Sav1基因作为子宫肌瘤诊治标志物的用图
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，具体地设及SAV1基因在子宫肌瘤的诊断、治疗中的用 途。
【背景技术】
[0002] 子宫肌瘤是妇科最常见的良性肿瘤，虽然大多数子宫肌瘤无明显症状，且很少恶 变，不需或暂时不需治疗，但有症状的子宫肌瘤患者，或子宫肌瘤体积大的患者是应该治疗 的，手术治疗是主要的治疗方法。因此，对运些患者术前应该诊断确切。因为子宫肌瘤与W 下一些疾病，包括妊娠、子宫肥大症、子宫肉瘤、子宫慢性内翻、子宫崎形及盆腔炎性肿块容 易混肴，因此，需要对上述疾病进行鉴别。现有技术中用于对上述疾病进行鉴别的方式多为 仪器检查或者依照医生的经验，因此检测方法存在灵敏性和特异性的缺陷。因此，需要寻找 一种能够诊断子宫肌瘤的特异性的标志物。
【发明内容】
[0003] 为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可用于子宫肌瘤早期诊断 的分子标志物。使用基因标志物来诊断子宫肌瘤具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者 在疾病早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。
[0004] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0005] 本发明提供了检测SAV1基因表达的产品在制备诊断子宫肌瘤的工具中的应用。
[0006] 进一步，所述检测SAV1基因表达的产品包括检测SAV1基因 mRNA水平的产品、和/或 检测SAV1蛋白水平的产品。
[0007] 进一步，所述检测SAV1基因表达的产品包括:通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检 巧。、原位杂交或忍片检测SAV1基因及其表达产物的表达水平W诊断子宫肌瘤的产品。
[000引进一步，所述用RT-PCR诊断子宫肌瘤的产品至少包括一对特异扩增SAV1基因的引 物;所述用实时定量PCR诊断子宫肌瘤的产品至少包括一对特异扩增SAV1基因的引物;所述 用免疫检测诊断子宫肌瘤的产品包括:与SAV1蛋白特异性结合的抗体;所述用原位杂交诊 断子宫肌瘤的产品包括:与SAV1基因的核酸序列杂交的探针;所述用忍片诊断子宫肌瘤的 产品包括：蛋白忍片和基因忍片；其中，蛋白忍片包括与SAV1蛋白特异性结合的抗体，基因 忍片包括与SAV1基因的核酸序列杂交的探针。
[0009] 所述用实时定量PCR诊断子宫肌瘤的产品至少包括的一对特异扩增SAV1基因的引 物如沈Q ID NO.3和沈Q ID NO.4所示。
[0010] 所述检测SAVl基因表达的产品可W是检测SAVl基因表达的试剂、也可W是包含所 述试剂的试剂盒、忍片、试纸等，也可W是使用所述试剂的高通量测序平台。
[0011] 所述诊断子宫肌瘤的工具包括但不限于忍片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台； 高通量测序平台是一种特殊的诊断子宫肌瘤的工具，随着高通量测序技术的发展，对一个 人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达 谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知SAVl基因的异常与 子宫肌瘤相关也属于SAV1基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。
[0012] 本发明还提供了一种诊断子宫肌瘤的工具，所述工具包括检测SAV1基因表达的试 剂;所述试剂包括检测SAV1基因 mRNA的引物和/或探针、检测SAV1蛋白的抗体。
[0013] 所述工具包括但不限于忍片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。
[0014] 其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白质忍片;所述基因忍片包括固相载体W及固定 在固相载体的寡核巧酸探针，所述寡核巧酸探针包括用于检测SAV1基因转录水平的针对 SAV1基因的寡核巧酸探针;所述蛋白质忍片包括固相载体W及固定在固相载体的SAV1蛋白 的特异性抗体;所述基因忍片可用于检测包括SAV1基因在内的多个基因（例如，与子宫肌瘤 相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质忍片可用于检测包括SAV1蛋白在内的多个蛋白 质(例如与子宫肌瘤相关的多个蛋白质）的表达水平。通过将多个与子宫肌瘤的标志物同时 检测，可大大提高子宫肌瘤诊断的准确率。
[001引其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒;所述基因检测试 剂盒包括用于检测SAV1基因转录水平的试剂;所述蛋白免疫检测试剂盒包括SAV1蛋白的特 异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或忍片方 法检测SAV1基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对SAV1基因的引物 和/或探针。根据SAV1基因的核巧酸序列信息容易设计出可W用于检测SAV1基因表达水平 的引物和探针。
