专利名称：微量滴定板的制作方法
技术领域：
本发明涉及阱间的光学串扰减小的微量滴定板。本发明还涉及用于在使用光发射 或光透射的分析方法中使用的这种微量滴定板。
背景技术：
许多生物技术分析方法都利用通常称为微量滴定板的多阱试样板。每个阱中进行 单独的反应，并且反应的最终产物被用于解释分析的结果。或者，反应可被实时追踪。这种分析方法可以在溶液中进行，即，所有的反应物都存在于溶液中。如果存在所 要被检测的被分析物，则反应物就会提供某种信号，诸如外观或颜色上的变化、发光、浑浊 等等。一个示例是Pyrosequencing⑧分析法，它涉及在将核苷酸加入核酸链之后检测酶级 联体系发出的光。该分析方法还可以对阱的固相执行，例如在所谓的夹心试验中，将对被分 析物有亲和性的分子键合在阱的底部，添加可能含有被分析物的试样，添加对被分析物有 亲和性的标记分子，洗去多余的标记，并且可在添加显影剂(developing agent)之后检测 任何剩余的标记。要被在诸如上述的方法中检测的信号可以包括来自阱的光发射或是通过阱的光 透射。通常依靠各种光检测手段来自动检测这种位于阱底部下面的光。所以，微量滴定板 有透明的底部，以使得能够可以在从上面分配反应物的同时，从下面实时地对光进行检测。 如果要测量阱的内容物的颜色或浑浊，那么光可以从板上方的光源发出来。制造这种板的最方便、最经济的方法是由透明材料片通过例如真空成型或注射成 型来生产板。因此，整个板都是透明的。但是，这种透明塑料能够把光从一个阱导向另一个 阱。这种现象是光的内反射和透射导致的，并且结果导致来自不应产生光信号的阱的错误 的信号。这样的结果是错误的结果。因此，应避免这种反射和透射。WO 94/21379公开一种构造，其中阱壁在内侧和/或外侧涂布了诸如金属、陶瓷或 半导体等的反射材料。或者，板由反射材料制成，或将透明的微量滴定板放置在反射板内 部。但是，这些构造的制造较昂贵。而且当使用这种涂布技术时，存在涂布到阱的底表面的 风险。此外，对内侧的涂布可能会影响阱内的想要的生物/化学处理。所述文献还记载了 使用颜料来对塑料染色，从而减少透射率或反射率也是已知的。如果需要透明的底部，则这 些解决方案将增加制造成本，因为需要用两种不同材料形成板。US 6，051，191提供一种微量滴定板，其利用包含两种不同的聚合物的构造来减少 串扰。阱由透明聚合物制成，该透明聚合物置于不透明聚合物的基质中。不透明聚合物覆盖 了阱的壁的外侧以及所述阱之间的顶部表面，从而留下具有透明底部和不透明壁的阱。虽 然此微量滴定板减少了阱间的串扰，但是它还需要复杂的多步生产工艺，这造成生产成本尚昂。上述微量滴定板都可用于基于光的分析方法。但是，仍存在着对于容易制造、便宜 且在用于基于光检测或测量的分析方法时仍能减少光的透射和/或反射的微量滴定板的需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种方便实时测量且光学串扰减少的微量滴定板 (microtitre plate)构造。微量滴定板的制造成本应足够低，以使其可用完即弃。本发明的第一个方面，提供了一种微量滴定板，包括具有透明底部的阱，其中所述 的微量滴定板在至少二个相邻的阱之间具有至少一个物理形变。该物理形变可具有沟道、 突脊、孔、狭缝或者台阶的形状。在进一步的实施方式中，相邻阱之间的每个表面都具有至少一个物理形变。在进一步的实施方式中，物理形变可以以任何几何图案围绕阱。这可以以例如网 格、或圆、或方块的形式实现。根据本发明的微量滴定板适用于测量发光或透光的分析方法，诸如化学发光、生 物发光、测光法(photometry)和/或荧光。本发明提供一种微量滴定板，其包括具有透明底部的阱，其允许实时测量，包括在 测量期间同时添加反应物。通过阱间的物理形变实现了串扰的减少。该微量滴定板可以通 过常规处理技术一体成形，这意味着简单的制造工艺和低的生产成本。
图1显示了现有技术中已知的一种微量滴定板，(a)是俯视图，(b)是截面图。虚 线箭头表示阱的分布。图2显示了根据本发明的微量滴定板的截面图，其具有不同的物理形变，和形变 的不同组合。图3显示了根据本发明的微量滴定板的截面图，包括具有孔或狭缝、或者孔或狭 缝与突脊组合的构造。虚线表示孔或狭缝。图4显示了根据本发明的微量滴定板的俯视图，包括围绕阱的物理形变。阴影的 区域表示物理形变。图5显示了根据实施例1的两个微量滴定板。板1在阱间具有沟道，而板2没有。图6显示了根据实施例2的微量滴定板。图7显示了根据本发明的微量滴定板，a)是俯视图，b)是截面图(Y-Y)，c)是截 面图(X-X)，d)是透视图。
