抗菌肽CM24、重组基因、乳酸工程菌及其应用

本发明涉及基因工程，特别是涉及抗菌肽cm24、重组基因、乳酸工程菌及其应用。

背景技术：

1、近年来传统抗生素的大规模滥用导致越来越严重的病原微生物耐药问题，导致细菌对抗生素的耐药性越来越强，催生了大量的耐药性“超级细菌”，如广泛耐药的鲍曼不动杆菌（acinetobacter baumannii）及金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）等。为了应对全球日益严重的抗生素耐药问题，急需开发新型的抗菌药物分子。

2、抗菌肽是一类具有抗菌活性的多肽类小分子，在昆虫、动物及植物中分布广泛，表现出良好且广谱的抗菌活性。同时由于抗菌肽具有分子量小、热稳定性强、水溶性好、无免疫原性、不易产生耐药性、抗菌谱广等特点使其成为了最优的抗生素替代分子。但现有的抗菌肽抗菌效果不理想，对无乳链球菌（streptococcus agalactiae）这一类强有力的病原体的抗菌效果较差。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了抗菌肽cm24、重组基因、乳酸工程菌及其应用。本发明提供的抗菌肽cm24对无乳链球菌具有较好的抑制效果，mic达到4 μg/ml，对鼠和羊溶血活性低，raw264.7细胞毒性低，具有应用潜质。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、本发明提供了一种抗菌肽cm24，氨基酸序列如seq id no.1所示。

4、本发明提供了一种重组基因，包括第一编码序列、第二编码序列和第三编码序列；所述第二编码序列位于所述第一编码序列和所述第三编码序列之间；所述第一编码序列为编码信号肽的核苷酸序列，所述信号肽的氨基酸序列如seq id no.3所示；所述第二编码序列为编码前导肽的核苷酸序列，所述前导肽的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述第三编码序列为编码上述技术方案所述抗菌肽cm24的核苷酸序列。

5、优选的，所述第一编码序列如seq id no.9所示，所述第二编码序列如seq idno.10所示，所述第三编码序列如seq id no.12所示。

6、本发明提供了一种重组质粒，包括上述技术方案所述的重组基因和原始质粒。

7、优选的，所述原始质粒包括pnz8148质粒。

8、本发明提供了一种工程乳酸菌，包括上述技术方案所述的重组质粒和原始乳酸菌。

9、本发明提供了上述技术方案所述的抗菌肽cm24或上述技术方案所述的重组基因或上述技术方案所述的重组质粒或上述技术方案所述的工程乳酸菌在制备抗菌产品中的应用，所述抗菌产品针对的菌包括革兰氏阴性菌和/或革兰氏阳性菌。

10、优选的，所述革兰氏阴性菌包括大肠杆菌（escherichia coli）、鸡沙门氏菌（salmonella enterica）和产气肠杆菌（enterobacter aerogenes）中的一种或多种；所述革兰氏阳性菌包括无乳链球菌（streptococcus agalactiae）和/或金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）。

11、优选的，所述抗菌产品包括抗菌药物或饲料添加剂。

12、本发明提供了一种抗细菌感染药物，所述抗细菌感染药物的有效成分包括上述技术方案所述的抗菌肽cm24。

13、有益效果：

14、本发明提供了一种抗菌肽cm24，氨基酸序列如seq id no.1所示。本发明提供的抗菌肽cm24对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有良好的抑菌和杀菌效果，对无乳链球菌的最小抑菌浓度达到4 μg/ml，对鼠和羊溶血活性低，raw264.7细胞毒性低，具有应用潜质。

15、另外，乳酸乳球菌用于生产饲料添加剂虽然不需要担心毒性问题，但乳酸乳球菌分泌表达抗菌肽时信号肽的断裂残基易影响抗菌肽活性和产量，本发明提供的重组基因通过优化信号肽，提高了抗菌肽cm24在乳酸乳球菌中的外源蛋白的分泌，将为规模化生产饲料添加剂以及工程乳酸菌制剂等提供技术支持。

技术特征：

1.一种抗菌肽cm24，其特征在于，氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.一种重组基因，其特征在于，包括第一编码序列、第二编码序列和第三编码序列；所述第二编码序列位于所述第一编码序列和所述第三编码序列之间；所述第一编码序列为编码信号肽的核苷酸序列，所述信号肽的氨基酸序列如seq id no.3所示；所述第二编码序列为编码前导肽的核苷酸序列，所述前导肽的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述第三编码序列为编码权利要求1所述抗菌肽cm24的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的重组基因，其特征在于，所述第一编码序列如seq id no.9所示，所述第二编码序列如seq id no.10所示，所述第三编码序列如seq id no.12所示。

4.一种重组质粒，其特征在于，包括权利要求2或3所述的重组基因和原始质粒。

5.根据权利要求4所述的重组质粒，其特征在于，所述原始质粒包括pnz8148质粒。

6.一种工程乳酸菌，其特征在于，包括权利要求4或5所述的重组质粒和原始乳酸菌。

7.权利要求1所述的抗菌肽cm24或权利要求2或3所述的重组基因或权利要求4或5所述的重组质粒或权利要求6所述的工程乳酸菌在制备抗菌产品中的应用，所述抗菌产品针对的菌包括革兰氏阴性菌和/或革兰氏阳性菌。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阴性菌包括大肠杆菌（escherichia coli）、鸡沙门氏菌（salmonella enterica）和产气肠杆菌（enterobacteraerogenes）中的一种或多种；所述革兰氏阳性菌包括无乳链球菌（streptococcusagalactiae）和/或金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述抗菌产品包括抗菌药物或饲料添加剂。

10.一种抗细菌感染药物，其特征在于，所述抗细菌感染药物的有效成分包括权利要求1所述的抗菌肽cm24。

技术总结
本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及抗菌肽CM24、重组基因、乳酸工程菌及其应用。本发明提供的抗菌肽CM24对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有良好的抑菌和杀菌效果，对无乳链球菌的最小抑菌浓度达到4μg/mL，对鼠和羊溶血活性低，RAW264.7细胞毒性低，具有应用潜质。另外，本发明提供的重组基因通过优化信号肽，提高了抗菌肽CM24在乳酸乳球菌中的外源蛋白的分泌，将为规模化生产饲料添加剂以及工程乳酸菌制剂等提供技术支持。

技术研发人员：姜宁,赵芳芳,张晨雪,张爱忠,关国栋,杨欢
受保护的技术使用者：黑龙江八一农垦大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19