Iqce基因及其表达产物在i型糖尿病诊断中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体地涉及IQCE基因及其表达产物在I型糖尿病诊断 中的用途。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或 其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病时长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、 肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。糖尿病根据病因学分为四种类型，即I型糖尿 病、II型糖尿病、妊娠糖尿病和特殊类型的糖尿病。
[0003] 糖尿病的病因和发病机制较为复杂，至今尚未完全明了。目前认为I型糖尿病是一 种在遗传与环境相互作用下，以T细胞介导的特异性胰岛细胞自身免疫性破坏为主要发病 机制的一种疾病。I型糖尿病具有多基因遗传背景，易感性十分复杂，疾病的发生是多种基 因相互作用、相互影响的结果。
[0004] 目前临床上使用抗体筛选和诊断I型糖尿病。只要所述特异性抗体存在，随着时间 的推移，显性糖尿病往往就会发展。虽然抗体筛选能够检测I型糖尿病风险的增加水平，但 是所述风险是基于群体研究而不能告知个体患者疾病是否存在患糖尿病的风险。因此，临 床上需要一种方法能够实现个体化诊断。
[0005] 近年来，随着对I型糖尿病相关基因的研究日趋深入，尽管已报道了一些与I型糖 尿病的发生发展相关的基因，但是并没有应用到临床上，因此发现一种特异性的I型糖尿病 标记物应用于临床诊断具有重要的意义。
【发明内容】
[0006] 为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可用于I型糖尿病早期诊 断的分子标志物-IQCE基因。相比传统的I型糖尿病的诊断方法，使用分子标志物来诊断I型 糖尿病具有及时性、特异性和灵敏性，使患者在疾病早期就能知晓风险，针对风险高低，采 取相应的预防和治疗措施。
[0007] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0008] 本发明提供了一种IQCE基因及其表达产物在制备诊断I型糖尿病的产品中的应 用。
[0009] 进一步，上面所提到的诊断产品包括:通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位 杂交或芯片检测IQCE基因及其表达产物的表达水平以诊断I型糖尿病的产品。
[0010] 进一步，所述用RT-PCR诊断I型糖尿病的产品至少包括一对特异扩增IQCE基因的 引物;所述用实时定量PCR诊断I型糖尿病的产品至少包括一对特异扩增IQCE基因的引物； 所述用免疫检测诊断I型糖尿病的产品包括:与IQCE蛋白特异性结合的抗体;所述用原位杂 交诊断I型糖尿病的产品包括:与IQCE基因的核酸序列杂交的探针;所述用芯片诊断I型糖 尿病的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与IQCE蛋白特异性结合的抗 体，基因芯片包括与IQCE基因的核酸序列杂交的探针。
[0011] 进一步，所述诊断产品包括芯片和/或试剂盒；其中所述芯片包括基因芯片、蛋白 质芯片;所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒。所述基因检测试剂盒包 括SYBR Green聚合酶链式反应体系、用于扩增IQCE基因和管家基因的引物对;所述SYBR Green聚合酶链式反应体系包含:PCR缓冲液、dNTPs、SYBR Green荧光染料。
[0012] 本发明提供了一种诊断I型糖尿病的产品，所述的产品能够通过检测IQCE基因的 表达水平来诊断I型糖尿病。
[0013] 进一步，上面所述的产品包括芯片、或试剂盒。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白 质芯片;所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷 酸探针包括用于检测IQCE基因转录水平的针对IQCE基因的寡核苷酸探针;所述蛋白质芯片 包括固相载体以及固定在固相载体上的IQCE蛋白的特异性抗体;所述试剂盒包括基因检测 试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒;所述基因检测试剂盒包括用于检测IQCE基因转录水平的试 剂;所述蛋白免疫检测试剂盒包括IQCE蛋白的特异性抗体。其中，所述基因芯片可用于检测 包括IQCE基因在内的多个基因（例如，与I型糖尿病相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白 质芯片可用于检测包括IQCE蛋白在内的多个蛋白质(例如与I型糖尿病相关的多个蛋白质） 的表达水平。通过将多个与I型糖尿病的标志物同时检测，可大大提高I型糖尿病诊断的准 确率。
[0014] 进一步，上面所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片 方法检测IQCE基因表达水平过程中所需的试剂。优选地，所述试剂包括针对IQCE基因的引 物和/或探针。
[0015] 进一步，所述基因检测试剂盒包含SYBR Green聚合酶链式反应体系、用于扩增 IQCE基因和管家基因的引物对;所述SYBR Green聚合酶链式反应体系包含:PCR缓冲液、 dNTPs、SYBR Green荧光染料。所述扩增IQCE基因的引物对序列如下：正向引物序列为5'-AACTCCAGACCGATATGAAG-3' ；反向引物序列为5'-GCACCTCCTCGTAGTATG-3' ；所述管家基因为 GAPDH，扩增GATOH的引物序列对如下：正向引物序列为5'-CTCTGGTAAAGTGGATATTGT-3' ；反 向引物序列为5 ' -GGTGGAATCATATTGGAACA-3 '。
[0016] 进一步，所述基因检测试剂盒还包含M-MLV逆转录体系，所述逆转录体系包括T重 复寡核苷酸Oligo dT、逆转录反应液、M-MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、dNTPs。所述基因检测 试剂盒可用于检测包括IQCE基因在内的多个基因（例如，与I型糖尿病相关的多个基因）的 表达水平。
[0017 ] 本发明中与IQCE基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA 或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性 结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探 针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度 对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般 不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互 补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。
[0018]本发明中所述IQCE蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述IQCE蛋 白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰，例如，嵌合抗体、scFv、Fab、 F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能够保留与IQCE蛋白的结合能力即可。用于检测蛋白质水平 的抗体的制备是本领域技术人员公知的，并且本发明可以使用任何方法来制备所述抗体， 如所述的片段可以通过化学法从头合成或利用重组DNA技术合成。
[0019] 在本发明的上下文中，"IQCE基因"包括人IQCE基因以及人IQCE基因的任何功能等 同物的多核苷酸。IQCE基因包括与目前国际公共核酸序列数据库GeneBank中IQCE基因（NC_ 000007.14)DNA序列具有70%以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列；
[0020] 优选地，IQCE基因的编码序列包括以下任一种DNA分子：
[0021] (1)序列表中SEQ ID N0.1所示的DNA序列；
[0022] (2)在严格条件下与（1)限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；
[0023] (3)与（1)或(2)限定的DNA序列具有70%、优选地，90%以上同源性，且编码相同功 能蛋白质的DNA分子。
[0024]在本发明的具体实施方案中，所述IQCE基因的编码序列是SEQ ID NO. 1所示的DNA 序列。
[0025]本发明的IQCE基因可以是天然的或是人工合成的，或者使用可以表达IQCE的DNA 片段的载体转染细胞获得。所述载体所述载体包括病毒载体、真核表达载体。
[0026] 病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺 病毒相关病毒载体、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)载体、甲病毒载体。