控制培养的方法及其设备的制作方法

专利名称:控制培养的方法及其设备的制作方法
本发明涉及控制培养的方法及其设备。更具体地讲，是涉及控制培养由微生物，动物细胞或植物细胞有效地生产如抗生素，氨基酸，酶和生理活性物质这类代谢物的方法及其设备。
用微生物，动物细胞或植物细胞生产上述的代谢物是常规的作法。大多数已经采用的常规方法，是在培养罐中的培养基上对种子培养物进行简单的培养，其生产力不高。
因此，本发明者们已经对把底物和诱导物加入到培养过程中并从而改善生产力的培养方法进行了研究。迄今还没有报导过应该将底物和诱导物加入到培养阶段的工业性研究。
例如，日本公开待批专利第141796/1983已经公开了一种生产代谢物，即肽的培养方法。然而，在这一方法中却不可能观察到细胞的连续生长，即在线生长。那么事实上当然也就没有讨论加入底物和(或)相似物质的适宜时机。日本公开待批专利第125686/1977揭示了一种培养酵母的方法，虽然它不是用来生产代谢物。这一方法包括根据总耗氧率并同时使被称作为呼吸商的指数保持在限定范围内的情况来将肉汤加到培养物中。但是，其中并没有采用包括加入底物和(或)类似物并监测呼吸商变化的过程。
本发明的目的是提供一种有效地培养细胞以工业规模生产代谢物的方法和其设备。
在本发明的方法中，是在好氧条件下培养细胞生产代谢物，其特征在于，向培养液中加中底物和(或)诱导物，确定细胞生长的终点和(或)代谢物的生产，或者根据建立在细胞培养物放出的二氧化碳量之上的第一参数相对于建立在细胞培养物耗氧量之上的第二参数的变化率来终止培养。
本发明中所用的细胞，可以是微生物细胞，动物细胞或植物细胞。把本发明应用于培养基因重组的细菌细胞时，将会产生特别显著的效应。
在本发明的方法中，代谢物的生产可在细胞培养之后，或在细胞培养的同时进行。从工业观点出发，则优选后一种方法。
对每一个参数的测定及对培养的控制，包括根据参数来开始或停止控制，最好以在线方式进行。
以这样的参数为基础的一个典型的比率是呼吸商，此后简称为RQ。RQ指的是二氧化碳量与氧气量之比，并由下列各式所代表。即RQ可由下列各式确定，其中△O2表示输入气与排出气之间氧气量的改变，相似地，△CO2代表输入气与排出气之间二氧化碳量的改变，Q代表总的气体量，Cell代表细胞数量。
RQ＝△CO2/△O2(1)RQ＝Q·△CO2/Q·△O2(2)RQ＝(△CO2/Cell)/(△O2/Cell) (3)△O2和△CO2在各式中，是基于上述数据的参数。在预先知道输入气中各成份浓度的情况下，则只需测定排出气中各成份的浓度。进而，这一比率不受RQ的限制，但能被下述方式所修饰。例如这样的一些比率，RQ-1，RQ×A，此处A代表一个常数，RQ÷B，此处B代表一个常数，△CO2/(△CO2+△O2)，△O2/(△O2+△CO2)，(△CO2×B)/(△O2×A)和(△CO2+A)/(△O2+B)，它们均可用于本发明。
优选的加入底物和(或)诱导物的时机，是在以RQ为指导，从RQ开始上升至这一上升刚好终止的期间内。
RQ的第二个峰，一般被认为是判定代谢物生产终止的尺度，因此，优选在这一点终止培养。
本发明的设备包括培养罐;在培养罐上有开口的输气管;排气管;底物输入管;测定输气管中通过气量的第一块气量表;第一个氧气分析仪;测定由培养罐上方经过排出管气量的第二块气量表;第二个氧气分析仪;二氧化碳分析仪，以及计算机，用作输入从每个表和分析仪来的信号，以及用于输出开启或关闭从底物输入管到培养罐的管道和(或)送料控制器的信号。
应该理解的是，在不脱离本发明的范围之内，可以将一些除上述以外的仪器加到本发明的设备上，例如，将二氧化碳分析仪安装在供气管上并装有第一个氧气分析仪，或者一个罐用于加入底物而另一个罐用于加入诱导物。在这种情况下，二氧化碳分析仪输出的信号应当与其他仪表和分析仪的输出信号一同传送到电子计算机。另一方面，当输入气的组分，即氧气和二氧化碳的浓度已预先知道了的话，例如，使用了氧气钢瓶，则这些用于输入气的气体分析仪就可被免去，因而就没必要将这些分析仪的信号输入到计算机中。这种情况也包括在本发明的范围内。进而，从在线操作的观点来看，优选根据上述计算机的输出来加入底物和诱导物。在这种情况下，优选的加入这些物质的方式，是通过泵和(或)装在每个罐上的阀门，或装在从每个罐连到培养罐的管道上的阀门。
