具有抗IL-17A活性的基因修饰干细胞及其制备方法以及药物组合物与流程

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有抗il-17a活性的基因修饰干细胞及其制备方法以及药物组合物。

背景技术：

1、间充质干细胞（mscs）来源于胚胎发育早期的中胚层，是一种异质性的细胞群体，机体内的mscs包含自胚胎发育早期及之后不同发育阶段的干细胞及分化后代。人体的组织都含有mscs，多种组织和器官中mscs含量丰富，如骨髓、脂肪、牙髓、脐带和胎盘等。mscs的免疫原性低，并且能够在重复注射后都不被受者的免疫系统识别，这是mscs用于临床治疗的一个最显著的优势。mscs还能够分泌很多生物活性分子以及一些免疫调节因子，能够对机体的损伤、炎症等起到修复作用。目前，mscs被用于治疗多种疾病的临床研究，包括多发性硬化症，心肌梗死，器官移植，肝硬化及肝衰竭，心衰，gvhd，左心室功能失调，白血病及克罗恩病等。

2、mscs还是非常理想的基因治疗细胞载体，易被所有临床上普遍应用的病毒载体系统所转染，经过基因修饰的mscs输注后可以遍布全身，不仅可以发挥干细胞归巢和修复的作用，同时又可大量表达如细胞因子等的目的基因，而且二者具有协同作用，这样可以扩大mscs治疗的疾病范围，使得病灶部位局部的修复几率大大提高。这些优点使得mscs成为最具有基因治疗研究和临床治疗应用前景的干细胞之一。

3、专利cn 112941028 a公开了一种纳米抗体基因修饰的间充质干细胞及其制备方法与应用。该间充质干细胞含有、和/或表达、和/或分泌纳米抗体。该间充质干细胞或该间充质干细胞的培养提取物，迁移至目标靶位的同时，使得纳米抗体能够在较短时间精准到达病灶区，提高病灶区纳米抗体的浓度和有效量，并减弱病灶区纳米抗体的衰竭现象，还促进间充质干细胞分泌其他有益成分，提高间充质干细胞介导的细胞免疫治疗，提高免疫相关性疾病的治疗效果。

4、il-17a是一种主要由活化的t细胞产生的致炎细胞因子，作用于下游效应细胞介导多种生理过程，如炎症反应、凝血过程和骨重塑等，与机体多种疾病密切相关。il-17a表达过量时将导致脊柱关节炎、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、银屑病、炎症性肠病等多种疾病的发生发展。对于这类疾病临床可用的特效药物较少，传统治疗存在起效较慢、依从性差等缺点。鉴于以上基因修饰干细胞的在治疗中的优势，亟需开发一种基因修饰干细胞用于上述疾病的治疗。

5、本发明人致力于抗il-17a抗体开发，为便于审查，现对研发项目的技术背景进行简要介绍：

6、发明人基于筛选出的9个单域抗体（已另案申请），进行进一步的技术开发，获得了12个亲和力、阻断效果和稳定性相对提升的单域抗体组合（已另案申请）。

7、本发明人在上述技术方案的基础上，继续进行技术开发，研发了单域抗体组合基因修饰干细胞技术，基于专利法单一性的相关规定，对3个不同的基因修饰干细胞分别请求保护，本案系基因修饰干细胞技术之一所进行的发明专利申请。

8、为便于理解本技术，可选地参阅本项目其他专利申请文件。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了一种含有、表达和/或分泌抗il-17a抗体的干细胞，其特征在于，所述的抗il-17a抗体为二价单域抗体，所述的二价单域抗体的氨基酸序列为seq id no.1。

2、本发明中，单域抗体又称纳米抗体为其互补决定区是单域多肽的一部分的抗体。因此，单域抗体包含单个互补决定区。单域抗体为仅有重链的抗体，该抗体天然不包含轻链，衍生自常规抗体的单域抗体和工程化抗体。单域抗体可以衍生自任何物种，包括小鼠、人、骆驼、美洲驼、山羊、兔和牛。例如，天然存在的vhh分子可以衍生自骆驼科物种(例如骆驼、单峰骆驼、美洲驼和原驼)提供的抗体。像完整的抗体一样，单域抗体能够选择性地结合特定抗原。单域抗体可以仅含有免疫球蛋白链的可变结构域，该结构域具有cdr1、cdr2和cdr3以及框架区。