[0016] 所述试纸包括检测SAV1基因表达的试剂。
[0017] 所述高通量测序平台包括检测SAV1基因表达的试剂。
[001引与SAV1基因的核酸序列杂交的探针可W是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍 生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核巧酸序列特异性结合，任 何长度都可W。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长 度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交 效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过 30个碱基对，与目的核巧酸序列互补的长度W15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列 最好少于4个碱基对，W免影响杂交效率。
[0019] 进一步，所述SAV1蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述SAV1蛋白 的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如，，嵌合抗体、scFvJab、F (ab'）2、Fv等。只要所述片段能够保留与SAV1蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体 的制备时本领域技术人员公知的，并且本发明可W使用任何方法来制备所述抗体。
[0020] 在本发明的具体实施方案中，所述检测SAV1基因 mRNA的引物包括SEQ ID NO.3和 SEQ ID NO.4所示的引物对。
[0021] 本发明还提供了 SAV1基因和/或其表达产物的促进剂在制备治疗子宫肌瘤的药物 中的应用。
[0022] 所述促进剂包括促进SAV1基因表达的试剂和促进SAV1基因表达产物的试剂;所述 促进SAV1基因表达的试剂包括促进基因转录的试剂、促进基因翻译的试剂、促进SAV1蛋白 含量的试剂;所述促进SAV1基因表达产物的试剂包括促进SAV1基因表达产物稳定性的试 剂、促进SAV1基因表达产物活性的试剂、促进SAV1基因表达产物功能的试剂。
[0023] 具体地，所述促进SAVl基因表达的试剂包括:含有SAVl基因的试剂、携带SAVl基因 的载体或宿主细胞所形成的试剂、含有SAV1蛋白质的试剂。
[0024] 本发明的促进剂一方面可W用于补充内源性的SAV1蛋白的缺失或不足，通过提高 SAV1蛋白的表达，从而治疗因 SAV1蛋白缺乏导致的子宫肌瘤。另一方面可W用于促进SAV1 蛋白的活性或者功能，从而治疗子宫肌瘤。
[0025] 本发明所述携带基因的载体是本领域已知的各种载体，如市售的载体、包括质粒、 粘粒、隧菌体、病毒等。
[0026] 在本发明中，术语"宿主细胞"包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的 例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物 细胞。较佳地，该宿主细胞是真核细胞，如C册细胞、COS细胞等。
[0027] 本发明还提供了一种用于治疗子宫肌瘤的药物组合物，所述药物组合物包括上面 所述的SAV1基因和/或其表达产物的促进剂。
[0028] 进一步，本发明的药物还包括药学上可接受的载体，载体，运类载体包括(但并不 限于）：稀释剂、赋形剂如水等、填充剂如淀粉、薦糖等;粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明 胶和聚乙締化咯烧酬;湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸巧和碳酸氨钢;吸收促进剂季锭 化合物;表面活性剂如十六烧醇;吸附载体如高岭±和皂粘±;润滑剂如滑石粉、硬脂酸巧 和儀、聚乙二醇等。
[0029] 本发明的药物导入组织或者细胞的方式可W分为体外或者体内的方式。体外方式 包括将含有SAV1基因的药物或者含有SAV1蛋白质的药物导入细胞中，再将细胞移植或回输 到体内。体内方式包括直接将含有SAV1基因的药物或者含有SAV1蛋白质的药物注入体内组 织中。
[0030] 本发明的药物还可与其他治疗子宫肌瘤的药物联用，多种药物联合使用可W大大 提到治疗的成功率。
[0031] 在本发明的上下文中/'SAV1基因"包括SAV1基因 W及SAV1基因的任何功能等同物 的多核巧酸。SAV1基因包括与目前国际公共核酸序列数据库GeneBank中SAV1基因（NC_ 000014.9)DNA序列具有70% W上同源性，且编码相同功能蛋白质的DM序列；
[0032 ] 优选地，SAV1基因的编码序列包括W下任一一种DNA分子：
[0033] (1)序列表中沈Q ID N0.1所示的DNA序列；
[0034] (2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；
[0035] (3)与（1)或(2)限定的DNA序列具有70%、优选地，90% W上同源性，且编码相同功 能蛋白质的DNA分子。
[0036] 在本发明的具体实施方案中，所述SAV1基因的编码序列是SEQ ID N0.1所示的DNA 序列。<