一种建立艾草悬浮细胞系的方法

本发明涉及艾草组织培养技术，特别涉及一种建立艾草悬浮细胞系的方法，属于生物。

背景技术：

1、艾草在我国有历史悠长的药用价值，在中医药中，艾草全草入药，有温经、去湿、散寒、止血、消炎、平喘、止咳、安胎、抗过敏等作用。随着近几年对艾草研究的深入，科研人员通过越来越多的手段探究艾草的各种效用产生的机理，艾草中的活性成分也被逐渐的被发现，然而，传统的从艾草植物中获取活性成分的方法受限于植物生长周期长的限制，而且在提取过程中分离纯化成本高，规模化生产过程中原料供应受限，植物的有效成分往往包含着细胞内，建立植物的悬浮细胞系能够为工业化提取植物中的活性成分提供不受限制的原料来源，而且相对于植物生长，其更容易通过培养工艺控制，业界对于其它植物也进行过建立悬浮细胞系的研究，如水稻等，但尚未见到关于建立艾草悬浮细胞系方法的报道。

2、汤阴北艾，产于河南省安阳市汤阴县，全国农产品地理标志产品。汤阴北艾蘖多茎细，侧枝多壮，株形美观，叶厚纸质，被毛厚密，绒线细长，香气悠长，商品性好。汤阴北艾（按照《中国药典》2015年版一部“艾叶”检查、含量测定项）品质指标：水分含量5～13%，酸不溶性灰分含量≦1.1%，桉油精含量≧0.07%。目前，汤阴县所种艾草均从扁鹊庙内移植。汤阴北艾独特品质，先后被中国中药协会授予“汤阴北艾道地药材保护与规范化种植示范基地”、农业农村部授予“全国名特优新农产品”、“农产品地理标志”等荣誉证书。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种建立艾草悬浮细胞系的方法。

2、为实现本发明的目的，采用了下述的技术方案：

3、一种建立艾草悬浮细胞系的方法，包括以下步骤：

4、第一步、将艾草外植体置于诱导培养基上进行诱导培养，得到愈伤组织；

5、第二步、将所述愈伤组织置于悬浮培养基上进行悬浮震荡培养，从而获得艾草悬浮细胞系。

6、进一步的，所述艾草外植体为汤阴北艾的茎。

7、进一步的，所述诱导培养基为在ms固体培养基中加入如下物质得到的培养基：kt、2,4-d、谷氨酰胺、naa；上述2,4-d的终浓度是0.005-0.8mg/l、kt的终浓度是0.01-1.5mg/l、谷氨酰胺的终浓度是0.005-1.5mg/l、naa的终浓度是0.002-0.3mg/l。

8、优选的，所述诱导培养基中各物质浓度如下：2,4-d的终浓度是0.1 mg/l、kt的终浓度是0.1 mg/l、谷氨酰胺的终浓度是1mg/l、naa的终浓度是0.005mg/l。

9、进一步的，所述悬浮培养基为在ms液体培养基中加入如下物质得到的培养基：kt、2,4-d、谷氨酰胺、naa；上述2,4-d的终浓度是0.005-0.8mg/l、kt的终浓度是0.01-1.5mg/l、谷氨酰胺的终浓度是0.005-1.5mg/l、naa的终浓度是0.002-4mg/l。

10、优选的，所述悬浮培养基中各物质浓度如下：kt、2,4-d、谷氨酰胺、naa；上述2,4-d的终浓度是0.1mg/l、kt的终浓度是0.1mg/l、谷氨酰胺的终浓度是1mg/l、naa的终浓度是0.005 mg/l。

11、进一步的，所述第二步中的悬浮震荡培养条件为15-28℃，并包括如下步骤：将所述愈伤组织切碎，置于所述悬浮细胞培养基中，再以80-170转/min的转速震荡培养，即可得到艾草悬浮细胞系。

12、利用上述制备的艾草悬浮细胞系为原料，可从中提取艾草中的药用活性成分，例如棕矢车菊素等。

13、有益效果：本发明首次给出了建立汤阴北艾悬浮细胞系的方法，提供的建立艾草悬浮细胞系的方法步骤简单，可利用艾草胚性愈伤进行大规模扩繁，解决了工业化提取艾草中活性成分的原料来源问题。

技术特征：

1.一种建立艾草悬浮细胞系的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种建立艾草悬浮细胞系的方法，其特征在于，所述艾草外植体为汤阴北艾的茎。

3.根据权利要求1所述的一种建立艾草悬浮细胞系的方法，其特征在于，所述诱导培养基为在ms固体培养基中加入如下物质得到的培养基：kt、2,4-d、谷氨酰胺、naa；上述2,4-d的终浓度是0.005-0.8mg/l、kt的终浓度是0.01-1.5mg/l、谷氨酰胺的终浓度是0.005-1.5mg/l、naa的终浓度是0.002-0.3mg/l。

4.根据权利要求3所述的一种建立艾草悬浮细胞系的方法，其特征在于，所述诱导培养基中各物质浓度如下：2,4-d的终浓度是0.1 mg/l、kt的终浓度是0.1 mg/l、谷氨酰胺的终浓度是1mg/l、naa的终浓度是0.005mg/l。

5.根据权利要求1所述的一种建立艾草悬浮细胞系的方法，其特征在于，所述悬浮培养基为在ms液体培养基中加入如下物质得到的培养基：kt、2,4-d、谷氨酰胺、naa；上述2,4-d的终浓度是0.005-0.8mg/l、kt的终浓度是0.01-1.5mg/l、谷氨酰胺的终浓度是0.005-1.5mg/l、naa的终浓度是0.002-4mg/l。

6.根据权利要求5所述的一种建立艾草悬浮细胞系的方法，其特征在于，所述悬浮培养基中各物质浓度如下：kt、2,4-d、谷氨酰胺、naa；上述2,4-d的终浓度是0.1mg/l、kt的终浓度是0.1mg/l、谷氨酰胺的终浓度是1mg/l、naa的终浓度是0.005 mg/l。

7.根据权利要求1所述的一种建立艾草悬浮细胞系的方法，其特征在于，所述第二步中的悬浮震荡培养条件为15-28℃，并包括如下步骤：将所述愈伤组织切碎，置于所述悬浮细胞培养基中，再以80-170转/min的转速震荡培养并继代，即可得到艾草悬浮细胞系。

技术总结
本发明公开了一种建立艾草悬浮细胞系的方法。本发明所提供的建立艾草悬浮细胞系的方法包括如下步骤：（1）将艾草外植体置于诱导培养基上进行诱导培养，得到愈伤组织；（2）将所述愈伤组织置于悬浮培养基中进行悬浮震荡培养，从而获得艾草悬浮细胞系。本发明的方法是利用艾草胚性愈伤进行大规模扩繁。

技术研发人员：王尧,崔宇鹏,吴汉夔,张闻慧,张坤朋,郜新强,翁少亭,徐耀瑜
受保护的技术使用者：安阳工学院
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17