3、本发明中，抗il-17a的二价单域抗体即抗il-17a的双价单域抗体不仅包括完整的二价单域抗体，还包括所述抗il-17a的二价单域抗体的片段、衍生物和类似物。其中，片段、衍生物和类似物含义相同，均是指基本上保持本发明抗体相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基（优选保守性氨基酸残基）被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或成熟多肽与另一个化合物（比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇）融合所形成的多肽，或附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽（如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列，或与fc标签形成的融合蛋白）。

4、本发明中，序列同源性表示两个（核苷酸或氨基酸）序列在比对中在相同位置处具有相同残基的程度，并且通常表示为百分数。优选地，同源性在被比较的序列的整体长度上确定。因此，具有完全相同序列的两个拷贝具有100％同源性。在一些实施例中，与前述序列相比仅仅替换一个或少数几个氨基酸的序列，例如，包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个保守氨基酸取代，也可以实现发明目的。这些变异形式包括但并不限于：一个或多个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在c末端和/或n末端添加一个或数个（通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内）氨基酸。实际上，在确定两个氨基酸序列之间的序列同源性程度或在确定单域抗体中的cdr1、cdr2和cdr3组合时，技术人员可以考虑所谓的“保守”氨基酸取代，在取代情况下，所述取代将优选为保守氨基酸取代。所述保守氨基酸，其通常可以被描述为氨基酸残基被具有相似化学结构的另一个氨基酸残基替代的氨基酸取代，并且该取代对多肽的功能、活性或其它生物学性质几乎没有或基本上没有影响。所述保守氨基酸取代在本领域是通用的，例如保守氨基酸取代是以下（a）-（d）组内的一个或少数几个氨基酸被同一组内另一个或少数几个氨基酸所取代：（a）极性带负电残基及其不带电酰胺：asp、asn、glu、gln；（b）极性带正电残基：his、arg、lys；（c）芳香族残基：phe、trp、tyr；（d）脂肪族非极性或弱极性残基：ala、ser、thr、gly、pro、met、leu、ile、val、cys。特别优选的保守氨基酸取代如下：asp被glu取代；asn被gln或his取代；glu被asp取代；gln被asn取代；his被asn或gln取代；arg被lys取代；lys被arg、gln取代；phe被met、leu、tyr取代；trp被tyr取代；tyr被phe、trp取代；ala被gly或ser取代；ser被thr取代；thr被ser取代；gly被ala或pro取代；met被leu、tyr或ile取代；leu被ile或val取代；ile被leu或val取代；val被ile或leu取代；cys被ser取代。另外，本领域技术人员知晓，单域抗体的创造性体现在cdr1-3区，而框架区序列fr1-4并非是不可改变的，fr1-4的序列可以采取本发明公开的序列的保守序列变体。

5、本发明中的，抗体融合蛋白是指利用基因工程技术将抗体片段与其他生物活性蛋白融合所得的产物。由于融合蛋白的不同，这种抗体融合蛋白具有多种生物学功能，并且表达的重组蛋白既不影响单链抗体的抗原结合能力，也不影响与之融合的蛋白质的生物学特性。

6、本发明中的，干细胞是一类具有无限的或者永生的自我更新能力的细胞、能够产生至少一种类型的、高度分化的子代细胞。从功能上讲，干细胞是具有多向分化潜能、自我更新能力的细胞，是处于细胞系起源顶端的最原始细胞，在体内能够分化产生某种特定组织类型的细胞。本发明中的干细胞具有以下一些生物学特点：（a）属非终末分化细胞，终生保持未分化或低分化特征，缺乏分化标记；（b）在机体的数目位置相对恒定；（c）具有自我更新能力；（d）能无限地分裂、增殖，可在较长时间内处于静止状态，干细胞可连续分裂几代；（e）具有多向分化潜能，能分化为各种不同类型的组织细胞；也具有分化发育的可塑性，在特定环境下，能被诱导分化成在发育上无关的细胞类型，其分化受所处周围微环境（干细胞壁龛）的影响；（f）分裂的慢周期性；（g）干细胞通过两种方式生长，一种是对称分裂，形成两个相同的干细胞，另一种是非对称分裂方式，非对称分裂中一个保持亲代的特征，仍作为干细胞保留下来，另外一个子细胞不可逆的走向分化的终端成为功能专一的分化细胞。