附图的简要说明图1是表示复合质粒pTREZ1结构的示意图。
图2表示trp启动子下游方的碱基序列。
图3表示构造复合质粒pTREZ1的流程图。
图4表示RQ，细胞生长和β-半乳糖苷酶生产相互之间的关系。
图5是本发明培养控制设备实例的示意图。
图6和图7分别各自表示在体积为50升的自动控制培养罐中SM发酵试验的结果。
图8和图9表示与本发明实施例相关的实际控制培养的结果。
作为本发明的第一个实例，以下描述的是培养基因重组细菌生产β-半乳糖苷酶(β-gal)的方法。
近来已发展出了这样的基因重组技术，即将带有关于生产有用物质遗传信息的基因整合到宿主微生物的载体质粒上从而制备出复合质粒，从而利用保留有这种复合载体的宿主微生物大量生产有用的物质。这些技术已被实际用于生产干扰素，胰岛素及类似物质，其中以大肠杆菌(Escherichia coli)作为宿主微生物。
然而，迄今还没有已知的用带有所需基因的基因重组细菌工业化大量生产所需产物的方法，所以，一直急需建立一种高效培养基因重组细菌的方法。
在本实例中，微生物细胞内载有或保留有包括所需基因及载体和启动子的复合质粒，并且将这种能诱导基因表达的细胞进行培养，使微生物表达所需的基因并大量收集产物，在RQ在培养期间表现迅速上升时，同时加入底物和诱导物。
作为表达所需基因的启动子，可用的有trp(色氨酸)启动子，lac启动子(Nature，281，pp544-548，1979)，tac启动子(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，80，pp21-25，1983)等等。
作为由trp启动子和β-半乳糖苷酶基因连接而获得的复合质粒，可用的有具备图1所示结构的质粒pTREZ1。复合质粒pTREZ1可由质粒pTRE1和pMC1403获得。
含有trp启动子的复合质粒pTRE1，是将含有大肠杆菌的trp操纵子，trpL(引导肽)和trpE(邻氨基苯甲酸合成酶)的部分终端的约500bp(碱基对)的DNA片段插入到质粒pBR322(Gene，29，pp41-49，1984)的EcoRⅠ位点而获得的。trp启动子的方向是质粒pBR322的Trc(四环素抗性基因)的方向。trp启动子上游方的EcoRⅠ位点，需要充满DNA聚合酶Ⅰ，以便仅改变启动子下游方的EcoRⅠ位点。图2表示了下游区的trp启动子的碱基序列。将外来基因连接在trpE多肽基因的EcoRⅠ位点上，就能以与trpE多肽N末端的8个氨基酸相融合的形式表达外来基因。
另一方面，对β-半乳糖苷酶基因，可以使用质粒pMC403(J.Bacteriol，143，pp971-980，1980)。质粒pMC1403是将6.2Kb(千碱基对)的β-半乳糖苷酶基因(lac′Z+lacY)插入到pBR322的EcoRⅠ位点和SalⅠ位点之间而获得的。
图3表示了建造质粒pTREZ1的过程，其中，β-半乳糖苷酶基因连在trp启动子的下游方。具有10.21Kb的复合质粒pTREZ1，可以用T4DNA连接酶将含有切自质粒pTRE1的trp启动子的4.21Kb的DNA片段，与切自质粒pMC1403的6.2Kb的β-半乳糖苷酶基因连接而成。
作为细胞内载有包含所需基因及载体和启动子的杂交质粒并且能表达所需基因的微生物，可用的有各种大肠杆菌，例如M182，HB101，C600，X1776，DH1等等。在它们当中，将具有上述结构的复合质粒pTREZ1引入到染色体中缺乏β-半乳糖苷酶基因的大肠杆菌M182品系(储存于FRI，储存号为FERM BP-816)中而获得的用于生产β-半乳糖苷酶的重组体，以及将复合质粒pTREZ1引入到大肠杆菌HB101(储存于FRI，储存号为FERM BP-815)中而获得的生产β-半乳糖苷酶的重组体，均受trp启动子的控制，而且，由于有效地利用了启动子的作用，所以生产的β-半乳糖苷酶的产量显著地大于已知的方法。
