新的蔗糖非同化性凝集性酵母的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及鹿糖非同化性酵母，并且特别涉及属于酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)的鹿糖非同化性酵母。
【背景技术】
[0002] 用于燃料的源自植物的乙醇作为防止二氧化碳增加的代替汽油的液体燃料而备 受期待，先前研究有用微生物将源自植物的糖液发酵而制造乙醇的方法。然而，如果消耗源 自植物的糖液作为乙醇的制造原料，则存在作为食品的糖的制造受到影响的问题。
[0003] 作为解决上述问题的方法，专利文献1中记载有用蔗糖非同化酵母将源自植物的 糖液发酵的糖和乙醇的制造方法。根据所述方法，在糖结晶化步骤之前，使用蔗糖非同化性 酵母进行还原糖的选择性乙醇发酵。通过本方法，可兼具糖的生产力提高与乙醇的生产。
[0004] 但是，长久以来几乎没有将蔗糖非同化性酵母用于食品制造的实例，并且已确认 其对人体的安全性的菌种较少。因此，使用蔗糖非同化性酵母的糖和乙醇的制造方法存在 可用菌种较少、工艺改良余地受限制的问题。
[0005] 某些蔗糖非同化性酵母属于酿酒酵母。酿酒酵母是食品制造性能丰富的菌种，且 对人体的安全性优异。然而，在属于酿酒酵母的蔗糖非同化性酵母中，发酵性优异的酵母是 非凝集性的并且不易沉淀。因此为了从发酵后的糖液中去除酵母，必须需要离心分离和微 滤等复杂的操作。
[0006] 在此，属于酿酒酵母的蔗糖非同化性酵母中，展示凝集性的酵母（STX347-1D株） 是营养缺陷型的，并且在尿嘧啶（碱基）和组氨酸（氨基酸）不存在于培养基中的情况下， 具有难以发酵的问题。
[0007] 因此，作为使用蔗糖非同化性酵母的糖和乙醇的制造方法难以一方面确保安全性 和实用性优异的制造条件，一方面扩大制造规模并降低制造成本。
[0008] 现有技术
[0009] 专利文献
[0010] [专利文献1]日本专利No. 4883511
[0011] 发明概述
[0012] 发明要解决的问题
[0013] 本发明解决以上提及的先前的问题，其一个目的在于提供具有凝集能力、属于食 品制造性能丰富的菌种的蔗糖非同化性酵母。
[0014] 解决问题的技术手段
[0015] 本发明提供以保藏编号：NITE BP-1587表示的酵母菌株。
[0016] 另外，本发明提供以保藏编号：NITE BP-1588示的酵母菌株。
[0017] 另外，本发明提供糖和乙醇的制造方法，所述方法使用上述任一种酵母菌株进行。
[0018] 发明效果
[0019] 以保藏编号：NITE BP-1587表示的酵母菌株具有蔗糖非同化性，且显示高凝集能 力。另外，所述酵母菌株的耐热性和耐酸性均很优异。进而，所述酵母菌株属于酿酒酵母， 其具有食品制造性能丰富性并且对人体安全。
[0020] 附图简述
[0021] 图1显示使用本发明的蔗糖非同化性凝集性酵母（单倍体）使糖液发酵的情况下 糖液中糖类和乙醇的浓度以何种方式发生变化的图。
[0022] 图2显示使用本发明的蔗糖非同化性凝集性酵母（二倍体）使糖液发酵的情况下 糖液中糖类和乙醇的浓度以何种方式发生变化的图。
[0023] 图3显示使用蔗糖非同化性酵母（其是本发明的蔗糖非同化性凝集性酵母的亲本 菌株）使糖液发酵的情况下糖液中糖类和乙醇的浓度以何种方式发生变化的图。
[0024] 图4显示使用凝集性酵母（其是本发明的蔗糖非同化性凝集性酵母的亲本菌株） 使糖液发酵的情况下糖液中糖类和乙醇的浓度以何种方式发生变化的图。
[0025] 图5将各种酵母的凝集能力加以比较的图表。
[0026] 图6显示在以温度调节为30°C、37°C或40°C的培养基进行培养的情况下本发明的 蔗糖非同化性凝集性酵母和亲本菌株以何种方式进行增殖的图表。
[0027] 图7显示在以pH值调节为6. 5、3. 0或2. 0的培养基进行培养的情况下本发明的 蔗糖非同化性凝集性酵母和亲本菌株以何种方式进行增殖的图表。