7、本发明中的，间充质干细胞（msc）也称为间充质基质细胞，是源自中胚层的非造血成体干细胞的亚群。它们具有自我更新能力和多向分化性，不仅分化为中胚层谱系，如软骨细胞、骨细胞和脂肪细胞，还分化为外胚层细胞和内胚层细胞。由于没有伦理问题和畸胎瘤形成，msc是用于治疗免疫疾病和非免疫疾病的细胞疗法的主要干细胞类型。它们可以很容易地从骨髓、脂肪组织、脐带、胎儿肝脏、肌肉和肺中分离，并且可以在体外成功地扩增。此外，msc具有归巢至受损组织部位的趋势。当msc外源性递送和系统地给予人和动物时，它们特别地迁移到具有炎症的受损组织部位。炎症指导的msc归巢涉及几种重要的细胞运输相关分子，包括趋化因子、粘附分子和基质金属蛋白酶（mmp）。

8、本发明中，细胞培养是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。

9、本发明从以下几个方面提高细胞培养的成功率（1）无菌操作：胞培养过程中，保持无菌操作是非常重要的。使用无菌技术，包括穿戴适当的实验室衣物、戴手套及口罩、使用无菌操作台或培养箱等设备，以及使用无菌的培养器具和培养试剂，以避免细菌、真菌或其他微生物的污染。（2）培养器具处理：在使用之前，确保培养器具（如培养皿、离心管、试管等）经过适当的清洁和消毒处理。培养皿可以在使用前经过紫外线照射，试管和离心管可以通过高温烘烤或自动清洗程序进行处理。（3）培养基配制：准确配制培养基是保证细胞生长和健康的关键。按照制造商的说明书或实验室的标准操作规程准确称量和混合培养基组分，确保正确的浓度和ph值。（4）细胞密度控制：在进行细胞传代或实验前，根据细胞类型和实验要求确定适当的细胞密度。过低的密度可能导致细胞生长缓慢，而过高的密度可能导致细胞过度拥挤和细胞死亡。（5）培养条件优化：不同细胞类型对培养条件的要求不同，包括培养温度、co2浓度、湿度和培养基配方等。了解并优化适合特定细胞类型的培养条件，可以提高细胞的成功培养率。（6）细胞检测和鉴定：定期对细胞进行鉴定和检测，确保其纯度和认证。使用但不限于细胞特异性标记物或pcr方法进行鉴定，以避免细胞污染或细胞系混合的情况。（7）冻存备份：定期冻存备份细胞株，以防止细胞的丢失或污染。冻存细胞的方法和条件需要根据细胞类型和实验室的要求来确定。（8）观察和记录：密切观察和记录细胞的生长和状态，包括细胞形态、增殖速率和细胞死亡等。及时发现和处理任何异常现象，如细胞污染或细胞衰老等。

10、本发明中，核酸构建体，其含有本文发明的抗体的核酸序列，以及与这些序列操作性连接的一个或多个调控序列。所述的操作性连接指线性dna序列的某些部分能够调节或控制同一线性dna序列其它部分的活性。例如，如果启动子控制编码序列的转录，那么它就是可操作地连于编码序列。

11、所述的调控序列可以是合适的启动子序列。启动子序列通常与待表达蛋白的编码序列操作性连接。启动子可以是在所选择的宿主细胞中显示转录活性的任何核苷酸序列，包括突变的、截短的和杂合启动子，并且可以从编码与该宿主细胞同源或异源的胞外或胞内多肽的基因获得。

12、所述的调控序列也可以是合适的转录终止子序列，由宿主细胞识别以终止转录的序列。终止子序列与编码该多肽的核苷酸序列的3’末端操作性连接。在选择的宿主细胞中有功能的任何终止子都可用于本发明。

13、本发明中，重组载体。具体而言，可将抗体的核酸序列克隆入载体，例如载体包括但不限于质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、动物病毒和粘粒。载体可以是表达载体(也称为重组载体)。表达载体可以以病毒载体形式或非病毒形式提供给细胞，优选为非病毒载体。所述表达载体上可含有1个或多个重复的抗体核酸序列。通常，合适的载体包含在至少一种有机体中起作用的复制起点、启动子序列、方便的限制酶位点和一个或多个可选择的标记。