除了大肠杆菌之外，其他的微生物，例如酵母，枯草杆菌(Bacillus subtilis)等，当使用了适宜的启动子并且把所需的基因引入其中之后，均可用作宿主微生物。
根据这个实例，含有包括所需基因，表达所需基因的载体的复合质粒的微生物，例如，用于生产β-半乳糖苷酶的微生物，被用来表达所需的基因，从而高效率地生产出其产物，例如β-半乳糖苷酶。为了控制重组体的培养，将重组体置于用于培养的培养基中，并且将底物和(或)诱导物加到培养基中。
作为诱导物，对trp启动子可以使用3-β-吲哚基丙烯酸(IA)，对lac启动子和tac启动子可以使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)等等。
作为底物，可以使用酪蛋白氨基酸(它是一种氨基酸混合物)，葡萄糖，色氨酸以外的氨基酸，酵母膏，或它们的混合物。其中，优选酪蛋白氨基酸。
已知的是，在培养过程中加入IA，则使具有trp启动子的复合质粒表达基因(Nature，291，pp503-506，1981)。这是因为抑制基因转录的阻遏物被IA灭活，从而启动了由RNA聚合酶合成mRNA。
本发明者们，对使用基因重组β-gal生产菌高效生产β-gal的各种控制培养方法进行了研究，最后成功地生产了大量的β-gal，从而完成了本发明。
当加入诱导物IA时，trp启动子开始工作。加入诱导物对所需基因生产其产物是非常重要的。对于加入IA的时间，Nature，vol.291，pp503-506，1981揭示了一种在培养开始1小时后加入IA的方法，日本公开待批专利第141796/83号揭示了一种以微生物浓度作为指示的方法。然而，这些方法对于工业化培养均是不够的。
本发明者们对在这些方法中的适宜菌株生理学阶段的添加IA进行了研究，并且发现，在培养过程中，RQ的改变与细胞的生长和β-gal的生产密切相关。在此处所说的RQ，是指以细胞所产生的CO2量除以其所耗O2量而确定的值。如图4所示，在细胞生长阶段，RQ基本保持在1mol/mol的常数上。培养开始后6.5小时，细胞浓度达到最大值，此时RQ迅速上升至1.25mol/mol。在该点，葡萄糖，即底物被消耗。开始培养8.5小时后，同时加入作为诱导物的IA15μg/ml，和作为生产β-gal的底物酪蛋白氨基酸2.5mg/ml。其结果是，开始培养的18小时后，β-gal的产量由4.5u/ml上升到12.3u/ml。加入IA和酪蛋白氨基酸之后，RQ又回到约1mol/mol，表示细胞几乎不生长。这一结果表明，生产了β-gal并且积累于细胞内。开始培养16.5小时后，RQ迅速上升。看来细胞对β-gal的生产在该点终止。
因此，也就揭示出以下事实，即在细胞生长期间RQ保持在1mol/mol常数上，并且在细胞停止生长时就从该处迅速上升，此时加入诱导物和底物，细胞生产其代谢物β-gal，这时的RQ为1mol/mol，当β-gal的生产完成时，RQ又迅速上升。因此，在RQ的指导下控制培养，可以有效地大量生产代谢物。
与此相对照，先有技术，如日本公开待批专利125686/1977所揭示的以RQ为指导的控制培养，存在着这样的缺点，即在喂养培养物时如过量地喂以底物，其结果会形成副产物乙醇，乙醇对细胞的生长有不良的影响，导致细胞的产量下降。由于在这种情况下，RQ值超过1mol/mol就警告着会有乙醇产生，所以底物的供给就应该减少或暂停。此时，RQ的改变与乙醇的生成有关，但这与本发明的情况不同。在本实例中，RQ的改变与细胞的生长和代谢物的生产相关。即当RQ表现出上升时加入底物，这与培养面包酵母的情况相反。在本实例中，微生物或类似的细胞有效地生产代谢物，这是基于这样的发现，即在培养细胞生产代谢物期间，RQ值的变化肯定不同于培养面包酵母。
