一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高f值寡肽的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及水产加工废弃物的综合利用技术领域，更具体地，涉及一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法。
【背景技术】
[0002]中国为罗非鱼的生产与出口大国，年产量150万吨以上，罗非鱼的加工品主要为鱼片，在加工过程中将产生大量鱼排等废弃物。罗非鱼废弃物的迄今仍很不充分，主要被用作生产鱼粉的原料，甚至丢弃，不仅浪费，而且污染环境。
[0003]高F值寡肽(HighFischer Rat1 Oligopeptides，HFRP)是指蛋白质水解得到的由2?9个氨基酸组成的寡肽混合物，F值是指支链氨基酸(即缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸)与芳香族氨基酸(即苯丙氨酸、酪氨酸)含量的摩尔比值(支/芳比)，高F值寡肽的F值应在20以上。高F值寡肽具有辅助治疗肝性脑病、抗疲劳、治疗苯丙酮尿病等功能。
[0004]罗非鱼鱼排碎肉蛋白质的支/芳比与传统的制备高F值寡肽的原料的支/芳比接近，故罗非鱼碎肉可以作为制备高F值寡肽的原料。但迄今未见有利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的报道。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法。
[0006]本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的:
一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，包括以下步骤:
(1)将罗非鱼鱼排洗净并分离获得绞碎罗非鱼碎肉，将绞碎罗非鱼碎肉加水匀浆后，加入蛋白酶，，在温度40?60°C条件下水解0.5?24h，水解结束后，煮沸灭酶，冷却至室温后过滤收集上清液；
(2)取上清液，按质量比加入0.3?1.5g活性炭，吸附0.5?2h，去除活性炭，经截留分子量为1000 Da的膜过滤即得罗非鱼碎肉高F值寡肽溶液。
[0007]优选地，步骤(1)中，分离获得绞碎罗非鱼碎肉的方法有很多种，可用震荡、水流冲洗、煮熟等各种方法将碎肉与鱼骨分离，然后滤除水，得到罗非鱼碎肉；另外还要求所用的鱼排必须为未发生腐败的鱼排，可为新鲜的或冻结的。
[0008]优选地，这里罗非鱼碎肉与蛋白酶发生水解反应，反应的温度低于蛋白酶的失活温度，水解时间0.5h以上，具体的，可为0.5?6h。
[0009]优选地，步骤(1)中的水解反应可适量添加水，从而提高水解效率，这里罗非鱼碎肉与水的质量体积比为1:2?20(m/v)。
[0010]更优选地，步骤(1)中的水解反应可适量添加水，从而提高水解效率，这里罗非鱼碎肉与水的质量体积比为1:10?15(m/v)。
[0011 ]优选地，步骤(1)中所述蛋白酶为碱性蛋白酶。
[0012]优选地，步骤(1)是将绞碎罗非鱼碎肉加水匀浆后，i.周pH为7?10。
[0013]优选地，步骤(2)是加入活性炭前，将上清液调pH值至5?7，在室温下吸附。
[0014]作为一种优选方案，上述步骤(5)中的活性炭的用量是每克罗非鱼碎肉添加l.0g?1.5g。
[0015]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果:
本发明提供了一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，包括以下步骤:(1)将罗非鱼排洗净并分离获得绞碎罗非鱼碎肉，将绞碎罗非鱼碎肉加水匀浆后，加入蛋白酶，水解0.5?24h，水解结束后，煮沸灭酶，冷却至室温后过滤收集上清液；(2)取上清液，按质量比加入0.3?1.5g活性炭，吸附0.5?2h，去除活性炭，经截留分子量为1000 Da的膜过滤即得罗非鱼碎肉高F值寡肽溶液，用此方法获得的寡肽F值最高可达40，可高效获得寡肽，并且能提高罗非鱼加工废弃物的利用率，具有广泛和实际的应用价值。
【具体实施方式】
[0016]下面结合具体实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的简单修改或替换，均属于本发明的范围；若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。获得的高F值寡肽分子量一般在1000 Da以下，F值在20以上，且F值越高越好。
[0017]实施例1
制备高F值寡肽的方法，包括以下步骤:
(1)原料预处理:将罗非鱼排洗净，按质量比1:5加入水，煮沸5min，冷却至室温，震荡令鱼肉脱落，挑出鱼骨后静置5min，令鱼肉沉淀，倾出上层水，然后过滤收集罗非鱼碎肉。
