本发明涉及微生物，尤其涉及一种固定化菌剂的制备方法及其应用。
背景技术：
1、多环芳烃（polycyclic aromatic hydrocarbons, pahs）是一类由两个或两个以上苯环以线性、角状或簇状排列组成的有机化合物，其主要来源于有机物质的不完全燃烧。pahs在环境中广泛存在，可以通过土壤传播，进而影响人类健康和生态系统。
2、现有技术中常采用微生物技术修复受到pahs污染的土壤，例如，将游离的微生物固定化在载体（例如生物炭）上，得到固定化菌剂，通过向土壤中施加固定化菌剂去除土壤中的pahs。但是，现有的微生物技术对于土壤中的pahs的去除效果仍然不佳，且在去除pahs的过程中，不能同时固定土壤中的二氧化碳。
技术实现思路
1、本发明提出一种固定化菌剂的制备方法及其应用，通过本发明制备得到的固定化菌剂能够较好地去除土壤中的多环芳烃，于此同时固定土壤中的二氧化碳。
2、为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
3、第一方面，本发明提供一种固定化菌剂的制备方法，包括：
4、配制功能菌群的菌液；功能菌群包括考克氏菌（ kocuria sp.）bj05、葡萄球菌（ staphylococcus sp.）bj06、恶臭假单胞菌（ pseudomonas putida.）cicc23685、鞘氨醇菌（ sphingobium sp.）rs2以及木醋杆菌（ acetobacter xylinum.）atcc23767；其中，考克氏菌（ kocuria sp.）bj05于2025年2月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.33674；葡萄球菌（ staphylococcus sp.）bj06于2025年2月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.33675；
5、将功能菌群的菌液以5~50 ml：1 g的比例固定在生物炭上，得到固定化菌剂。
6、本发明的另一方面，配制功能菌群的菌液，包括：
7、对功能菌群中的每一种菌进行单独活化和培养，直至功能菌群中的每一种菌达到对数生长期，收集每一种菌的菌体，再分别用无机盐培养基调整每一种菌的菌体od600=1.0，分别得到考克氏菌bj05的菌液、葡萄球菌bj06的菌液、恶臭假单胞菌cicc23685的菌液、鞘氨醇菌rs2的菌液以及木醋杆菌atcc23767的菌液；
8、按照0.95~1.05：0.95~1.05：0.95~1.05：0.95~1.05：0.95~1.05的体积比例，将考克氏菌bj05的菌液、葡萄球菌bj06的菌液、恶臭假单胞菌cicc23685的菌液、鞘氨醇菌rs2的菌液以及木醋杆菌atcc23767的菌液进行混合，得到功能菌群的菌液。
9、本发明的另一方面，固定方法为：
10、将功能菌群的菌液与生物炭按照5~50 ml：1 g的比例混合，得到混合物，将混合物在20~45 ℃、140~160 rpm的条件下恒温培养0.5~4天，得到培养液，再将培养液以11000~13000 rpm的转速离心10~22 min并弃去上清液，置于25~30 ℃的烘箱内干燥6~10 h，得到固定化菌剂。
11、本发明还提供了上述制备方法所制备得到的固定化菌剂在同时去除土壤中多环芳烃和固定土壤中二氧化碳的应用。
12、本发明的另一方面，多环芳烃包括萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并蒽、䓛和苯并芘中的任意一种或多种。
13、本发明所提供的制备方法通过两株新菌考克氏菌（ kocuria sp.）bj05和葡萄球菌（ staphylococcus sp.）bj06结合其他三种菌制备得到的固定化菌剂，该固定化菌剂可以比较高效地降低土壤中pahs的含量，还可以通过固定co2增加土壤有机碳（soc）含量，安全有效且处理成本较低，适合广泛推广。
1.一种固定化菌剂的制备方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述配制功能菌群的菌液，包括：
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定方法为：
4.权利要求1~3中任一所述的方法制备得到的固定化菌剂在同时去除土壤中多环芳烃和固定土壤中二氧化碳的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述多环芳烃包括萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并蒽、䓛和苯并芘中的任意一种或多种。