专利名称：动纤手术胶的配制的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于外科手术的胶水(动物纤维蛋白原复合物生物粘合剂)的配制方法。
传统的外科手术缝合不但操作费时复杂，且缝合材料常引起组织发炎、感染化脓、结节增生、瘘管、创缘裂解或缺血坏死，及实质器官的损伤等。因此，长期以来人们一直在不懈地努力，企求一种理想的生物粘合剂以代替缝线。
迄今为止，前人试用过的化学性生物粘合剂主要有环氧树酯、丙烯酸树酯、聚氨基甲酸乙酯、聚苯乙烯、氰基丙烯酸酯类、聚甲基丙烯酸酯等。但这些化学物质在体内极难吸收，并具有一定的毒副作用。
除化学物质外，人们还试用过蛋白性生物粘合剂。主要有明胶、贻贝胶和人纤维蛋白粘合剂。其中前两种因引起过敏反应和分离繁难而无实用价值，而后者一度在临床上被广泛应用。但是，人纤维蛋白粘合剂系从人血浆中提取，不但提取组织来源缺乏，价格昂贵，而且有传播B型肝炎、梅毒和爱滋病(AIDS)等人类疾病的潜在危险。因此在有些国家已被禁止使用。
本发明在于从动物组织中提取配制了动物纤维蛋白原复合物新型生物粘合剂，主要成分有凝血酶原、凝血质、纤维蛋白原、白蛋白、球蛋白和硝酸钙(或加抑肽酶)。除硝酸钙为化学试剂外，其余各成分均从动物组织中提取。因此其提取组织来源广泛，成本低廉，而且没有传播人类疾病的潜在危险。同时由于提取过程中对各成分进行了抗原性处理，不但可以用于兽医临床而且可以用于人体手术。其作用原理是利用生物酶催化底物发生的聚合反应。
粘合剂中的凝血酶原是采用盐析、吸附、等电点沉淀等方法从动物血浆中提取。提取过程如下A、Mg(OH)2乳剂的制备(1)、NH4OH(浓缩)1000ml(2)、20%MgCl4000ml将(1)慢慢加入(2)，边加边搅，让沉淀物下沉，倾上清液，然后用水反复冲洗沉淀物。经离心，将500g沉淀物混悬于1000ml水中即得。
B、抗凝剂的制备1.85% K2C2O4.2H2O0.5% H2C2O4.2H2O0.85% NaClC、新鲜动物血(牛、猪、羊等)10000ml加抗凝剂 600ml先将抗凝剂加入容器，流入动物血10000ml，混匀后立即用离心机分离血浆，3000转/分，10分钟。
D、第二天早晨，按每100ml血浆加冷蒸馏水1500ml稀释，然后用1%醋酸调PH至4.5，经3小时即产生沉淀。
E、将沉淀物离心去水，加入3升草酸盐生理盐水(0.5%K2C2O4+0.9%NaCl)，加0.1N NaOH将PH调至6.4，沉淀物溶解。
F、将上液中加入1000mlMg(OH)2乳剂，室温静置30分钟，取沉淀物离心去水。
G、将沉淀物溶于1.5升水中，通CO2(2.5大气压)震荡30分钟，转化Mg(OH)2为碳酸镁。
H、布氏漏斗滤去析出物，装透析袋在蒸馏水中透析三天。
I、将透析过的溶液用1%醋酸调PH至6.5，离心去除无活性蛋白。上清液用1%醋酸调PH至4.5，离心得到的沉淀物即含丰富的凝血酶原。将沉淀物溶于100ml0.1%草酸盐生理盐水中，用0.1N NaOH调PH至7.0，低温保存。
粘合剂中的凝血质是用盐析、吸附法从动物肺组织中提取，提取过程如下A、每100g新鲜粉碎肺组织加100ml生理盐水，不时搅拌放置48小时。
B、取离心液用生理盐水稀释一倍，每120ml这样的液体加入20mlMg(OH)2乳剂吸附杂质。
C、将上液离心取上清液，每100ml上清液加入100ml饱和(NH4)2SO4溶液。再次离去上清液，将沉淀物溶于生理盐水。
D、上液加入等量的饱和硫酸胺溶液再行离心，去上清液，将沉淀物溶于15ml生理盐水中。
E、上液装透析袋用生理盐水透析至完全除去(NH4)2SO4为止，所得溶液即含丰富的凝血质。
粘合剂中的纤维蛋白原、白蛋白和球蛋白均从动物血浆中制取，过程如下A、新鲜动物血10000ml加抗凝剂600ml混匀离心，3000转/分，10分钟，分离血浆。
B、将分离得到的血浆在-80℃以下放置12小时作低温处理。