14、合适的启动子包括但不限于即时早期巨细胞病毒(cmv)启动子序列。该启动子序列是能够驱动可操作地连接至其上的任何多核苷酸序列高水平表达的强组成型启动子序列。合适的启动子的另一个例子为延伸生长因子-1α(ef-1α)。然而，也可使用其他组成型启动子序列，包括但不限于类人猿病毒40(sv40)早期启动子、小鼠乳癌病毒(mmtv)、人免疫缺陷病毒(hiv)长末端重复(ltr)启动子、momulv启动子、鸟类白血病病毒启动子、eb病毒即时早期启动子、鲁斯氏肉瘤病毒启动子、以及人基因启动子，诸如但不限于肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红素启动子和肌酸激酶启动子。进一步地，也可考虑使用诱导型启动子。诱导型启动子的使用提供了分子开关，其能够在期限表达时打开可操作地连接诱导型启动子的多核苷酸序列的表达，而在当表达是不期望的时关闭表达。诱导型启动子的例子包括但不限于金属硫蛋白启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。

15、可选择的标记包括可选择的标记基因或报道基因中的任一个或两者，以便于从被病毒载体感染的细胞群中鉴定和选择表达细胞。有用的可选择标记基因包括例如抗生素抗性基因，诸如neo等。合适的报道基因可包括编码荧光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶、分泌型碱性磷酸酶或绿色荧光蛋白基因的基因。

16、本发明中，药学上可接受的辅料指生产药品和调配处方时使用的赋形剂和附加剂；是除活性成分以外，在安全性方面已进行了合理的评估，且包含在药物制剂中的物质。药用辅料除了赋形、充当载体、提高稳定性外，还具有增溶、助溶、缓控释等重要功能，是可能会影响到药品的质量、安全性和有效性的重要成分。

17、一方面，本发明提供了一种经修饰的干细胞，所述的干细胞包含、表达和/或分泌下述（1）和（2）：

18、（1）第一抗体，所述的第一抗体包含特异性识别il-17a的单域抗体；

19、（2）第二抗体所述的第二抗体包含特异性识别il-17a的单域抗体。

20、具体地，所述的第一单域抗体包含hcdr1、hcdr2和hcdr3；所述的hcdr1、hcdr2和hcdr3的氨基酸序列为seq id no.1-3；

21、所述的第二单域抗体包含hcdr4、hcdr5和hcdr6；所述的hcdr4、hcdr5和hcdr6的氨基酸序列为seq id no.4-6。

22、又一方面，本发明提供了一种干细胞，所述的干细胞包含、表达和/或分泌下述（1）和（2）：

23、（1）第一蛋白，所述的第一蛋白的结构包含：

24、fr1-hcdr1-fr2-hcdr2-fr3-hcdr3-fr4；

25、（2）第二蛋白，所述的第二蛋白的结构包含：

26、fr5-hcdr4-fr6-hcdr5-fr7-hcdr6-fr8。

27、具体地，所述的hcdr1-6选自seq id no.1-6所示的氨基酸序列；

28、所述的fr1-8选自seq id no.7-14所示的氨基酸序列。

29、又一方面，本发明提供了一种干细胞，所述的干细胞包含、表达和/或分泌融合蛋白；

30、所述的融合蛋白包含结构为：

31、fr1-hcdr1-fr2-hcdr2-fr3-hcdr3-fr4-linker-fr5-hcdr4-fr6-hcdr5-fr7-hcdr6-fr8的氨基酸序列。

32、具体地，所述的hcdr1-6选自seq id no.1-6所示的氨基酸序列；

33、所述的fr1-8选自seq id no.7-14所示的氨基酸序列；

34、所述的linker的氨基酸序列为(ggggs)n，其中n为1、2、3、4、5或6。

35、又一方面，本发明提供了一种经修饰的干细胞，所述的干细胞包含、表达和/或分泌下述（1）和（2）：

36、（1）第一蛋白，所述的第一蛋白的序列包含如seq id no.15所示的氨基酸序列；

37、（2）第二蛋白，所述的第二蛋白的序列包含如seq id no.16所示的氨基酸序列。

38、又一方面，本发明提供了一种干细胞，所述的干细胞包含、表达和/或分泌融合蛋白。

39、具体地，所述的的融合蛋白的序列包含如seq id no.17。

40、又一方面，本发明提供了一种干细胞，所述的干细胞包含下述（1）和（2）：

41、（1）第一核酸分子；

42、（2）第二核酸分子。

43、具体地，所述的第一核酸分子编码包含seq id no: 1-3所示的氨基酸序列的核苷酸序列；

44、所述的第二核酸分子编码包含seq id no: 4-6所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

