一种解氏马尾藻提取物的协同提取优化方法

本发明属于海洋天然活性物质制备，具体涉及一种解氏马尾藻提取物的协同提取优化方法。

背景技术：

1、褐藻是一类广泛分布于海域冷水区的经济藻类，具有巨大开发潜力。常见的褐藻有海带、裙带菜、鹿角菜、羊栖菜、鹅掌菜、鼠尾藻、马尾藻、铜藻、绳藻、萱藻、海黍子等。褐藻中含有丰富的海藻多糖、蛋白质、氨基酸、多酚类、萜类、甘露醇、岩藻黄素、激素等活性物质。其中多酚化合物具有结构特殊，生物活性丰富和医药价值高的特点。

2、褐藻多酚是一类以间苯三酚为基本单元的聚合物，广泛分布于褐藻中，是构成褐藻细胞壁的重要成分。褐藻多酚具有多种活性，包括抗氧化、抗菌、抗肿瘤及防癌变、改善心血管机能、抗病毒、化学防御、除异味，除臭以及抗疲劳、抗肥胖、抗糖尿病、增强免疫能力等活性。在许多褐藻中含有独特的多酚化合物，被称为“根皮单宁”。欧盟已批准根皮单宁为新资源食品，并允许用于膳食补充剂。褐藻多酚因其丰富的生物活性以及在自然界中广泛存在的特点，有着成为药品、化妆品、保健品及食品添加剂新型原料的巨大潜力。

3、副溶血性弧菌是一种广泛分布的海产品源致病菌，人可因食用生的或未煮熟的海鲜而导致严重的肠胃炎。在有利的条件下，副溶血性弧菌可以在整个食品生产链中快速繁殖，沿食物链形成的生物膜难以消除。当其从生物膜中分离出来后，可能会污染加工设备和食品。据报道，生物膜与人群中80%以上的细菌感染和约60%的食源性疾病暴发有关。最近的研究表明，大多数副溶血性弧菌的环境分离株表现出高度的抗生素耐药性，且其耐药性与生物膜形成能力呈正相关。在食品工业中，目前被广泛使用的次氯酸钠、乳酸、过氧化氢等消毒剂并不能完全清除致病菌生物被膜，而且其安全性也越来越受到消费者的关注。

4、水产品是大量优质动物蛋白的重要来源，是落地落实大食物观的途径之一。一方面要大力发展冷水渔业养殖，另一方面要将绿色化的水产品送进千家万户。基于其优异的抗菌和抗氧化活性，褐藻多酚代表了目前食品工业中使用的合成防腐剂的潜在天然替代品，具有深入开发的巨大潜力。但不同生物来源褐藻多酚的功能和活性会有所不同。因此，保证获得的褐藻多酚具有良好的抗菌和抗氧化活性，是进一步开发褐藻多酚基绿色水产品保鲜剂的先决条件。

5、马尾藻在中国沿海的自然产量较大，以往沿海居民常大量捞取做农田肥料或家畜饲料。同时马尾藻也是褐藻工业的重要原料，可用于提取褐藻胶、甘露醇等化工产品。总体上，马尾藻在我国的应用多为低附加值的半成品，资源利用率低、经济效益差、环境污染严重，以上缺点严重抑制了马尾藻产业在我国的健康持续发展。

技术实现思路

1、本发明的目的在于设计出一种解氏马尾藻提取物的协同提取优化方法，可以最大限度得到多酚含量、抗氧化活性和抗副溶血弧菌生物膜活性，解决目前马尾藻资源利用率低、经济效益差等问题。

2、为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、一种解氏马尾藻提取物的协同提取优化方法，其特征在于：所述方法如下：

4、s1: 采用单因素提取条件对解氏马尾藻进行提取，得到提取物；

5、s2:测定提取物的多酚含量、抗氧化活性和抗副溶血弧菌生物膜活性，得到单因素试验的结果；

6、s3:以乙醇体积分数 x1、提取温度 x2、提取时间 x3作为自变量，以多酚得率 y1、dpph自由基清除活性 y2、抗副溶血弧菌生物膜活性 y3为考察值，采用box-behnken设计并进行试验，得出bbd自变量的范围、水平及观测值数据；

7、s4:对s3中数据进行多元回归分析，得到的多酚得率 y1、dpph自由基清除活性 y2、抗副溶血弧菌生物膜活性 y3三个模型的多元回归方程；

8、s5:分析拟合程度，得到最优的乙醇体积分数、提取温度、提取时间。

9、进一步的，乙醇体积分数是56%、提取温度是58℃、提取时间是5 h时为最优方案，实际马尾藻提取物中总酚得率为10.76 ± 0.42 mg/g、dpph自由基清除率为94.90 ±0.95%、抗副溶血弧菌生物膜活性为52.59 ± 1.85%。

