单域抗体修饰的干细胞及其在疾病治疗中用途的制作方法

本发明属于生物医药，具体涉及单域抗体修饰的干细胞及其在疾病治疗中用途。

背景技术：

1、细胞治疗技术是指将人自体或异体细胞经过体外处理，回输人体后治疗或预防疾病的技术，其中体外操作包括细胞在体外的传代、扩增、筛选以及给予药物或其他能改变细胞生物学行为的处理，经过处理的细胞发挥了主要治疗或预防疾病作用。细胞疗法主要包括：一类即以嵌合抗原受体t细胞（简称car-t）（zhao z, chen y, francisco nm, zhangy, wu m. the application of car-t cell therapy in hematological malignancies:advantages and challenges. acta pharm sin b. 2018;8(4):539-551.）、t细胞受体t细胞（简称tcr-t）、嵌合抗原受体自然杀伤细胞（简称car-nk）等为代表的在体外通过基因工程手段改造过的免疫细胞回输疗法，这种疗法也被fda定义为基于细胞的基因疗法；一类则是直接获取后在体外扩增至一定数目便可进行回输的细胞疗法，如使用调节性t细胞（treg）、肿瘤浸润淋巴细胞（til）等治疗方案（guidance for human somatic celltherapy and gene therapy[j]. human gene therapy, 2001, 12(3):303.）；一类则是直接获取后在体外扩增至一定数目便可进行回输的细胞疗法，如使用调节性t细胞（treg）、肿瘤浸润淋巴细胞（til）等治疗方案。

2、目前的细胞疗法大多存在特异性不强、长效性较强，存在一定的脱靶效应等缺陷。以较为热门的car-t疗法为例，其在血液系统恶性肿瘤取得了一定疗效，但在实体瘤中疗效甚微。

3、干细胞技术与免疫治疗方法的结合产生了一种联合免疫疗法。近年来，科学家们开发了许多治疗性分子，例如双功能多靶点抗体、融合蛋白和溶瘤病毒，并且正在对不同类型的干细胞进行修饰以促进其有效递送。其中将抗体修饰的干细胞用于治疗肿瘤已经取得了一定成效（hu, q. et al. conjugation of haematopoietic stem cells andplatelets decorated with anti-pd-1 antibodies augments anti-leukaemiaefficacy. nat biomed eng2, 831-840 (2018).；cordero a, ramsey md, kanojia d, etal. combination of tucatinib and neural stem cells secreting anti-her2antibody prolongs survival of mice with metastatic brain cancer. proc natl  acad sci u s a. 2022;119 (1): e2112491119.）。

4、国际专利申请wous22078320公开了一种修饰的cd117多肽，其包含抑制或减少与抗cd117抗体结合的一个或多个氨基酸修饰。还提供了编码修饰的cd117多肽的核酸，以及其中引入cd117核酸或多肽的细胞，例如造血干细胞，所述造血干细胞可用于例如造血细胞移植。

5、中国专利申请201980070933.9公开了一种或多种修饰的谱系特异性细胞表面抗原的遗传工程化造血细胞，例如造血干细胞（hsc）。在一些实施方案中，对一种或多种修饰的谱系特异性细胞表面蛋白进行修饰，使得谱系特异性细胞表面蛋白的一种或多种在hsc或表达其的后代细胞中至少部分保留其谱系特异性细胞表面抗原的生物学活性，但可逃避对相应野生型谱系特异性细胞表面抗原特异的细胞毒性剂的靶向作用。

6、目前本领域需要更多的修饰干细胞以用于免疫治疗。

技术实现思路

1、单域抗体（single domain antibody，sdab），也称纳米抗体（nanobody，nb)，最早是从骆驼血液中发现的新型抗体，因其只有两条重链，没有轻链，因此也被称为重链单域抗体vhh（variable domain of heavy chain of heavy chain antibody）。纳米抗体晶体直径2.5 nm，长4 nm，只包含一个重链可变区（vhh）和ch2、ch3区，相比于普通的抗体，纳米抗体轻链天然缺失，是自然存在的可以和抗原结合的最小片段。纳米抗体能像其他抗体一样与抗原等靶标紧紧结合，但不像单链抗体那样相互黏连聚集成块。以该“重链抗体”为基础的纳米抗体不仅分子量只是普通抗体的1/10，临床使用更加安全，而且化学性质也更加灵活、稳定性好、可溶性高、表达容易且容易偶联其他分子。

