时间分辨荧光有机增敏球及其制备方法与流程

本发明属于荧光免疫分析，涉及一种时间分辨荧光有机增敏球及其制备方法。

背景技术：

1、时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay，trfia)是以长衰减寿命的标记物如三价稀土离子及其螯合物代替传统的荧光素、同位素或酶等作为示踪剂标记蛋白质、多肽、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞，待反应体系发生后，测定最后产物中的荧光强度，以此来判断反应体系中被测物质的浓度，达到定量分析的目的。与传统的荧光素标记相比，由于使用的是荧光寿命长且stokes位移大的镧系元素(如铕)等作为标记物，通过同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可以有效避免背景非特异性荧光信号的干扰，从而获得所需定量的特异性荧光，因此，时间分辨荧光免疫分析灵敏度更高。

2、铕标记物或铕螯合物因具有增强荧光的特性，也可应用于时间分辨荧光免疫分析仪的校准和期间核查、性能检查、方法评价等方面，但这要求铕标记物或铕螯合物具有很高的稳定性。目前将铕标记物或铕螯合物应用于时间分辨荧光免疫分析时，一般要求其现配现用或者在低温条件下存储，使用和存储不便。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种时间分辨荧光有机增敏球。本发明提供的时间分辨荧光有机增敏球荧光特性好，稳定性强，可在常温下存储至少2年。

2、根据本发明的一个方面，提供了时间分辨荧光有机增敏球，其组成主要包括三价铕盐、增强剂和冻干基质；其中，增强剂选自bhhct或bhhbcb中的一种；三价铕盐和增强剂的摩尔比为1：(10～100)。

3、本发明通过选择合适的冻干基质，并将其与三价铕盐及增强剂混合，最终制得一种荧光强度稳定、适用于时间分辨荧光免疫分析、并可长期在常温下存储的时间分辨荧光有机增敏球，显著增强了铕螯合物的稳定性。

4、在一些实施方式中，三价铕盐可以选自氯化铕或其水合物、硝酸铕或其水合物中的一种。

5、在一些实施方式中，增强剂可以为bhhct。由此，制得的时间分辨荧光有机增敏球的荧光信号值最高，发光强度最强。

6、在一些实施方式中，三价铕盐可以为六水合氯化铕。

7、在一些实施方式中，按质量百分比计，冻干基质包括以下组分：0.9％nacl、0.5％～2％牛血清白蛋白、0.05％～0.2％抑菌剂、0.05％～1％海藻糖、0.005％～0.02％染料和缓冲液余量。由此，制得的时间分辨荧光有机增敏球形态严实绵密，速溶性好。

8、在一些实施方式中，抑菌剂可以选自proclin 300、叠氮化钠中的至少一种。

9、在一些实施方式中，染料可以选自曙红、亮蓝中的至少一种。

10、在一些实施方式中，缓冲液可以选自tris-hcl缓冲液、hepes缓冲液中的至少一种。

11、在一些实施方式中，按质量百分比计，冻干基质包括以下组分：0.9％nacl、1％牛血清白蛋白、0.1％ proclin 300、1％海藻糖、0.01％曙红和50mm tris-hcl缓冲液余量。由此，制得的时间分辨荧光有机增敏球均匀性好、荧光强度稳定。

12、根据本发明的另一个方面，提供了一种制备上述时间分辨荧光有机增敏球的方法，包括如下步骤：

13、取三价铕盐，用水配制成eu3+溶液；

14、取增强剂，用水配制成增强剂溶液；

15、将eu3+溶液、增强剂溶液和冻干基质混匀，然后分装、冷冻干燥，即得。

16、通过配制不同浓度的eu3+溶液，并与适量的增强剂和冻干基质混合，混合均匀后分装、冷冻干燥，即可制得不同荧光强度的时间分辨荧光有机增敏球。

17、在一些实施方式中，eu3+溶液、增强剂溶液和冻干基质的体积比可以为(0.1～2)：(0.9～9)：(9～19)。

18、本发明提供的时间分辨荧光有机增敏球使用时，用水溶解并稀释至所需浓度即可。

19、本发明提供的时间分辨荧光有机增敏球制备简单、荧光信号强且稳定，以60℃加速4周(相当于常温存储2年)后，荧光信号值前后无明显变化。

技术特征：

1.时间分辨荧光有机增敏球，其特征在于，其组成主要包括三价铕盐、增强剂和冻干基质；所述增强剂选自bhhct或bhhbcb中的一种；所述三价铕盐和增强剂的摩尔比为1：(10～100)。

2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光有机增敏球，其特征在于，所述三价铕盐选自氯化铕或其水合物、硝酸铕或其水合物中的一种。

3.根据权利要求1所述的时间分辨荧光有机增敏球，其特征在于，所述增强剂为bhhct；所述三价铕盐为六水合氯化铕。

4.根据权利要求1～3任一项所述的时间分辨荧光有机增敏球，其特征在于，按质量百分比计，所述冻干基质包括以下组分：0.9％nacl、0.5％～2％牛血清白蛋白、0.05％～0.2％抑菌剂、0.05％～1％海藻糖、0.005％～0.02％染料和缓冲液余量。

5.根据权利要求4所述的时间分辨荧光有机增敏球，其特征在于，所述抑菌剂选自proclin 300、叠氮化钠中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的时间分辨荧光有机增敏球，其特征在于，所述染料选自曙红、亮蓝中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的时间分辨荧光有机增敏球，其特征在于，所述缓冲液选自tris-hcl缓冲液、hepes缓冲液中的至少一种。

8.根据权利要求5～7任一项所述的时间分辨荧光有机增敏球，其特征在于，按质量百分比计，所述冻干基质包括以下组分：0.9％nacl、1％牛血清白蛋白、0.1％proclin 300、1％海藻糖、0.01％曙红和50mm tris-hcl缓冲液余量。

9.根据权利要求1～8任一项所述的时间分辨荧光有机增敏球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结
本发明公开一种时间分辨荧光有机增敏球，其组成包括三价铕盐、增强剂和冻干基质；其中，增强剂选自BHHCT或BHHBCB中的一种；三价铕盐和增强剂的摩尔比为1：(10～100)。本发明提供的时间分辨荧光有机增敏球荧光特性好，稳定性强，可在常温下存储至少2年。

技术研发人员：周瑾艳,李奕辉,罗思婷,花秀兵,李婷,廖泽荣,黄彦捷
受保护的技术使用者：广东省计量科学研究院（华南国家计量测试中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/3/5