在本实例中，可以在细胞停止生长并RQ上升时加入葡萄糖和酪蛋白氨基酸，从而诱导细胞进一步生长，在更高的细胞浓度上继续培养，然后加入诱导物和底物。此外，在加入诱导物和底物后RQ表现出上升时，还可加入额外的诱导物和底物，例如酪蛋白氨基酸，从而获取更大量的细胞代谢物。
当基因重组细菌带有非trp的对于表达载体的启动子，例如lac(乳酸)启动子时，则以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)作为诱导物。用微生物生产代谢物，均可用相同的控制方式，只是要用不同的底物和诱导物，但对基因重组细菌，动物细胞及植物细胞就不同了。
图5表示了本实例所需的典型设备。培养基和培养种子放入培养罐1中，基因重组细菌在其中培养，并且通过导管7向培养罐1中吹入空气，以搅拌器2搅拌培养汁。在此期间，用计算机4对来自安装在导管7上的气表5和氧气分析仪6的数据进行分析，确定入口处的氧气量，同时，对出口处的氧气和二氧化碳量，则以同样的方式，用计算机在来自安装在导管13上的气表10，氧气分析仪11和二氧化碳分析仪12的数据的基础上加以确定，进而算出RQ。当RQ表现出迅速上升时，则计算机4就发出信号打开底物添加泵8，这样，就将IA和酪蛋白氨基酸由底物罐3通过导管9加入到培养罐1中。当RQ再次表现出迅速上升时，则终止培养，将细胞从培养汁中回收出来，研碎分离，对积累于其中的β-gal进行纯化。
当供给的不是空气而是纯氧时，就不需要氧气分析仪6，当供给的是含二氧化碳的气体时，优选再加一个二氧化碳分析仪。
作为氧气分析仪，可使用膜类氧气敏感器，作为二氧化碳分析仪，则可以使用红外吸收分析仪，作为流量表，可用热质流量表。
优选的底物举例有葡萄糖，酪蛋白氨基酸和它们的混合物。
当底物(养料)和诱导物一起使用时，则优选同时加入这两种物质。
作为本发明的第二个实例，以下描述了用灰色链霉菌(Streptomyces griseus)生产作为其代谢物的抗生素的方法，类似于链霉素(SM)的发酵生产。
对在SM发酵过程中所添加的各种底物进行了研究，发现葡萄糖更有效。然后，又研究了使用培养瓶添加葡萄糖的适宜时期。表1给出其结果。
在第一、第二和第五天向培养物中加入葡萄糖，每次增加10g/l。对每一种情况均没有观察到显著的效应。
然后，基于在SM的生产达到最大之后加入葡萄糖可能会有效这一假设，则在培养的第2.5天，以5，10和20g/l这种增加的量加入了葡萄糖。表2给出其结果。
表2指出，在培养的第2.5天，以10g/l的增加量加入葡萄糖，则使SM的产量增加1.5倍。
图6(a)-(c)和图7(a)-(d)表示了发酵生产SM的结果，发酵中使用了包括50升培养罐的自动控制培养设备以检验何时应该加入葡萄糖。当培养的第二天所生产的SM达到峰值时，耗氧率及二氧化碳生成率均迅速下降。此时的葡萄糖浓度为10g/l，这表明有葡萄糖起始量的50%仍然保留着。然而，观察到的这种现象，可能是因为SM生产细菌的代谢由生产SM的方向上转换到其他方向了。本发明者首次发现了这种耗氧率和二氧化碳生成率的迅速改变。因此，在这些改变的指导下加入葡萄糖，就使SM的生产力得到了改善。
从供入气的氧气量(mol/h)减去排出气中的氧气量(mol/h)来确定耗氧率，从排出气中的二氧化碳量(mol/h)减去供入气中的二氧化碳量(mol/h)来确定二氧化碳生成率。当供入气为常量时，则排出气中氧气和二氧化碳浓度的改变，就可用作指示参数。
糖类，例如糖，和氨基酸，可以作为类似于葡萄糖的底物加入。
在实施本实例时，应该先做一个试验培养，使用与实际培养时所用相同的底物，菌株或细胞，以确定在特定条件组合的情况下，耗氧率和(或)二氧化碳生成率在哪一点上迅速改变，并且基于这一预先试验的结果，可以确定实际加入的时间。
以下给出的是分别对应于上述实例的实施例。