10、进一步的，采用福林酚法测定马尾藻提取物中总多酚的含量，采用dpph自由基清除法测定马尾藻提取物的抗氧化活性，抗副溶血弧菌生物膜形成的抑制活性采用结晶紫法进行测定。

11、进一步的，单因素提取方法具体是提供解氏马尾藻和乙醇水溶剂；将所述解氏马尾藻进行预处理，得到解氏马尾藻粉末；将所述解氏马尾藻粉末与乙醇水溶剂混合，经热水浸提后，过滤除杂，浓缩，得到解氏马尾藻提取物。

12、一种解氏马尾藻提取物，所述解氏马尾藻提取物中含有抗氧化和抗生物膜活性，在制备食品、药品或饲料添加剂中的应用。

13、上述技术方案可以得到以下有益效果：

14、本发明使用的乙醇溶剂可循环利用，能源和溶剂消耗与常规工艺比较，属典型的环境清洁生产工艺，适合工业化生产模式。本发明制备得到的解氏马尾藻提取物具有高的多酚含量、抗氧化活性和抗副溶血性弧菌生物膜活性，可用于食品、药品或饲料领域中。

技术特征：

1.一种解氏马尾藻提取物的协同提取优化方法，其特征在于：所述方法如下：

2.根据权利要求1所述的一种解氏马尾藻提取物的协同提取优化方法，其特征在于：乙醇体积分数是56%、提取温度是58℃、提取时间是5 h时为最优方案，实际马尾藻提取物中总酚得率为10.76 ± 0.42 mg/g、dpph自由基清除率为94.90 ± 0.95%、抗副溶血弧菌生物膜活性为52.59 ± 1.85%。

3.根据权利要求1所述的一种解氏马尾藻提取物的协同提取优化方法，其特征在于：采用福林酚法测定马尾藻提取物中总多酚的含量，采用dpph自由基清除法测定马尾藻提取物的抗氧化活性，抗副溶血弧菌生物膜形成的抑制活性采用结晶紫法进行测定。

4.根据权利要求1所述的一种解氏马尾藻提取物的协同提取优化方法，其特征在于：单因素提取方法具体是提供解氏马尾藻和乙醇水溶剂；将所述解氏马尾藻进行预处理，得到解氏马尾藻粉末；将所述解氏马尾藻粉末与乙醇水溶剂混合，经热水浸提后，过滤除杂，浓缩，得到解氏马尾藻提取物。

5.一种解氏马尾藻提取物，其特征在于：通过权利要求1-4任一项所述的协同提取优化方法提取得到。

6.根据权利要求5所述的解氏马尾藻提取物的应用，其特征在于：所述解氏马尾藻提取物中含有抗氧化和抗生物膜活性，在制备食品、药品或饲料添加剂中的应用。

技术总结
本发明公开了一种解氏马尾藻提取物的协同提取优化方法，所述方法如下：S1:采用单因素提取条件对解氏马尾藻进行提取，得到提取物；S2:测定提取物的多酚含量、抗氧化活性和抗副溶血弧菌生物膜活性，得到单因素试验的结果；S3:以乙醇体积分数X<subgt;1</subgt;、提取温度X<subgt;2</subgt;、提取时间X<subgt;3</subgt;作为自变量，以多酚得率Y<subgt;1</subgt;、DPPH自由基清除活性Y<subgt;2</subgt;、抗副溶血弧菌生物膜活性Y<subgt;3</subgt;为考察值，采用Box‑Behnken设计并进行试验，得出BBD自变量的范围、水平及观测值数据；S4:对S3中数据进行多元回归分析，得到的多酚得率Y<subgt;1</subgt;、DPPH自由基清除活性Y<subgt;2</subgt;、抗副溶血弧菌生物膜活性Y<subgt;3</subgt;三个模型的多元回归方程；S5:分析拟合程度，得到最优的乙醇体积分数、提取温度、提取时间，本发明的优点是制备的解氏马尾藻提取物具有高的多酚含量、抗氧化活性和抗副溶血性弧菌生物膜活性，可以直接应用在食品、药品或饲料领域中。

技术研发人员：郭雷,郑洪利,杜海若,王雯芳,黄琼辉,王彤,徐馨怡,闵子怡
受保护的技术使用者：江苏海洋大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15