[0028] 图8显示通过本发明的方法从原料糖液制造糖的情况下物质收支的图。
[0029] 图9显示通过先前的方法从原料糖液制造糖的情况下物质收支的图。
[0030] 本发明的实施方式
[0031] 准备酿酒酵母NBRC 10055菌株作为蔗糖非同化性酵母。NBRC 10055菌株从 NBRC购入。NBRC 10055菌株是从Garcia(西班牙）的红葡萄酒中分离而得的酵母属 (Saccharomyces)酵母。当分离所述酵母时，发现所述酵母具有发酵后成膜、主要使葡萄糖 发酵以及在好氧条件下产生乙酸的等性质。
[0032] 另外，准备酿酒酵母SDT菌株作为凝集性酵母。SDT菌株是申请人发现的菌株，确 认其属于酿酒酵母。SDT菌株保藏在NITE。SDT菌株的保藏编号是NITEBP-1589。
[0033] 将NBRC 10055菌株和SDT菌株分别进行孢子分离，作为接合型，得到显示a型或 α型的孢子分离体。使用操作器将接合型不同的NBRC10055孢子分离体和NITE BP-1589 孢子分离体接合制成接合株。所得接合株是在孢子形成诱导后使用操作器进行四分体分 离，而得到孢子分离体。进而，通过PCR法扩增接合株和孢子分离体的MAT基因位点（MT locus)，进行解析从而决定接合型。
[0034] 对所得孢子分离体进行筛选，选择具有蔗糖非同化性、凝集性的目标性质的菌株， 以得到本发明的蔗糖非同化性凝集性酵母。所述菌株是单倍体。将所述酵母命名为GYK-10。 所得菌株由亲本菌株（均是酿酒酵母）获得，属于酿酒酵母。GYK-10保藏在NITE。GYK-10 的保藏编号是NITE BP-1587。
[0035] 在YH)琼脂培养基上培养GYK-10,并以同宗配合的性质为基础选择二倍体酵母。 将所述酵母命名为GYK-11。GYK-Il保藏在NITE。GYK-Il的保藏编号是NITE BP-1588。
[0036] 如下测试GYK-10和GYK-Il的蔗糖非同化性性质、凝集性能力、耐热性和耐酸性。
[0037] 蔗糖非同化性性质测试
[0038] 作为实验对象的酵母，准备GYK-10和GYK-11，以及作为其亲本菌株的NBRC 10055 和 SDT。
[0039] 使用Yro液体培养基（1%酵母提取物、2%蛋白胨、2%蔗糖）10〇11^，在30°(：下进 行培养，将培养的酵母离心回收（5000Xg、5分钟）。将回收酵母（湿重：lg)添加到模拟 甘蔗榨汁进行调整而成的糖液（1 %酵母提取物、2%蛋白胨、12%蔗糖、1. 5%蔗糖、1. 5%果 糖）IOOmL中，在30°C或37°C下进行发酵。针对糖液中所含糖类和乙醇的浓度，记录发酵时 间期间其随时间的变化。结果示于图1至4中。
[0040] 根据测试结果，确认GYK-10和GYK-Il以及作为亲本菌株的NBRC10055是蔗糖非 同化性的。
[0041] 凝集能力测试
[0042] 作为实验对象的酵母，准备GYK-10和GYK-11，以及作为其亲本菌株的NBRC 10055 和SDT，以及被认为具有高凝集能力的酿酒酵母STX347-1D菌株。
[0043] 用YPD液体培养基（30 °C，48小时，120rpm) 5mL预培养酵母细胞后，用细胞容量20 倍量的蒸馏水洗净2次。洗净的细胞以湿润细胞浓度为2%的方式悬浮在4mL蒸馏水中。 在细胞悬浮液ImL中添加蒸馏水250 μ 1后，测定600nm的吸光度（对照）。进而，在细胞 悬浮液ImL中添加 IOOmM氯化|丐250 μ 1后，混合物静置5分钟。随后测定600nm的吸光度 (样品）。吸光度用"分光光度计UV-1700"（SHIMADZU CORPORATION制造）进行测定。
[0044] 根据下式确定凝集能力：
[0045] C = (1-B/A) X 100
[0046] 其中C是凝集能力（％)，A是对照的吸光度，B是样品的吸光度。将结果示于表1 和图5中。
[0047]
[0048] 根据测试结果，确认GYK-10的凝集能力是其亲本菌株SDT的约两倍，并且是常用 凝集性酵母STX 347-1D的约1. 5倍。
[0049] 耐热性和耐