2、因此，本发明选取单域抗体修饰干细胞，并将两个单域抗体串联，以获得更好的技术效果。

3、为了实现上述技术目的，本发明特此提出了以下技术方案：

4、在一个方面，本发明提供了一种干细胞，所述干细胞包含、表达和/或分泌：

5、（1）第一抗体，所述的第一抗体包含特异性识别il-17a的单域抗体；和

6、（2）第二抗体，所述的第二抗体包含特异性识别il-17a的单域抗体；

7、所述的第一抗体包含序列如seq id no: 1-3所示的hcdr1、hcdr2、hcdr3；和/或；与seq id no: 1-3所示的氨基酸序列具有至少80%序列一致性的氨基酸序列；

8、所述的第二抗体包含序列如seq id no: 4-6所示的hcdr4、hcdr5、hcdr6；和/或；与seq id no: 4-6所示的氨基酸序列具有至少80%序列一致性的氨基酸序列。

9、其中，seq id no: 1为gedlgyya；

10、seq id no: 2为vtssgsst；

11、seq id no: 3为astillcsdyisafgt；

12、seq id no: 4为gfsihiya；

13、seq id no: 5为itrggvt；

14、seq id no: 6为naggtnggy。

15、在又一个方面，所述干细胞包含、表达和/或分泌：

16、1）第一蛋白，所述的第一蛋白的结构如fr1-hcdr1-fr2-hcdr2-fr3-hcdr3-fr4所示；

17、2）第二蛋白，所述的第二蛋白的结构如fr5-hcdr4-fr6-hcdr5-fr7-hcdr6-fr8所示；

18、所述hcdr1-hcdr6选自seq id no: 1-6所示的氨基酸序列；或；与seq id no: 1-6相比具有1、2、3、4或5个氨基酸差异的氨基酸序列；

19、所述fr1-fr8选自seq id no: 7-14所示的氨基酸序列；或；与seq id no: 7-14相比具有1、2、3、4或5个氨基酸差异的氨基酸序列。

20、其中seq id no: 7：dvqlvesggglvepgeslrlscaap。

21、seq id no: 8：iawfrqapgkerevvsc。

22、seq id no: 9：nylssvkdrftisidnakntvylqmnslkpedtavyyc。

23、seq id no: 10：wgqgtqvtvas。

24、seq id no: 11：evqlvesggglvqpggslrlscaas。

25、seq id no: 12：mgwyrqapgkqrelvat。

26、seq id no: 13：nnadsvkgrftisrdnakntaylqmnslkpedtavyyc。

27、seq id no: 14：wgqgtqvtvss。

28、在一些实施方案中，所述的第一蛋白的序列包含如seq id no: 16所示的氨基酸序列。

29、在一些实施方案中，所述的第二蛋白的序列包含如seq id no: 17所示的氨基酸序列。

30、seq id no: 16：

31、dvqlvesggglvepgeslrlscaapgedlgyyaiawfrqapgkerevvscvtssgsstnylssvkdrftisidnakntvylqmnslkpedtavyycastillcsdyisafgtwgqgtqvtvas。

32、seq id no: 17：

33、evqlvesggglvqpggslrlscaasgfsihiyamgwyrqapgkqrelvatitrggvtnnadsvkgrftisrdnakntaylqmnslkpedtavyycnaggtnggywgqgtqvtvss。

34、在又一个方面，本发明提供了所述的干细胞包含、表达和/或分泌融合蛋白；

35、所述的融合蛋白包含结构为fr1-hcdr1-fr2-hcdr2-fr3-hcdr3-fr4-linker-fr5-hcdr4-fr6-hcdr5-fr7-hcdr6-fr8的氨基酸序列；

36、hcdr1-hcdr6选自seq id no: 1-6所示的氨基酸序列；或；与seq id no: 1-6相比具有1、2、3、4或5个氨基酸差异的氨基酸序列；

