一种贝利司他异构体的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及药物化学领域，具体设及的是抗肿瘤药物belinostat顺式异构体的 制备方法。
【背景技术】
[000引 贝利司他度elinostat，PXD101)是由丹麦TopotargetAS公司开发的一种组蛋白 脱乙酷基酶抑制剂（HDACi)。组蛋白去乙酷化酶（HDAC)的过度表达或异常调控会使组蛋白 过度去乙酷化，使染色质被重塑为抑制转录的构型，引起相应基因表达下降，导致癌变的产 生，因此对HDAC的抑制作用被认为是具有发展前景的抗癌药物祀标。Belinostat可W直 接作用于基因异常表达运一环节，从而抑制和纠正肿瘤细胞过度增殖、异常分化，针对常见 的耐药问题，还可W与其他作用机制的药物联合用药。Be1inostat能有效抑制结肠癌、肺 癌、卵巢癌、骨髓瘤等实体瘤细胞的增殖，对白血病和淋己癌等血液系统的恶性肿瘤也有治 疗作用。
[0003] 美国FDA于2009年9月指定Belinostat为孤儿药，列入快速审批通道，用于治 疗复发或难治性外周T细胞淋己瘤（R/RPT化)，欧盟于2012年10月也指定本品为孤儿药 用于PTCL。目前，TopotargetAS及SpectrumPharmaceuticals公司已完成belinostat 治疗ΡΤ化的II期临床试验，结果超过设计预期值。2013年12月，原研公司向FDA提交 Belinostat的R/RPTCL新药申请。2014年7月3日，FDA批准Belinostat用于治疗有外 周T细胞淋己癌（PTCL)的患者，主要依据是研究表明，在接受了该药物治疗的患者中总缓 解率达到了近26%。
[0004] Belinostat化学名为巧)-N-径基-3-(3-苯基氨基横酷基苯基）丙締酷胺，其结 构式如下：
[0005]
[0006]Belinostat存在一个不对称的双键结构，合成中可能会产生其顺式异构体，结构 式如下：
[0007]
[0008]Belinostat结构式为E型，其顺式异构体为Z型。为了严格控制药品质量，保证其 临床用药的安全有效，在建立Belinostat有关物质的检查方法的同时，需要高纯度的异构 体II作为杂质对照。现有已报道的Belinostat的合成方法产生的异构体II极少，且该异构 体与Belinostat采用传统纯化方法如重结晶和硅胶柱层析难W将其分开，因此制备得到 纯度高符合杂质对照品要求的异构体II具有一定的难度。
【发明内容】
[0009] 本发明提供了一种贝利司他顺式异构体的制备方法，该方法W3-苯基氨基横酷 基苯甲醒为起始原料，经Wittig缩合反应，水解，氯化反应，径胺缩合反应得到Belinostat 和Belinostat异构体混合物，经反相高效制备液相色谱法分离纯化，得到纯度99%W上的 Belinostat异构体II，能够作为杂质对照品用于Belinostat有关物质的检查。
[0010] 本发明提供的一种贝利司他顺式异构体的制备方法，其特征在于，按W下路线合 成：
[0011]
[0012] 具体包含W下步骤：
[0013] 1)化合物IV与Wittig试剂、碱试剂在极性质子溶剂中进行Wittig缩合反应，所述 Wittig试剂可选自乙氧甲酯基甲基Ξ苯基氯化麟、乙氧甲酯基甲基Ξ苯基漠化麟或乙氧甲 酷基甲基Ξ苯基舰化麟，所述极性质子溶剂可选自甲醇、乙醇或异丙醇，所述碱试剂可选自 甲醇钢、乙醇钢、叔下醇钟，反应完毕后在反应液中加碱水解后得到化合物V，水解所用碱 可选自氨氧化裡，氨氧化钢，氨氧化钟；
[0014] 2)化合物V先进行氯化反应得到氯化产物化合物VI，所得反应液与盐酸径胺在碱 试剂存在下反应得到belinostat和belinostat异构体混合物III，所述氯化试剂可选自草 酷氯、氯化亚讽或横酷氯，碱试剂可选自碳酸氨钢、碳酸钢或碳酸钟；
[0015] 3)将belinostat和belinostat异构体混合物III采用反相高效制备液相色谱法分 离纯化得到化合物IIbelinostat异构体。
[0016] 其中，步骤DWittig试剂优选乙氧甲酯基甲基Ξ苯基漠化麟；缩合反应所述极性 质子溶剂优选甲醇；碱试剂优选乙醇钢；Wittig试剂与化合物IV的摩尔比为1~3 :1，优选 1. 5:1 ;水解所用的碱优选氨氧化钢；氨氧化钢与化合物IV的摩尔比为2~5:1，优选3:1。
[0017] 步骤2)所述氯化试剂采用草酷氯时，草酷氯与化合物V的摩尔比2~5 :1，优选 3 :1;碱试剂优选碳酸钢，碳酸钢与化合物VI的摩尔比为2~5:1，优选4:1;盐酸径胺与化 合物VI的摩尔比为5~20:1，优选10:1。
