用于在免疫测定中重复使用半抗原涂覆的探针的方法与流程

本发明涉及一种免疫测定方法，所述方法重复使用经半抗原固定化测试探针以对不同样品中的分析物定量约3到10次。所述方法在每个循环中使用双抗体缀合物溶液，并且通过在每个反应循环完成之后将测试探针浸渍在ph为约1-4的酸性溶液中来再生半抗原涂覆的测试探针。

背景技术：

1、成本控制是全球医疗保健提供者的主要目标。体外诊断(ivd)也不例外，其中生物标志物在诊断和预后中的临床效用已成为患者管理的标准。免疫测定技术在ivd行业中占很大部分并且正在稳定增长，在美国约为3％/年并且在发展中国家为15-20％/年。在一些情况下，如在诊断心肌梗塞时连续测量心脏标志物，成本可能会限制适当的测试量。

2、用于降低免疫测定的成本的典型方法需要最小化材料的制造费用、劳动力以及设施开销。

3、用于再循环免疫试剂的任何方法通常集中于将免疫复合物与如酸性/碱性ph溶液、有机溶剂、离液剂等变性剂解离。所述变性步骤在抗体不再与抗原结合的情况下会改变抗体电荷、水合、氢键合和三级结构。将抗体反向暴露于接近生理ph和离子强度的初始结合条件预期可恢复原始结合活性，然而，很少的抗体可以耐受反复暴露于变性条件而不会不利地影响其结合性质以及因此测定性能的某个方面。

4、需要在维持临床性能的同时降低免疫测定的成本。

技术实现思路

技术特征：

1.一种双抗体-聚合物缀合物，包含第一抗体，第二抗体，和聚合物，其中所述第一抗体和第二抗体共价连接至所述聚合物，并且所述聚合物是蔗糖和表氯醇共聚物。

2.根据权利要求1所述的双抗体-聚合物缀合物，其中所述聚合物是ficoll。

3.根据权利要求2所述的双抗体-聚合物缀合物，其中所述ficoll具有数百万的分子量。

4.根据权利要求1，2，或3所述的双抗体-聚合物缀合物，其中所述第一抗体是抗半抗原抗体。

5.根据权利要求4所述的双抗体-聚合物缀合物，其中所述半抗原是荧光素、生物素、洋地黄毒苷、硝基酪氨酸、二硝基苯酚、三硝基苯酚、硝基苯酚、氨基苯甲酸、alexa fluor、花青染料、tritc、荧黄、德克萨斯红、氟硼吡咯、myc、flag、多组氨酸、茶碱、苯妥英、苯巴比妥、丙戊酸、盘尼西林、庆大霉素、黄体酮、睾酮、雌二醇、或维生素d。

6.一种检测多个液体样品中的分析物的方法，所述方法包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的方法，其中步骤(b)的所述第一免疫复合物通过以下形成：

8.根据权利要求6所述的方法，其中步骤(b)的所述第一免疫复合物通过以下形成：

9.一种检测多个液体样品中的分析物的方法，所述方法包括以下步骤：

10.一种检测多个液体样品中的分析物的方法，所述方法包括以下步骤：

11.一种检测多个液体样品中的分析物的方法，所述方法包括以下步骤：

技术总结
本发明涉及免疫测定方法，所述方法在维持可接受的临床测定性能的同时重复使用半抗原固定化测试探针和试剂在任何地方约3到20次对不同样品中的分析物进行定量。所述方法在每个循环中使用包括针对所述分析物的抗半抗原抗体和捕获抗体的双抗体缀合物溶液。每个反应循环完成之后，将所述测试探针浸渍在pH为约1‑4的酸性溶液中，以洗脱形成在所述探针上的免疫复合物并且使所述半抗原固定化探针再生。半抗原涂覆的固相的稳健性允许利用多种变性试剂以在每个循环之后在不损害半抗原在所述固相上的结合活性的情况下高效洗脱所述免疫复合物。

技术研发人员：罗伯特·F·祖克,夏青,吴人杰
受保护的技术使用者：万迈医疗仪器有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17