h8]根据[h1]～[h7]中任一项记载的制造方法，其中，上述形成酰胺键的工序在固相或液相中进行。

263、在上述编号中，除非另有说明，否则从属技术方案引用的编号包括其编号的分支编号。例如，从属技术方案中引用的[a2]表示包含[a2]以及其分支编号[a2-1]～〔a2-6〕。关于其他编号也是同样的。

264、发明效果

265、根据本发明的一个方面，在肽固相合成法的、特别是缩合反应的工序中，能够提高反应转化率。另外，根据本发明的一个方面，能够提供一种在肽固相合成法的、特别是缩合反应的工序中，作为通过避免晶体析出而能够应用于自动合成的酰胺化条件，高效地制造高纯度的肽化合物的方法。