45、进一步具体地，所述的第一核酸分子编码包含seq id no: 7-10所示的氨基酸序列的核苷酸序列；

46、所述的第二核酸分子编码包含seq id no: 11-14所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

47、又一方面，本发明提供了一种干细胞，所述的第一核酸分子和第二核酸分子之间由编码包含(ggggs)n所示的氨基酸序列的核苷酸序列连接，其中n为1、2、3、4、5或6。

48、优选地，所述的连n为3。

49、又一方面，本发明提供了一种干细胞，所述的干细胞包含下述（1）和（2）：

50、（1）第一核酸分子；

51、（2）第二核酸分子；

52、所述的第一核酸分子编码包含seq id no.15所示的氨基酸序列的核苷酸序列；

53、所述的第一核酸分子编码包含seq id no.16所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

54、又一方面，本发明提供了一种干细胞，所述的干细胞包含编码seq id no.17所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

55、具体地，所述的干细胞还包含、表达和/或分泌能够延长抗体在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。

56、进一步具地，所述的生物活性蛋白或其功能片段选自免疫球蛋白fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、his标签、gst标签、mbp标签、flag标签和sumo标签中的至少一种。

57、优选地，所述生物活性蛋白或其功能片段为人免疫球蛋白fc结构域。

58、进一步优选地，所述的生物活性蛋白或其功能片段为人igg的fc结构域，例如人igg1、igg2、igg3、igg4的fc结构域。

59、更一步优选地，所述生物活性蛋白或其功能片段为人igg1的fc结构域。

60、具体地，所述的干细胞选自胚胎干细胞、成体干细胞、间充质干细胞、脐带血干细胞、造血干细胞、神经干细胞、脂肪干细胞、皮肤干细胞或肌肉干细胞。

61、优选地，所述干细胞为间充质干细胞。

62、具体地，所述的干细胞分离自脐带血、脐带、胎盘、脂肪组织、皮肤、神经组织、骨髓或胚胎。

63、具体地，所述的干细胞分泌抗白细胞介素抗体。

64、进一步具体地，所述的干细胞分泌抗白细胞介素17抗体。

65、更进一步具体地，所述的干细胞分泌抗il-17a抗体。

66、又一方面，本发明提供了包含前述的干细胞的细胞培养物。

67、又一方面，本发明提供了一种提取物，所述的的提取物是从前述的细胞培养物中提取得到的。

68、具体地，所述的提取物为细胞培养上清、细胞裂解液和/或细胞外泌体。

69、进一步具体地，所述的细胞上清是指干细胞在其培养过程产生的富含多种细胞因子的原始的未经处理或经简单处理的培养液；

70、所述的细胞裂解液是指通过超声等方法破碎干细胞，使其释放出其中的可溶性蛋白和细胞中其他可溶性内容物；

71、所述的细胞外泌体是指一类具有完整膜结构的细胞外囊泡，主要负责细胞间的物质运输和信息传递，直径30-150nm。

72、又一方面，本发明提供了一种药物组合物，包含前述的干细胞或细胞培养物或提取物。

73、具体地，所述的药物组合物还包括药学上可接受的辅料。

74、进一步具体地，所述的药学上可接受的辅料包括但不限于：赋形剂、稳定剂、稀释剂、粘合剂、防腐剂、润滑剂、抗氧化剂中的任意一种或多种。

75、优选地，所述药学上可接受的辅料可选自乳糖、甘露糖、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、细结晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油中的至少一种。

76、又一方面，本发明提供了一种试剂盒，包括前述的干细胞或细胞培养物或提取物。

77、具体地，所述的试剂盒还包括固相载体、检测标记、检测底物和/或缓冲液。

78、进一步具体地，所述的固相载体可以是一种具有亲和性的材料，可以将特异性抗体固定在表面上。

79、所述的检测标记可以是酶标记物，所述的酶标记物是一种能够与抗体结合的酶，用于检测抗体与抗原的结合情况。

80、所述的检测底物可以是酶标记物的反应产物，能够在酶催化下产生可测量的信号。

81、又一方面，本发明提供了一种前述的干细胞的制备方法，所述制备方法包括：将所述的核酸分子通过病毒转染、脂质体转染、电转移、基因编辑或mrna转染导入干细胞。

82、又一方面，本发明提供了前述的干细胞或细胞培养物或提取物或药物组合物在制备预防和/或治疗疾病的药物中的应用。

83、具体地，所述的疾病包括但不限于：炎症性疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病、神经系统疾病和/或肿瘤。