37、fr1-fr8选自seq id no: 7-14所示的氨基酸序列；或；与seq id no: 7-14相比具有1、2、3、4或5个氨基酸差异的氨基酸序列；

38、所述linker为富含gly和ser的组合的肽，例如由重复的ggggs氨基酸序列组成的序列，优选2个以上重复的序列，例如2、3、4、5、6个重复的序列。

39、在一些优选的实施方案中，所述linker的氨基酸序列如seq id no: 15所示。

40、seq id no: 15：ggggsggggsggggs。

41、在一些优选的实施方案中，所述hcdr1具有如seq id no: 1所示的氨基酸序列，所述hcdr2具有如seq id no: 2所示的氨基酸序列. 所述hcdr3具有如seq id no: 3所示的氨基酸序列，所述hcdr4具有如seq id no: 4所示的氨基酸序列，所述hcdr5具有如seq idno: 5所示的氨基酸序列，所述hcdr6具有如seq id no: 6所示的氨基酸序列。

42、在一些优选的实施方案中，所述fr1具有如seq id: 7所示的氨基酸序列，所述fr2具有如seq id: 8所示的氨基酸序列，所述fr3具有如seq id: 9所示的氨基酸序列，所述fr4具有如seq id: 10所示的氨基酸序列，所述fr5具有如seq id: 11所示的氨基酸序列，所述fr6具有如seq id: 12所示的氨基酸序列，所述fr7具有如seq id: 13所示的氨基酸序列，所述fr8具有如seq id: 14所示的氨基酸序列。

43、在一些实施方案中，所述融合蛋白包含如seq id no: 18所示的氨基酸序列。

44、seq id no: 18：

45、dvqlvesggglvepgeslrlscaapgedlgyyaiawfrqapgkerevvscvtssgsstnylssvkdrftisidnakntvylqmnslkpedtavyycastillcsdyisafgtwgqgtqvtvasggggsggggsggggsevqlvesggglvqpggslrlscaasgfsihiyamgwyrqapgkqrelvatitrggvtnnadsvkgrftisrdnakntaylqmnslkpedtavyycnaggtnggywgqgtqvtvss。

46、在一些实施方案中，所述干细胞包含、表达和/或分泌能够延长所述第一抗体、第二抗体、第一蛋白、第二蛋白或融合蛋白在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。

47、在一些实施方案中，前述任一干细胞包含编码能够延长所述第一抗体、第二抗体、第一蛋白、第二蛋白或融合蛋白在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段的核苷酸序列。

48、在一些优选的实施方案中，所述生物活性蛋白或其功能片段选自免疫球蛋白fc结构域、血清白蛋白（例如，人血清白蛋白（hsa））、白蛋白结合多肽（例如has结合多肽）、前白蛋白（也称为转甲状腺素）、羧基末端肽（例如，人绒毛膜促性腺激素β亚基（ctp））、弹性蛋白样多肽（elp）、his标签（优选6×his）、gst（谷胱甘肽巯基转移酶）标签、mbp（麦芽糖结合蛋白）标签、flag标签、sumo（泛素样修饰蛋白）标签等中的至少一种。

49、在一些优选的实施方案中，所述生物活性蛋白或其功能片段为人免疫球蛋白fc结构域，优选人igg的fc结构域，例如人igg1、igg2、igg3、igg4的fc结构域，更优选人igg1的fc结构域。

50、可在本文中所提供抗体的fc区或fc结构域中引入一个或多个氨基酸修饰，以此产生fc区变体。fc区变体可包含在一或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰（例如置换、缺失和插入）的人fc区序列（例如人igg1、igg2、igg3或igg4 fc区）。