实施例1菌株带有复合质粒pTREZ1的大肠杆菌菌株HB101。该菌株源自大肠杆菌K-12，是已知的基因重组的典型宿主。它的基因型为F-(缺失F因子)，hsd S20(r-B，m-B)，recA 13 ara-14，proA2，lacY 1，galK 2，rpsL 20(Srm)，xyl-5，mtl-1，supE 44和λ-(缺失λ噬菌体)。
培养基M9-酪蛋白氨基酸培养基(pH7.0)，含有1克NH4Cl，6克Na2HPO4，3克KH2PO4，5克NaCl，0.1克MgSO4·7H2O，15毫克CaCl2·2H2O，5克葡萄糖，2.5克酪蛋白氨基酸，0.1克硫胺素，0.1克脯氨酸和1升蒸馏水。此后，进而加入50μg/ml氨苄青霉素于培养基中，从而选择性地仅使带有复合质粒的大肠杆菌菌株生长。
培养条件在8个容积为500毫升并且其中装有50毫升M9-酪蛋白氨基酸培养基的摇瓶中，接种带有复合质粒的大肠杆菌菌株〔储存在FRI，储存号FERM BP815;E.coli HB101(pTREZ1)〕，在37℃以每分钟115次振动，振距7cm的摇振条件过夜培养。以100毫升细胞培养物作为培养种子，接种到容积为5升并含有2升M9-酪蛋白氨基酸培养基的4个罐式发酵器中，在其中培养。向其中加入两滴消泡剂(Leocon 1750W;mfd.Lion Co，Ltd的产品)。细胞过夜培养，温度为37℃，pH7.0，以每分钟600转机械搅拌，通气率为每分钟2升。将8升这种培养汁接种到容积为50升的自动控制培养设备中，加入M9-酪蛋白氨基酸培养基使总体积为30升。加入与上述相同的消泡剂，进行培养时，温度为37℃，pH为7.0，通气率为每分钟6升，溶氧浓度为3mg/l，以每分钟150-400转机械搅拌。
结果如图6所示，培养开始后约4小时，RQ迅速上升。然后加入IA15微克/毫升，酪蛋白氨基酸2.5毫克/毫升。当RQ表现出上升时，细胞浓度为2.69g/l，β-gal的量为4.3u/ml。开始培养13小时后，RQ再次上升。此时，细胞浓度为2.66g/l，β-gal的量为8.3u/ml。这就是说，当β-gal几乎增长一倍时细胞的浓度变化很小。
这些结果表明，在RQ的指导下加入IA和酪蛋白氨基酸可以明显地提高β-gal的产率。
在RQ达到第二个峰后可以终止培养。
作为带有复合质粒pTREZ1的菌株，来自大肠杆菌K-12的并在染色体上缺失β-gal基因的大肠杆菌M182，以及基因型由△(lac IPOZY)X74，galK，galU，StrA所代表的菌株均可使用。在这种情况下，培养基和培养条件均与上述相同，不同的是用带有复合质粒的大肠杆菌菌株〔E.coli M182(pTREZ1)，储存于FRI，储存号为FERM BP-816〕代替了上面的大肠杆菌。
实施例2菌株灰色链霉菌(Streptomyces griseus)HUT2247。
培养基成分25克葡萄糖，2克(NH4)2SO4，0.4克KH2PO4，1克NaCl，6克K2SO4，0.2克MgSO4·7H2O，0.01克FeSO4·7H2O，0.05克ZnSO4·7H2O，7克L-天冬酰胺，2克CaCO2和1升蒸馏水(pH7.0)。
培养条件30升培养基加到容积为50升的培养罐中，然后向其中加入600毫升预先经48小时摇振培养的培养种子。进行培养时，温度为28℃，pH为6.7，同时保持入口处的气量为8升/分。机械搅拌率改为每分钟140-245转，因而使溶氧浓度为4.5mg/l。
结果如图7所示，在培养的开始阶段，RQ保持在0.5mol/mol，在第一天后半天开始上升，在开始培养后2.2天达到最大值。然后向其中加入1升葡萄糖(300g/l)作为底物。此时，细胞浓度达到最大值，仍保留有11.5g/l的葡萄糖。此时链霉素的产率为155mg/l，当加入葡萄糖培养4天后，产率为265mg/l(即是前者的1.7倍)。培养的第4天后，由于细菌分裂而使RQ下降，大致上与培养基中葡萄糖的消耗相符合。
因此，在RQ指导下控制发酵，可以有效地生产链霉素。
