一种与藏绵羊免疫性状相关的分子标记、其检测方法和应用

本发明属于分子生物学检测，尤其涉及一种与藏绵羊免疫性状相关的分子标记、其检测方法和应用。

背景技术：

1、藏绵羊作为青藏高原主要家畜品种之一，也是青藏高原高寒牧区草原畜牧业的重要组成部分，为当地牧民提供了大部分的生产生活资源，对青藏高原的经济发展及当地牧民生活水平提高具有重要意义。然而藏绵羊疾病的发生，会导致大量藏绵羊死亡，给牧民带来巨大的经济损失。目前，疾病的控制手段主要依赖于疫苗接种和药物治疗，但是这些手段并不能完全解决藏绵羊疾病的问题，且药物的使用极大可能导致耐药性的产生。因此，如何获得高免疫力藏绵羊是现在亟需解决的问题。

2、snp分子标记具有遗传稳定、突变率低、便于自动化检测等优点。免疫球蛋白与动物的抗病能力密切相关。因此，获得与藏绵羊免疫性状相关的snp分子标记具有重要意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种与藏绵羊免疫性状相关的分子标记、其检测方法和应用，通过检测位于绵羊参考基因组oar_v4.0版本第2号染色体上第137299505个碱基，突变碱基为g或t，实现高免疫力的藏绵羊基因分型；所述基因型tt藏绵羊个体免疫球蛋白显著高于基因型gg和gt；所述基因型gt藏绵羊个体免疫球蛋白显著高于基因型gg，通过基因分型分析获得高免疫力藏绵羊，并进行选育育种。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供一种与藏绵羊免疫性状相关的snp分子标记，所述snp分子标记位于绵羊参考基因组oar_v4.0版本第2号染色体上第137299505个碱基，突变碱基为g或t，当基因型为tt时，藏绵羊的免疫力显著高于基因型gt和基因型gg。

4、本发明提供了所述snp分子标记检测试剂在检测藏绵羊免疫性状中的应用。

5、作为优选，所述试剂包括用于扩增检测所述snp分子标记基因型的特异性引物对，所述特异性引物对的序列如seq id no.2-3所示。

6、作为优选，基因型tt藏绵羊个体免疫球蛋白显著高于基因型gt和gg；所述免疫球蛋白为iga、igg和/或igm。

7、作为优选，所述的应用包括以下步骤：

8、(1)提取藏绵羊基因组dna；

9、(2)利用特异性引物对将步骤(1)获得的基因组dna进行pcr扩增，获得pcr扩增产物；

10、(3)将步骤(2)获得的pcr扩增产物进行基因分型检测，基因型为gg、gt或tt；基因型为tt的藏绵羊个体免疫球蛋白显著高于基因型gt和gg；基因型为gt的藏绵羊个体免疫球蛋白显著高于基因型gg。

11、作为优选，所述pcr扩增体系以25μl计，包括以下组分：金牌mix(green)22μl，上、下游引物各1μl，基因组dna 1μl。

12、作为优选，所述pcr扩增程序：98℃2min；98℃10s，56.5℃10s，72℃10s，共40个循环；72℃延伸2min。

13、本发明还提供了所述snp分子标记的检测试剂在藏绵羊辅助育种中的应用。

14、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明发现与藏绵羊免疫相关的snp位点，通过利用本发明的特异性引物对提取的基因组dna进行扩增和检测，确定样品的基因型，从而筛选出具有高免疫力的藏绵羊品种。本发明提供了利用分子标记在藏绵羊免疫相关的核苷酸多态性位点的检测方法，该技术准确性高，检测速度快，成本低廉，并且结果判读更容易。通过对藏绵羊免疫性状相关的snp位点进行检测，可选择基因型为tt纯合型藏绵羊作为种羊，用于育种早期选留，提高高免疫力藏绵羊选育准确性，在对高免疫力藏绵羊进行大规模分子精准育种中具有潜在的应用价值。

技术特征：

1.一种与藏绵羊免疫性状相关的snp分子标记，其特征在于，所述snp分子标记位于绵羊参考基因组oar_v4.0版本第2号染色体上第137299505个碱基，突变碱基为g或t，当基因型为tt时，藏绵羊的免疫力显著高于基因型gt和基因型gg。

2.权利要求1所述snp分子标记检测试剂在检测藏绵羊免疫性状中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括用于扩增检测所述snp分子标记基因型的特异性引物对，所述特异性引物对的序列如seq id no.2-3所示。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，基因型tt藏绵羊个体免疫球蛋白显著高于基因型gt和gg。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述免疫球蛋白为iga、igg和/或igm。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述pcr扩增体系以25μl计，包括以下组分：金牌mix(green)22μl，上、下游引物各1μl，基因组dna 1μl。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述pcr扩增的程序如下：98℃2min；98℃10s，56.5℃10s，72℃10s，共40个循环；72℃延伸2min。

9.权利要求1所述snp分子标记的检测试剂在藏绵羊辅助育种中的应用。

技术总结
本发明提供了一种与藏绵羊免疫性状相关的分子标记、其检测方法和应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明公开了藏绵羊免疫性状相关的SNP分子标记位于绵羊参考基因组Oar_v4.0版本第2号染色体上第137299505个碱基，突变碱基为G或T。本发明还提供了利用分子标记在藏绵羊免疫相关的核苷酸多态性位点的检测方法，该技术准确性高，检测速度快，成本低廉，并且结果判读更容易。通过对藏绵羊免疫性状相关的SNP位点进行检测，可选择基因型为TT纯合型藏绵羊作为种羊，用于育种早期选留，提高高免疫力藏绵羊选育准确性，在对高免疫力藏绵羊进行大规模分子精准育种中具有潜在的应用价值。

技术研发人员：袁超,卢曾奎,郭婷婷,安雪姣,刘建斌
受保护的技术使用者：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/3/21