51、在又一个方面，本发明提供了一种干细胞，所述的干细胞包含：

52、ⅰ）第一核酸分子；和

53、ⅱ）第二核酸分子；

54、所述的第一核酸分子包含编码seq id no: 1-6的核苷酸序列；

55、所述的第二核酸分子包含编码seq id no: 7-14的核苷酸序列。

56、在一些实施方案中，所述的第一核酸分子包含编码seq id no: 19的核苷酸序列。

57、在一些实施方案中，所述的第二核酸分子包含编码seq id no: 20的核苷酸序列。

58、seq id no: 19：

59、gatgtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtcgagcctggggaatctctgaggctctcctgtgcagcccctggagaggatttgggttattacgccatagcctggttccgccaggccccagggaaggagcgtgaggtagtctcatgtgtcacaagtagtggtagtagcacaaactatttaagttccgtgaaggaccgattcaccatctccatagacaacgccaagaacacggtatatctgcaaatgaacagcctgaaacctgaggacacagccgtttattactgtgcgtccactattctcctctgttcagattatatctctgcctttggcacctggggccaggggacccaggtcaccgtcgcctcg。

60、seq id no: 20：

61、gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtgcagccgggggggtctctgagactctcctgtgcagcctctggatttagtatccacatctatgccatgggctggtaccgccaggctccagggaagcagcgcgagctggtcgcaactattactagaggtggtgtaacaaataatgcagactccgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacggcgtatctgcaaatgaacagcctgaaacctgaggacacggccgtctattactgtaatgcaggtgggacgaacgggggctactggggccaggggacccaggtcaccgtctcctca。

62、在又一个方面，本发明提供了一种干细胞，所述的干细胞包含：编码seq id no:18的核苷酸序列。

63、在一些实施方案中，编码seq id no: 18的核苷酸序列如seq id no: 21所示。

64、seq id no: 21：

65、gatgtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtcgagcctggggaatctctgaggctctcctgtgcagcccctggagaggatttgggttattacgccatagcctggttccgccaggccccagggaaggagcgtgaggtagtctcatgtgtcacaagtagtggtagtagcacaaactatttaagttccgtgaaggaccgattcaccatctccatagacaacgccaagaacacggtatatctgcaaatgaacagcctgaaacctgaggacacagccgtttattactgtgcgtccactattctcctctgttcagattatatctctgcctttggcacctggggccaggggacccaggtcaccgtcgcctcgggaggcggaggatctggcggaggtggaagtggcggaggcggttctgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtgcagccgggggggtctctgagactctcctgtgcagcctctggatttagtatccacatctatgccatgggctggtaccgccaggctccagggaagcagcgcgagctggtcgcaactattactagaggtggtgtaacaaataatgcagactccgtgaaggggcgattcaccatctccagagacaacgccaagaacacggcgtatctgcaaatgaacagcctgaaacctgaggacacggccgtctattactgtaatgcaggtgggacgaacgggggctactggggccaggggacccaggtcaccgtctcctca。

66、在一些实施方案中，前述任一核酸分子独立于所述经修饰的干细胞的基因组、或整合于所述经修饰的干细胞的基因组。

67、在一些实施方案中，前述任一核酸分子可操作地连接至启动子，例如组成型启动子、组织特异性启动子或诱导型启动子。

68、在一些实施方案中，所述干细胞选自胚胎干细胞、成体干细胞、间充质干细胞、脐带血干细胞、造血干细胞、神经干细胞、脂肪干细胞、皮肤干细胞或肌肉干细胞等。

69、在一些实施方案中，所述干细胞分离自脐带血、脐带、胎盘、脂肪组织、皮肤、神经组织、骨髓或胚胎等。

70、在一些优选的实施方案中，所述干细胞可以为间充质干细胞。

71、在一些优选的实施方案中，所述间充质干细胞分离自骨髓组织、脂肪组织、脐带组织或胎盘组织。

72、在一些实施方案中，前述任一干细胞分泌抗白细胞介素抗体。

73、在一些实施方案中，前述任一干细胞分泌抗白细胞介素17抗体。

74、在一些优选的实施方案中，前述任一干细胞分泌抗il-17a抗体。

75、在又一个方面，本发明提供了一种细胞培养物，所述细胞培养物经前述任一干细胞培养获得。

76、在又一个方面，本发明提供了一种提取物经所述细胞培养物提取获得。

77、在一些实施方案中，所述提取物不含前述任意一种的经修饰的干细胞。

78、在一些实施方案中，所述提取物不含血清。

79、在又一个方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含前述任一干细胞、前述任一细胞培养物或前述任一提取物。