如上所述，本发明对于高效率工业化培养细胞生产代谢物是有效的。
权利要求
1.一种控制培养方法，其中在好氧条件下培养细胞生产代谢物，其特征步骤在于以细胞放出的二氧化碳量为基础确定第一个参数；以细胞的耗氧量为基础测定第二个参数；计算第一参数与第二参数的比率；并且在所述比率之改变的指导下控制培养，所述的控制培养步骤包括，至少向培养汁中加入一次底物的步骤，判定细胞生长的终点，终止培养，判定代谢物生产的终点，对加入底物以及停止培养进行控制。
2.根据权利要求
1所述的控制培养方法，其中所说的比率是呼吸商。
3.根据权利要求
1所述的控制培养方法，其中所述的细胞是微生物细胞。
4.根据权利要求
2所述的控制培养方法，其中在所述加入底物的步骤中，将诱导物与所述的底物一同加入到所述的培养汁中。
5.根据权利要求
2所述的控制培养方法，其中，在所述的加入底物的步骤中，是在所述呼吸商开始上升直至下降的期间内加入底物。
6.根据权利要求
4所述的控制培养方法，其中所述的底物和诱导物是在所述呼吸商开始上升直至下降的期间内加入。
7.根据权利要求
1所述的控制培养方法，其中所述的控制培养步骤包括，将诱导物与底物一同加入到培养汁中的步骤，以及判定细胞生长的终点。
8.根据权利要求
2所述的控制培养方法，其中所述的控制培养步骤包括，在所述呼吸商开始上升直至上升刚刚结束的期间内，将一种底物和诱导物加入到培养汁中，以及确定细胞生长的终点。
9.根据权利要求
2所述的控制培养方法，其中所述的控制培养步骤包括，将诱导物与所述的底物一同加入到培养汁中的步骤，以及控制培养的终止。
10.根据权利要求
2所述的控制培养方法，其中所述的控制培养步骤包括，至少加入诱导物和底物其中之一的步骤，以及控制培养的终止。
11.根据权利要求
3所述的控制培养方法，其中所述的微生物细胞是基因重组细菌细胞。
12.根据权利要求
9所述的控制培养方法，其中所述的测定所述第一参数和第二参数的步骤，控制加入底物的步骤以及培养的终止是在线进行的。
13.一种控制培养的方法，其中在好氧条件下培养细胞生产代谢物，其特征步骤在于测定细胞排出的二氧化碳量;测定细胞的耗氧量;以所述二氧化碳和氧气的测定值计算出呼吸商;并且在所述呼吸商开始第一次迅速上升直至第一次迅速上升刚刚结束之间，加入至少一种底物和诱导物。
14.根据权利要求
13所述的控制培养方法，其中，以对在所述期间之后出现的所述呼吸商的第二次迅速上升的测定为基础来终止培养。
15.根据权利要求
13所述的控制培养方法，其中所述的测定二氧化碳的步骤和所述测定氧气的步骤包括，对向细胞培养物在其中起作用的培养罐中导入的气体的气流速率，二氧化碳和氧气浓度的测定，以及对从所述培养罐中排出气体的气流速率，氧气和二氧化碳浓度的测定。
16.一种用于控制好氧培养的设备，包括用于包含培养汁于其中并使之在其内起作用的培养罐(1)，向所述培养罐(1)供入氧气的供氧装置(7)，从所述培养罐(1)中排放出二氧化碳的装置(12)，测定细胞放出的二氧化碳量的装置(10，11，12)，测定细胞所耗氧气量的装置(5，6，10)，其特征在于，用于以所述测定的二氧化碳量和氧气量为基础测定呼吸商的装置(4)，以及参照呼吸商变化控制所述添料的装置(3，8，9)。
专利摘要
一种控制培养方法，其中细胞好氧培养生产代谢物，其特征在于，向培养汁中加人底物和(或)诱导物，用以细胞所放出的二氧化碳量为基础的第一参数对以细胞所耗氧气量为基础的第二参数之比率的变化为指导，判定细胞生长的终点和(或)代谢物的产量或终止培养。其中的比率例如是呼吸商。
文档编号C12R1/19GK86101928SQ86101928
公开日1986年9月24日 申请日期1986年3月25日
发明者清水范夫, 福真一, 西村信子, 绪田原蓉二, 住谷知明 申请人:株式会社日立制作所导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan