circMRP4作为新靶标在糖尿病肾病诊断和治疗药物中的应用

本发明涉及生物医药和分子生物学，具体涉及circmrp4作为新靶标在糖尿病肾病诊断和治疗药物中的应用。

背景技术：

1、糖尿病肾病(diabetic kidney disease，dkd)是糖尿病最常见的并发症之一，约占糖尿病死亡率的20-40％，也是终末期肾病的主要原因。糖尿病肾病主要临床特征表现为蛋白尿产生、肾小球滤过率进行性下降。肾小球滤过屏障由肾小球内皮、基底膜和足细胞组成，负责肾脏过滤功能，当其受损时会出现蛋白尿等特征。足细胞是终末分化的上皮细胞，复制能力有限，其形状和数量对肾小球滤过屏障的完整性和功能都是至关重要的。因此，近年来的研究越来越多地关注足细胞凋亡在dkd中的作用和针对dkd足细胞凋亡的治疗干预。

2、环状rna(circrna)是具有共价闭环结构的单链rna，具有高度稳定性、保守性和组织表达特异性。在功能上，circrna具有mirna和蛋白质海绵作用，进而间接调控下游靶基因的表达，部分circrna甚至可以翻译成蛋白质或多肽来发挥生物学功能。近年来，多项研究发现circrna在dkd的血清、细胞、组织和外泌体中具有表达特异性，表明circrna对dkd的发展具有重要作用，circrna有望成为dkd诊断的潜在标志物和治疗靶点。在此基础上，本发明提供了circmrp4作为新靶标在糖尿病肾病诊断和治疗药物中的应用。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种circmrp4作为新靶标在糖尿病肾病诊断和治疗药物中的应用。

2、为达此目的，本发明采用以下技术方案：

3、本发明为了实现其目的，采用的技术方案是：

4、本发明第一方面提供了检测样本中生物标志物的试剂在制备诊断糖尿病肾病的产品中的应用，所述生物标志物为circmrp4。circmrp4来源于abcc4(mrp4)基因，所述circmpr4由3个外显子组成，长度为457nt，其核苷酸序列如seq id no.1所示，具体如下：

5、gtggctcaacccgctgtttaaaactggtcataagcggagactggaagaagatgacatgttctcagtgcttccagaagatcgctcaaagcacctcggagaggagcttcaacggtactgggataaagaacttctgcgagccaagaaggactcgaggaagccctccttaacaaaggcaatcataaagtgttactggaagtcttacctgattttgggaatttttacgttaattgaggagggcactcgagtagttcagcccttatttttagggaaaattattgaatattttgagaagtatgaccccgacgactcggtggctttgcatacagcttatggctacgcagcagtgctgtccatgtgcacgctcatcctggccatactacatcatttgtacttctaccacgtgcagtgcgccgggatgaggctgcgggttgccatgtgccacatgatttaccggaag

6、在上述的应用技术方案中，与正常对照相比，circmrp4在患者中的表达水平上调。

7、在上述的应用技术方案中，患者的待测样本中circmrp4的含量通过总rna提取、反转录、定量pcr进行检测得到。

8、本发明第二方面提供了circmrp4表达抑制剂在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。

9、在所述的应用技术方案中，所述circmrp4表达抑制剂包括sirna。

10、在所述的应用技术方案中，所述sirna的序列为：

11、正义链序列：5’-uuaccggaagguggcucaatt-3’，

12、反义链序列：5’-uugagccaccuuccgguaatt-3’。

13、本发明第三方面提供了circmrp4作为靶标在筛选防治糖尿病肾病的药物中的应用。

14、在上述的应用技术方案中，所述药物抑制circmrp4的表达。

15、在上述的应用技术方案中，circmrp4抑制足细胞活力，诱导足细胞凋亡。

16、在上述的应用技术方案中，circmrp4的下调促使足细胞的活力增加，bcl-2蛋白的表达升高，desmin、bax和cleaved caspase-3蛋白的表达降低，细胞凋亡率降低。

17、本发明的优点在于：

18、通过db/db小鼠构建dkd动物模型，并对正常小鼠及dkd小鼠肾组织进行rna测序，筛选出在dkd中特异表达的circrna，通过细胞生物学及分子化学等技术对dkd中差异表达circrna进行验证和功能研究。通过本发明研究，探索与dkd发生发展过程中足细胞凋亡相关的circrna参与疾病发生的具体机制，为dkd临床诊断找寻新的靶点。

19、经本发明研究证实：肾脏足细胞中的circmrp4在糖尿病肾病中显著上调，发现其可以通过促进足细胞凋亡从而加剧糖尿病肾病的发生发展，敲低circmrp4具备抑制足细胞凋亡从而延缓dkd进展的作用。本发明研究证明circmrp4作为新的诊断指标和治疗靶点在糖尿病肾病治疗中的应用前景。

技术特征：

1.检测样本中生物标志物的试剂在制备诊断糖尿病肾病的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物为circmrp4。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述circmrp4的核苷酸序列如seq idno.1所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，与正常对照相比，circmrp4在患者中的表达水平上调。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，患者的待测样本中circmrp4的含量通过总rna提取、反转录、定量pcr进行检测得到。

5.circmrp4作为新靶标在糖尿病肾病诊断和治疗药物中的应用。

6.circmrp4表达抑制剂在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述circmrp4表达抑制剂包括sirna。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述sirna的序列为：

9.circmrp4作为靶标在筛选防治糖尿病肾病的药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，circmrp4的下调促使足细胞的活力增加，bcl-2蛋白的表达升高，desmin、bax和cleaved caspase-3蛋白的表达降低，细胞凋亡率降低。

技术总结
本发明涉及生物医药和分子生物学技术领域，具体涉及circMRP4作为新靶标在糖尿病肾病诊断和治疗药物中的应用。circMRP4来源于ABCC4(MRP4)基因，所述circMPR4由3个外显子组成，长度为457nt，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。经本发明研究证实，肾脏足细胞中的circMRP4在糖尿病肾病中显著上调，发现其可以通过促进足细胞凋亡从而加剧糖尿病肾病的发生发展，敲低circMRP4具备抑制足细胞凋亡从而延缓糖尿病肾病进展的作用。本发明研究证明circMRP4作为新的诊断指标和治疗靶点在糖尿病肾病治疗中的应用前景。

技术研发人员：唐丽琴,邓淑军,黄玲芝,邵雅纹,解勇圣
受保护的技术使用者：中国科学技术大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12