80、在一些实施方案中，所述药物组合物还包括至少一种药学上可接受的辅料。

81、在一些实施方案中，所述辅料选自溶剂、稀释剂、崩解剂、沉淀抑制剂、表面活性剂、助流剂、粘合剂、润滑剂、分散剂、助悬剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、缓冲剂、吸收剂、着色剂、香味剂、甜味剂、离子交换剂、脱模剂、涂布剂、矫味剂或抗氧化剂中的至少一种。

82、在又一个方面，本发明提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括前述任一干细胞、前述任一细胞培养物、前述任一提取物或前述任一药物组合物。

83、在又一个方面，本发明提供了前述任一干细胞的制备方法，所述制备方法包括：

84、将所述的核酸分子通过病毒转染、脂质体转染、电转移、基因编辑或mrna转染导入干细胞。

85、在一些实施方案中，本领域技术人员可以通过本领域公知的方法和技术对干细胞进行遗传修饰，例如物理、化学或生物学方法，或其组合。例如，所述生物学方法包括使用病毒载体，例如慢病毒、逆转录病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒i、腺病毒和腺伴随病毒等等。例如，所述化学手段包括胶体分散系统，诸如大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠等；基于脂质的系统，包括水包油乳剂、胶束、混合胶束或脂质体等。例如，所述物理方法包括磷酸钙沉淀、脂质转染法、粒子轰击、微注射、电穿孔等。

86、在又一个方面，本发明提供了前述任一干细胞、前述任一细胞培养物、前述任一提取物或前述任一药物组合物在制备预防和/或治疗炎性疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病、神经系统疾病和/或肿瘤药物中的用途。

87、在又一个方面，本发明提供了前述任一干细胞、前述任一细胞培养物、前述任一提取物或前述任一药物组合物在制备炎性疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病、神经系统疾病和/或肿瘤的诊断产品中的用途。

88、在一些实施方案中，所述自身免疫性疾病包括白塞氏病、系统性红斑狼疮、慢性盘状红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬皮病、进行性系统性硬化症、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、结节性动脉周围炎、主动脉炎综合征、风湿性关节炎、类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、脊椎关节炎、混合性结缔组织病、卡斯尔曼病、干燥综合征、成人斯蒂尔病、血管炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏性血管炎、类风湿性血管炎、大血管血管炎、anca相关性血管炎、cogan综合征、rs3pe综合征、颞动脉炎、风湿性多肌痛、纤维肌痛、抗磷脂抗体综合征、嗜酸性筋膜炎、igg4相关疾病、格林巴利综合征、重症肌无力、慢性萎缩性胃炎、自身免疫性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、good-pasture综合征、急进性肾小球肾炎、狼疮性肾炎、巨幼红细胞性贫血、自身免疫性溶血性贫血、恶性贫血、自身免疫性中性粒细胞减少症、特发性血小板减少性紫癜、巴塞杜病、桥本病、自身免疫性肾上腺皮质功能减退症、原发性甲状腺功能减退症、艾迪生病、特发性艾迪生病、i型糖尿病、缓慢进展型i型糖尿病、局灶性硬皮病、银屑病、银屑病关节炎、大疱性类天疱疮、天疱疮、类天疱疮、妊娠疱疹、线性iga大疱性皮肤病、获得性大疱性表皮松解症、斑秃、白斑病、寻常型白斑病、视神经脊髓炎、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、多灶性运动神经病、结节病、巨细胞动脉炎、肌萎缩侧索硬化、原田病、自身免疫性视神经病、特发性无精子症、习惯性流产、炎症性肠病、乳糜泻、强直性脊柱炎、严重哮喘、慢性荨麻疹移植免疫、家族性地中海热、嗜酸性粒细胞慢性鼻窦炎、扩张型心肌病、系统性肥大细胞增多症或包涵体肌炎。

89、在一些实施方案中，所述肿瘤包括基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、乳腺癌、腹膜癌、宫颈癌、胆管癌、绒毛膜癌、结直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌症、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌、胶质母细胞瘤、肝癌、肾癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌、呼吸系统癌、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、泌尿系统癌症、b细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、慢性成髓细胞性白血病。