84、进一步具体地，所述炎症性疾病包括但不限于：桥本甲状腺炎、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和/或原发性胆汁性肝硬化；

85、所述感染性疾病包括但不限于：细菌感染、病毒感染、真菌感染、支原体感染、衣原体感染和/或立克次体感染；

86、所述自身免疫性疾病包括但不限于：白塞氏病、系统性红斑狼疮、慢性盘状红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬皮病、进行性系统性硬化症、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、结节性动脉周围炎、主动脉炎综合征、恶性类风湿关节炎、类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、脊椎关节炎、混合性结缔组织病、卡斯尔曼病、干燥综合征、成人斯蒂尔病、血管炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏性血管炎、类风湿性血管炎、大血管血管炎、anca相关性血管炎、cogan综合征、rs3pe综合征、颞动脉炎、风湿性多肌痛、纤维肌痛、抗磷脂抗体综合征、嗜酸性筋膜炎、igg4相关疾病、格林巴利综合征、重症肌无力、慢性萎缩性胃炎、自身免疫性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、good-pasture综合征、急进性肾小球肾炎、狼疮性肾炎、巨幼红细胞性贫血、自身免疫性溶血性贫血、恶性贫血、自身免疫性中性粒细胞减少症、特发性血小板减少性紫癜、巴塞杜病、桥本病、自身免疫性肾上腺皮质功能减退症、原发性甲状腺功能减退症、艾迪生病、特发性艾迪生病、i型糖尿病、缓慢进展型i型糖尿病、局灶性硬皮病、银屑病、银屑病关节炎、大疱性类天疱疮、天疱疮、类天疱疮、妊娠疱疹、线性iga大疱性皮肤病、获得性大疱性表皮松解症、斑秃、白斑病、寻常型白斑病、视神经脊髓炎、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、多灶性运动神经病、结节病、巨细胞动脉炎、肌萎缩侧索硬化、原田病、自身免疫性视神经病、特发性无精子症、习惯性流产、炎症性肠病、乳糜泻、强直性脊柱炎、严重哮喘、慢性荨麻疹移植免疫、家族性地中海热、嗜酸性粒细胞慢性鼻窦炎、扩张型心肌病、系统性肥大细胞增多症和/或包涵体肌炎；优选地，所述自身免疫性疾病为斑块状银屑病、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎和/或狼疮性肾炎；

87、所述神经系统疾病包括但不限于：中枢神经系统感染、脑血管疾病、运动障碍性疾病、周围神经病、和/或神经和肌肉接头及肌肉疾病。

88、所述的肿瘤包括但不限于：基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、乳腺癌、腹膜癌、宫颈癌、胆管癌、绒毛膜癌、结直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌症、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌、胶质母细胞瘤、肝癌、肾癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌、呼吸系统癌、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、泌尿系统癌症、b 细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、慢性成髓细胞性白血病

89、更进一步具体地，所述的疾病包括类风湿关节炎、银屑病和/或银屑病关节炎。

90、具体地，所述的药物还包括药学上可接受的辅料。

91、进一步具体地，所述的药学上可接受的辅料包括但不限于：赋形剂、稳定剂、稀释剂、粘合剂、防腐剂、润滑剂、抗氧化剂中的任意一种或多种。

92、优选地，所述药学上可接受的辅料可选自乳糖、甘露糖、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、细结晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油中的至少一种。

93、又一方面，本发明提供了一种用于非诊断目的的体外检测样品中的il-17a的方法，所述方法包括以下步骤：

94、s1：前述的干细胞或细胞培养物或提取物与待测样品相接触；

95、s2：检测抗原-抗体复合物；

96、s3：判读结果。

97、本发明所取得的技术效果：

98、（1）本发明制备的基因修饰间充质干细胞（il17nb-msc）高表达igg4，表达量高达6843.33±845.33ng/ml；正常huc-msc不表达igg4。

99、（2）本发明制备的基因修饰间充质干细胞（il17nb-msc）高表达il-17nb，浓度为2212.33±214.65ng/ml；正常的间充质干细胞（huc-msc）则不表达il-17nb。

100、（3）本发明制备的基因修饰间充质干细胞（il17nb-msc）细胞分泌的il-17nb可以阻断il-17a/il17ra的结合，稀释4倍后抑制率高达51%；正常的间充质干细胞（huc-msc）无法阻断il-17a/il17ra的结合。