[0018] 步骤3)所述反相高效制备液相色谱法纯化的具体的操作方法包括W下步骤：
[0019] (a)溶解、过滤：将Belinostat和Belinostat异构体混合物III用0. 05~2%憐 酸溶液/乙腊（85/15体积比）混合液溶解，其中Belinostat和Belinostat异构体混合物 III:0. 05~2%憐酸溶液/乙腊（85/15)混合液的比例为Ig:200ml~500ml，溶解后用孔 径0. 45μm的有机微孔滤膜过滤，滤去不溶物。
[0020] 化）分离、洗脱：将步骤（a)中所得的溶液，注入反相高效制备液相色谱仪，梯度洗 脱，收集Belinostat异构体的制备组分，得Belinostat异构体溶液；
[0021] (C)产品回收：将步骤化）所得到的Belinostat异构体溶液中的乙腊经蒸馈除去 后，用二氯甲烧提取，蒸馈除去二氯甲烧，得Belinostat异构体。
[0022] 发明人在进行反相高效制备液相分离前，用液质联用确定高效液相色谱中 Belinostat异构体的出峰时间，摸索合适的色谱条件W进一步应用于制备液相用于分离 Belinostat、Belinostat异构体及其它杂质。采用YMC-TriartC18色谱柱，柱溫30°C，紫外 检测器220皿，流速Iml/min下，通过变换流动相和洗脱梯度摸索能够将上述各物质分离的 色谱条件，得出下表洗脱程序能将Belinostat、Belinostat异构体及其它杂质全部分开， 出峰顺序为杂质f，Belinostat异构体（杂质b)，Belinostat,杂质h，杂质d，杂质C，杂质 邑，杂质曰，分离度最低为1. 9 (见附图1)。
[0023]
[0024] ~~W上述色谱条件基础在制备液相上进行条件摸索，由于制备液相的色谱柱与高效 液相的色谱柱不同，本发明制备液相色谱柱采用了动态轴向压缩柱，流速要大很多，同时考 虑避免使用缓冲液，尝试将缓冲液换成憐酸溶液，为得到纯度和收率均较高的Belinostat 异构体，需对制备液相色谱洗脱程序进行进一步优化。
[00巧]经试验摸索得出，步骤3)所述反相高效制备液相色谱法，色谱条件为：色谱柱采 用动态轴向压缩柱，直径50mm，填料长度250mm，填料为十八烷基硅烷键合硅胶微球，粒径 为10μm，孔径120,V洗脱液采用乙腊和憐酸溶液组成的混合溶液；柱溫为室溫；紫外检测 器在线检测，检测波长为221nm;流速为60-100ml/min，优选80ml/min;通过变换洗脱液中 乙腊和憐酸盐溶液的比例进行梯度洗脱，所述憐酸溶液浓度为0. 05~2 %，优选0. 1 %，优 选按照如下梯度进行洗脱：
[0026]
[0027] 制备液相分离时Belinostat与Belinostat异构体的分离情况见附图2。
[0028] 本发明提供的贝利司他顺式异构体的制备方法，W3-苯基氨基横酷基苯甲醒 为起始原料，经Wittig缩合反应，水解，氯化反应，径胺缩合反应得到Belinostat和 Belinostat异构体混合物，混合物中Belinostat顺式异构体的含量较现有技术有显著的 提高。对反应得到Belinostat和Belinostat异构体混合物采用反相高效制备液相色谱法 进行分离纯化，梯度洗脱得到纯度99%W上的符合Belinostat有关物质检查中杂质对照 品要求的Belinostat异构体。
[0029] 下面结合【具体实施方式】的实施例和说明书附图对本发明做进一步说明。
[0030] 说明书附图
[0031] 附图1高效液相色谱Belinostat、Belinostat异构体及其它杂质出峰顺序图
[0032] 附图2制备液相Belinostat、Belinostat异构体出峰图
【具体实施方式】
[0033] 实施例IBelinostat和Belinostat异构体混合物的制备
[0034] 步骤1 :化合物V的制备
[0035]
[0036] 憐酷基乙酸Ξ乙醋（4. 73g，0. 0211mol)加入反应器中，加入甲醇30血，揽拌溶 解，冷至-5-0°C，加入乙醇钢（2. 61g，0. 0384mol)，加毕，揽拌10-20分钟，滴加入化合物 VII巧g，0. 0192mol)和甲醇（20血）的溶液，于室溫下揽拌1-4小时，反应毕，加入1M氨氧化 钢溶液58ml和甲醇10ml，与室溫下揽拌过夜，反应毕，加入乙酸乙醋（15ml)，水（30ml)，揽 拌15分钟，分相，弃乙酸乙醋相，水相用10%盐酸酸化至抑2,与室溫下揽拌1小时，过滤， 水洗，干燥，得化合物V4.Ig，收率70. 7 %。
[0037] 步骤2 :混合物II