[0018](2)用绞肉机将收集的罗非鱼碎肉进一步绞碎。
[0019](3)取绞碎的罗非鱼碎肉20g置于反应容器中，按质量体积比1:12加入水，用食品级碳酸钠溶液调pH为8.5，按照800U/g碎肉的比例加入碱性蛋白酶(诺维信产)，在温度45°C条件下水解6h，水解结束后，煮沸灭酶2min，冷却至室温后过滤去残渣，收集上清液。
[0020](4)取上清液，用2mol/L食用醋酸调节上清液pH值至6.0，在室温下加入20g食品级活性炭，吸附0.5h，然后过滤分离活性炭和寡肽混合物，即得到罗非鱼碎肉高F值寡肽粗品。
[0021](5)将所得到的高F值寡肽粗品经截留分子量为1000 Da的膜过滤，所得到的透过液即为罗非鱼碎肉高F值寡肽液，其F值为22.4，获得F值寡肽0.94g(产品得率为35%)。
[0022]实施例2
制备高F值寡肽的方法，包括以下步骤:
(1)原料预处理:将罗非鱼排洗净，按质量比1: 10加入水，煮沸5min，冷却至室温，震荡令鱼肉脱落，挑出鱼骨后静置5min，令鱼肉沉淀，倾出上层水，然后过滤收集罗非鱼碎肉。
[0023](2)用绞肉机将收集的罗非鱼碎肉进一步绞碎。
[0024](3)取绞碎的罗非鱼碎肉20g置于反应器中，按质量体积比1:15加入水，用食品级碳酸钠溶液调pH为9.0，按照1200U/g碎肉的比例加入碱性蛋白酶(诺维信产)，在温度50°C条件下水解5h，当水解结束后，煮沸灭酶2min，冷却至室温过滤，收集上清液。
[0025](4)取上清液，用2mol/L食用醋酸调整pH值至5.0，使活性炭在其最适pH范围内。在室温下加入30g食品级活性炭，吸附l.0h，然后过滤分离活性炭和寡肽混合物，即得到罗非鱼碎肉高F值寡肽粗品。
[0026](5)将得到的高F值寡肽粗品经截留分子量为1000 Da的膜过滤，所得到的透过液即为罗非鱼碎肉高F值寡肽液，其F值为40，获得F值寡肽1.53g(产品得率为46%)。
[0027]实施例3
实验方法同实施例2，唯一不同的是，在温度40°C条件下水解5h，最终获得的寡肽液的F值为23，产品得率为36%。
[0028]实施例4
实验方法同实施例2，唯一不同的是，步骤(3)中，按质量体积比1:10加入水进行水解反应，最终获得的寡肽液的F值为30，产品得率为39%。
[0029]对比例1
实验方法同实施例2，唯一不同的是，在温度70°C条件下水解5h，最终获得的寡肽液的F值为7.0，产品得率为12.3%。
[0030]对比例2
实验方法同实施例2，唯一不同的是，步骤(3)中，按水解时间为lOmin进行水解反应，最终获得的寡肽液的F值为8.0，产品得率为14%。
【主权项】
1.一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将罗非鱼鱼排洗净并分离获得绞碎罗非鱼碎肉，将绞碎罗非鱼碎肉加水匀浆后，加入蛋白酶，40?60°C条件下水解0.5?24h，水解结束后，煮沸灭酶，冷却至室温后过滤收集上清液； (2)取上清液，按每克罗非鱼碎肉添加0.3?1.5g活性炭，吸附0.5?2h，去除活性炭，经截留分子量为1000 Da的膜过滤即得罗非鱼碎肉高F值寡肽溶液。2.根据权利要求1所述的利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，其特征在于，步骤(1)中所述蛋白酶为碱性蛋白酶。3.根据权利要求2所述的利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，其特征在于，步骤(1)是将绞碎罗非鱼碎肉加水匀浆后，调pH为7?10。4.根据权利要求2所述的利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，其特征在于，步骤(2)是加入活性炭前，将上清液调pH值至5?7，在室温下吸附。
【专利摘要】本发明属于水产加工废弃物的综合利用技术领域，公开了一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，该方法利用蛋白酶水解罗非鱼鱼排碎肉，将鱼肉蛋白水解为各种肽，再利用活性炭吸附去除水解液中芳香族氨基酸含量较高的肽，经过滤获得上清液，再经截留分子量为1000？Da的膜过滤，即可获得F值大于20，分子量低于1000？Da的高F值寡肽溶液；用此方法获得的寡肽F值最高可达40，可高效获得寡肽，并且能提高罗非鱼加工废弃物的利用率，具有广泛和实际的应用价值。
【IPC分类】C12P21/06
【公开号】CN105483194
【申请号】CN201511005174
【发明人】范春华, 李梦茹, 杜敬河, 伍蓉莉, 杜欣欣, 段杉
【申请人】华南农业大学
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月29日