一种血液检验中致病菌分选挑取的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医学病害微生物鉴别技术领域，具体是提供一种简单且准确的血液检验中致病菌分选挑取的方法。
【背景技术】
[0002]血液是在循环系统中，心脏和血管腔内循环流动的一种组织。血液组织是结缔组织的一种。由血浆和血细胞组成。血浆内含血浆蛋白(白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原)、脂蛋白等各种营养成分以及无机盐、氧、激素、酶、抗体和细胞代谢产物等。血细胞有红血球、白血球和血小板。哺乳类的血液具有凝血机制，血小板破裂时，会将血浆中原本可水溶的血纤维蛋白和血细胞等凝固成为血饼，剩余的透明液体就叫做血清。
[0003]生物体的生理变化和病理变化往往弓I起血液成分的改变,所以血液成分的检测有重要的临床意义。人体正常的血液是没有细菌的。当人体受到细菌感染后，在抵抗力降低的情况下细菌感染人体一般先引起某一部分的炎症，如疖、痈、肺炎、脑炎等。医学上把因细菌由局部炎症部位进入血循环的病症称为菌血症。这时往往会有少量细菌侵入血液，如果人的全身情况很好，这少量的细菌会被身体里产生的各种抗体、吞噬细胞和血液里的白细胞消灭。而如果侵入血管的病菌很多，毒性很强，或者由于人体过劳、营养不良、严重创伤或有其他疾病等原因而抵抗力极其低下时，细菌会大量繁殖并产生有毒有害物质，随血流播散到全身。这时患者表现为高热、寒战、头痛等严重中毒症状，体温常高达40°C以上。同时，细菌可侵入各个脏器引起脏器的发炎、化脓。如果播散到皮肤，可出现各种皮疹。医学上把细菌进入血液后在血液中生长繁殖引起的病症称为败血症。如果是化脓性细菌进入血液后，不但在血液中繁殖，引起一些脏器形成脓肿甚至是器官功能障碍、组织灌注不良或低血压，这种病症则称之为脓毒血症。脓毒症病死率较高，大约有9%的脓毒症患者会发生脓毒性休克和多器管功能不全，重症监护室中一半以上的死亡是由脓毒性休克和多器官功能不全引起的。研究表明，出现脏器器官衰竭、休克、多重感染、严重的潜在疾病的患者预后较差。以上菌血症、败血症、脓毒血症这三种病症的一个共同点是患者血液中都有细菌。如果用患者血液做培养，即可以检出致病菌。因此，血液细菌培养和鉴定的结果对疾病的诊断与治疗具有非常重要的临床作用。
[0004]血培养检验是检测菌血症和真菌血症最简单、最常用的一种方法，是确认机体血流感染的病原学基础。目前一般性血液细菌培养的方法是由医学检验员采集的标本经过孵育、培养，进行初步判断，然后再根据各种病原菌的生物学特性鉴定发出报告。但在实际临床操作中，采集的血样直接孵育培养，常常会出现某些特定的致病菌含量过少、纯度过低而未能检出的情况。尤其是近年来，许多医疗条件较好的医院基本采用自动化的设备进行血液细菌培养，普遍地存在血培养的阳性率不够高，培养周期长，易出现污染导致错误结果等问题，这对临床治疗中选择用药、及时有效地控制感染和最后病人治疗效果都具有非常巨大的影响。
[0005]因此提供一种简单准确且能提高血液检验中致病菌纯度的方法具有非常重要意义。
【发明内容】
[0006]针对现有生产存在的技术问题，本发明的目的是提供一种操作简单、安全可靠、成本低廉的在血液检验中致病菌分选挑取的方法。
[0007]本发明方法采用传统微生物培养分离方法与临床血液检验方法进行结合，从而达到将目标致病菌分选挑取出来。具体技术方案为一种血液检验中细菌分选挑取的方法，其特征在于包括步骤:
[0008]I)取样接种:以无菌操作取患者血样作为样品，划线接种于培养基上，倒置于37°C恒温培养箱中恒温培养I?2d，观察菌落生长状况；
[0009]2)分选:将接种培养后的疑似菌单菌落接种于血清基础培养基平板上，37°C恒温培养I?2d，观察菌落生长状况；
[0010]3)取菌:挑取病害菌，以备用于其他进一步鉴定。
[0011]本发明通过对血液中疑似致病微生物多次进行接种培养后分选，利用扩大培养后不同种类的微生物不同的生长特性和菌落特征使其得以区分并挑取病害疑似菌进行培养分离，较大程度剔除了杂菌的影响，提高了血样化验的准确性。本发明方法具有成本低廉、易操作实施、重复性好等优点，能在一定程度上克服传统临床检验的局限。
【具体实施方式】
[0012]以下将结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。
[0013]实施例
[0014]试验原料和试剂
[0015]I)患者血样；
[0016]2)血清基础培养基:将血清均匀加热至56°C并保持30min，贮存于4°C，之后与基本培养基混合，基本培养基占80%?90%，血清占10%?20%。按I %体积分数加入双抗忙存液(青霉素+链霉素)；
[0017]试验步骤:
[0018]I)取样接种:以无菌操作取患者血样作为样品，划线接种于培养基上，倒置于37°C恒温培养箱中恒温培养I?2d，观察菌落生长状况；
[0019]2)分选:将接种培养后的疑似菌单菌落接种于血清基础培养基平板上，37°C恒温培养I?2d，观察菌落生长状况；
[0020]3)取菌:挑取病害菌，以备用于其他进一步鉴定。
【主权项】
1.一种血液检验中致病菌分选挑取的方法，其特征在于包括步骤: 1)取样接种:以无菌操作取患者血样作为样品，划线接种于培养基上，倒置于37°c恒温培养箱中恒温培养I?2d,观察菌落生长状况； 2)分选:将接种培养后的疑似菌单菌落接种于血清基础培养基平板上，37°C恒温培养I?2d，观察菌落生长状况； 3)取菌:挑取病害菌，以备用于其他进一步鉴定。
【专利摘要】本发明通过对血液中疑似致病微生物多次进行接种培养后分选，利用扩大培养后不同种类的微生物不同的生长特性和菌落特征使其得以区分并挑取病害疑似菌进行培养分离，较大程度剔除了杂菌的影响，提高了血样化验的准确性。本发明方法具有成本低廉、易操作实施、重复性好等优点，能在一定程度上克服传统临床检验的局限。
【IPC分类】C12N1-20
【公开号】CN104560760
【申请号】CN201310471090
【发明人】晏健强
【申请人】晏健强
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月11日