90、在又一个方面，本发明提供了一种用于非诊断目的的体外检测样品中的il-17a的方法，所述方法包括以下步骤：

91、d1：前述任一干细胞、前述任一细胞培养物或前述任一提取物与待测样品相接触；

92、d2：检测抗原-抗体复合物；

93、d3：判读结果。

94、在一些实施方案中，所述待测样品不来自有生命的人体或动物。

95、在又一个方面，本发明提供了一种预防和/或治疗疾病的方法，所述方法包括：

96、向有需要的受试者施用前述任一干细胞、前述任一细胞培养物、前述任一提取物或前述任一药物组合物。

97、在一些实施方案中，所述疾病包括，但不限于：炎性疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病、神经系统疾病和/或肿瘤。

98、在一些实施方案中，所述受试者既往接受过化学治疗。

99、在一些实施方案中，所述自身免疫性疾病包括，但不限于白塞氏病、系统性红斑狼疮、慢性盘状红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬皮病、进行性系统性硬化症、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、结节性动脉周围炎（结节性多动脉炎、显微镜下多血管炎）、主动脉炎综合征（高安动脉炎）、（恶性类）风湿性关节炎、类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、脊椎关节炎、混合性结缔组织病、卡斯尔曼病、干燥综合征、成人斯蒂尔病、血管炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏性血管炎、类风湿性血管炎、大血管血管炎、anca相关性血管炎（例如，韦格纳肉芽肿和嗜酸性韦格纳肉芽肿）、cogan综合征、rs3pe综合征、颞动脉炎、风湿性多肌痛、纤维肌痛、抗磷脂抗体综合征、嗜酸性筋膜炎、igg4相关疾病（例如，原发性硬化性胆管炎、自身免疫性胰岛炎等）、格林巴利综合征、重症肌无力、慢性萎缩性胃炎、自身免疫性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、good-pasture综合征、急进性肾小球肾炎、狼疮性肾炎、巨幼红细胞性贫血、自身免疫性溶血性贫血、恶性贫血、自身免疫性中性粒细胞减少症、特发性血小板减少性紫癜、巴塞杜病（格雷夫斯病（甲亢））、桥本病、自身免疫性肾上腺皮质功能减退症、原发性甲状腺功能减退症、艾迪生病（慢性肾上腺皮质功能减退症）、特发性艾迪生病、i型糖尿病、缓慢进展型i型糖尿病（成人隐匿性自身免疫性糖尿病）、局灶性硬皮病、银屑病、银屑病关节炎、大疱性类天疱疮、天疱疮、类天疱疮、妊娠疱疹、线性iga大疱性皮肤病、获得性大疱性表皮松解症、斑秃、白斑病、寻常型白斑病、视神经脊髓炎、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、多灶性运动神经病、结节病、巨细胞动脉炎、肌萎缩侧索硬化、原田病、自身免疫性视神经病、特发性无精子症、习惯性流产、炎症性肠病（例如溃疡性结肠炎、克罗恩病）、乳糜泻、强直性脊柱炎、严重哮喘、慢性荨麻疹移植免疫、家族性地中海热、嗜酸性粒细胞慢性鼻窦炎、扩张型心肌病、系统性肥大细胞增多症或包涵体肌炎等。

100、在一些实施方案中，所述癌症（或肿瘤）包括，但不限于基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、乳腺癌、腹膜癌、宫颈癌、胆管癌、绒毛膜癌、结直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌症、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌、胶质母细胞瘤、肝癌、肾癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌（例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌）、淋巴瘤（包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤）、黑色素瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌、呼吸系统癌、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、泌尿系统癌症、b细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病（cll）、急性成淋巴细胞性白血病（all）、毛细胞白血病、慢性成髓细胞性白血病等。

101、与现有技术相比，本发明提供的基因修饰间充质干细胞至少具有以下有益效果：

102、（1）il-17nb抗体表达含量高，抗体浓度可达2769 ng/ml；

103、（2）表达的il-17nb可有效阻断il-17a与il-17ra结合，抑制率可达58%；

104、（3）稳定性高，24 h-96 h内稳定、持续分泌il-17nb，分泌量在96 h时可达5121ng/ml；稳定性显著优于单纯的重组c3-h10蛋白。