具体实施例方式本发明的微量滴定板可具有如图1所示的传统的微量滴定板的通常结构。微量滴 定板通常是矩形的塑料多阱板，但也可以是其它的大小或形状。为方便实时测量，阱需要有 一个透明的底部以允许光通过用于检测。从上面的检测也是可能的。由于发出的光/透射 的光在所有方向上传播，所以光经由塑料材料被透射和/或反射到相邻的阱中，导致不正 确的检测。为了获得精确的测量结果，必须减少此“串扰”。根据图1，将微量滴定板的上表面标记为1，并且其指的是整个表面；用附图标记 Ia或Ib表示两个相邻阱14之间的表面。Ia是较高的上表面，Ib是较低的上表面。这些附 图标记将在下文描述本发明时使用。使用用于微量滴定板的这种传统结构作为根据本发明的微量滴定板的基础。图2显示了根据本发明的微量滴定板的一个实施方式，包括用于上表面Ia和Ib 的不同物理形变。可以在任一表面上形成一个或多个沟道12或突脊13。沟道可在同一点 形成在两个表面上，从而减少了材料的厚度。而且，物理形变可只位于一侧。图2a_e所示 的物理形变的任何组合都是可能的。图3显示了下述实施方式，其中在阱14之间的顶表面上的一个或多个孔或狭缝15 用来减少板内的光的透射。虚线表示孔或狭缝。所述孔或狭缝减少了阱14间的串扰，但其 显然并不完全包围阱14。图3还显示了孔或狭缝15与突脊13的组合。图4a_d显示了围绕阱14的物理形变的几何图案，阴影区域16表示物理形变。连 续图案和非连续图案都是可能的。物理形变的形状、高度或深度及其围绕阱的几何图案并不是关键的，只要该形变 能减少串扰即可。在物理形变是沟道或突脊的形状的情况下，适合地，突脊的高度或沟道的 深度是用来制造微量滴定板的塑料材料厚度的0. 1 10倍，优选为0. 5 10倍，最优选是 塑料材料厚度的2 6倍。通常，塑料材料约0. 5mm厚。物理形变可以在通过使用具有期望的结构的模具制造微量滴定板的制造工艺中 形成。优选地，微量滴定板通过真空成型一体成形。可使用本领域技术人员公知的其他适 合的制造技术，例如注射成型或压缩成型。根据本发明的微量滴定板能够适用于依赖于光检测的分析方法，其测量以不同波 长从微量滴定板的阱中发出的光或者通过阱透射的光。可以从板的上方或下方检测光。能 够分析不同的发光现象，例如生物发光、化学发光、测光法和荧光。本发明也适用于边合成 边测序方法(sequenceing-by-synthesis)。实例实例1阱之间形成沟道。这个沟道阻止通过塑料引导的任何光的大部分进入相邻的阱。由相同的塑料制成两个板。如图5所示，板1在阱间具有沟道12，而板2没有。阱B6至B8中填充有用于执行Pyroscquencing 反应的20微升(μ 1)退火缓冲 物。向阱Β7加入用于执行Pyroscquencing 分析的酶和基质。焦磷酸盐分配到B7中的 分配物2中，以给出高信号。将水分配入B6和B8中，它们不应给出信号。这样，只有阱B7 中的分配物2应产生信号。B6和B8用于测量串扰。阱中的分配物记载在下表中。
权利要求
一种微量滴定板，包括具有透明底部的阱，其中所述微量滴定板在至少两个相邻阱之间包括至少一个物理形变。
2.如权利要求1所述的微量滴定板，其中所述物理形变具有沟道、突脊、孔、狭缝或台 阶的形状。
3.如权利要求1或2所述的微量滴定板，其中所述物理形变具有沟道的形状。
4.如权利要求1-3任一所述的微量滴定板，其中所述物理形变以任意几何图案围绕阱。
5.如权利要求4所述的微量滴定板，其中所述物理形变以圆、网格或方块的形式围绕阱。
6.如前述任一权利要求所述的微量滴定板，其中所述微量滴定板一体成形。
7.如权利要求6所述的微量滴定板，其中所述微量滴定板通过真空成型制成。
8.如权利要求1-7任一所述的微量滴定板，用于在测量射入或透射通过所述微量滴定 板的阱的光的分析方法中使用。
9.如权利要求8所述的微量滴定板，其中所述分析方法利用测光法、化学发光、生物发 光和/或荧光。
10.如权利要求8所述的微量滴定板，其中所述分析方法是边合成边测序方法。全文摘要
本发明涉及一种微量滴定板，该微量滴定板包括具有透明底部的阱，其中所述微量滴定板在至少两个相邻阱之间具有至少一个物理形变。所述物理形变可具有例如沟道、突脊、孔、狭缝或台阶的形状。
文档编号B01L3/00GK101970113SQ200980105995
公开日2011年2月9日 申请日期2009年2月23日 优先权日2008年2月22日
发明者大卫·史密斯, 彼德·海格里德 申请人:凯杰器械有限公司