C、将冷冻处理后的血浆融解，用1%醋酸调PH至5.5，离心得到的沉淀物溶于500ml生理盐水中，其中含有大量的纤维蛋白原、白蛋白和球蛋白。含量可用光电比色或电泳法测得。
粘合剂各成分制好后，均放在-80℃以下保存24小时以上再使用，以降低其抗原性。
为了延长保存期，可将各成分冷冻干燥保存。
粘合剂使用前，先将各成分配成A液和B液。
A液的配制取凝血酶原溶液10ml，加入凝血质溶液5ml，加温至37℃，10分钟，凝血酶原即被转化为凝血酶。用标准纤维蛋白液或牛血浆可测得凝血酶含量。根据用途，用生理盐水稀释至100-3000KIU/ml，同时加硝酸钙，含量为50-250mmol/ml。配好后4℃保存。
B液的配制取纤维蛋白原，白蛋白和球蛋白溶液(或冷冻干燥制品)，用生理盐水稀释，根据用途，含量分别为纤维蛋白原50-200Mg/ml，白蛋白20-100mg/ml和球蛋白50-200mg/ml，配好后4℃保存。
使用时，用1ml针管吸A液、B液各0.5ml，加温至37℃，等量同时滴入创内。各成分混合后立即发生凝集反应。术者迅速将创缘靠拢对齐轻轻按压约5秒钟，创缘即被粘住。10公分长的皮肤切口大约需要0.2ml粘合剂。
如需延长粘合剂在体内的吸收和作用时间，可在B液中加入抑肽酶1000-3000KIU/ml。抑肽酶有商品产品，也可自己从动物组织中提取。为了增强抗感染能力，也可在B液中加入抗菌药物。
大量动物实验和临床应用结果表明，用本发明中的动纤手术胶粘合切口比缝合切口操作简便，可使手术时间缩短5-10倍;术后炎症轻，无感染、愈合快，均达一期甲级愈合;愈合后几无肉眼可见癜痕，表现出多方面的优越性。该粘合剂不但可以粘合皮肤，而且可以粘合肌肉、脂肪、神经、血管、胃肠、子宫以及用于实质器官的止血、眼科、耳科等。
权利要求
1.一种用于动物和人体手术的生物粘合剂的配制方法，其特征在于主要成分凝血酶原、凝血质、纤维蛋白原、白蛋白、球蛋白(及抑肽酶)均从动物组织中提取，提取后经低温处理，液态或冷冻干燥保存，配成含有凝血酶、硝酸钙的A液和含有纤维蛋白原、白蛋白和球蛋白(或加抑肽酶)的B液使用。
2.按权力要求1中粘合剂的配制方法，其特征在于除硝酸钙外，其余各成分均从动物组织中提取。
3.按权力要求1中的配制方法，其特征在于凝血酶原、纤维蛋白原、白蛋白和球蛋白均从动物血浆中提取。
4.按权力要求1中的配制方法，其特征在于凝血质从动物肺组织中提取。
5.按权力要求1中的配制方法，其特征在于粘合剂各成分提取后经-80℃以下低温处理后再使用。
6.按权力要求1中的配制方法，其特征在于A液中的硝酸钙浓度为50-250mmol/ml，凝血酶浓度为100-3000KIU/ml。
7.按权力要求1中的配制方法，其特征在于B液中的纤维蛋白原浓度为50-200mg/ml，白蛋白浓度为20-100mg/ml和球蛋白浓度为50-200mg/ml。
8.按权力要求1中的配制方法，其特征在于使用时，将A液和B液加温至37°-39℃，同时等量滴入创内。
9.按权力要求1中的配制方法，其特征在于粘合剂可以液态保存或低温干燥固态保存。
10.按权利要求1中的配制方法，其特征在于可在B液中加入抑肽酶1000-3000KIU/ml以延长其作用时间。
全文摘要
本发明公开了一种外科动纤手术胶的配制方法。利用盐析、吸附、等电点沉淀、低温沉淀法从动物血浆和肺组织中提取配制了生物粘合剂。主要成分有凝血酶原、凝血质、纤维蛋白原、白蛋白和球蛋白(及抑肽酶)。使用时配成A、B两液，同时滴入创内，利用各成分间的凝集反应使创缘粘住。该粘合剂进行了抗原性处理，用于人体不会引起免疫反应。大量动物实验和临床应用结果表明，粘合切口操作简便；术后炎症轻、无感染、愈合快；愈合后几乎不留可见瘢痕。可用于粘合皮肤、胃肠、子宫、血管、神经、肌肉、脂肪，以及用于实质器管的止血、眼科、耳科等。
文档编号C09J189/00GK1049456SQ8910646
公开日1991年2月27日 申请日期1989年8月12日 优先权日1989年8月12日
发明者王爱本, 褚庆环, 杜培莲, 赵国荣, 樊宝昌 申请人:莱阳农学院