专利名称：蚕桑产品降血糖效果的体外检测方法
技术领域：
本发明涉及一种生物产品降血糖效果的体外检测方法，特指一种蚕桑产品对2型糖尿病降血糖效果的体外检测方法。
背景技术：
降血糖效果的检测方法有多种，如经典的检测血液中胰岛素的含量(对1型糖尿病)；体内糖尿病检测(CN96195689.5)；可用肉眼观察的血糖检测条(CN99117739.8)；无创激光血糖检测仪(CN200510020410.3)。研究证实蚕桑产品如全蚕粉，蚕蛹粉，桑叶粉，桑根粉，桑椹等具有降血糖效果，并逐渐开发出相关产品。目前，检验这些蚕桑产品降血糖的效果，主要是通过高血糖动物(实验鼠)的体内验证。动物实验不仅周期长，需要相当的人力和财力，而且程序烦琐。根据对蚕桑产品对2型糖尿病降血糖作用为抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用机理，建立体外检测方法，即省时、省力，又可实行科学规范操作，有利于产品质量和生产的标准化。
发明内容
本发明的目的是提供一种蚕桑产品对2型糖尿病降血糖的体外检测方法。实现上述目的的技术方案的制备步骤是(1)蚕桑产品降血糖有效成分的提取将蚕桑样品粉碎，按1∶1体积比与浸提缓冲液混匀，置4-8℃环境下浸提、过滤、分离；(2)麦芽糖糖苷酶的制备取小鼠小肠粘膜，磨碎并重悬于磷酸缓冲液中，离心分离麦芽糖糖苷酶；
(3)α-糖苷酶抑制剂活性测定将麦芽糖糖苷酶溶液，上述浸提液37℃预温5-10分钟，加入桑蚕粉浸提液后继续水浴，用Na2CO3终止反应；取20ul溶液测定葡萄糖含量；(4)降血糖效果的评估(计算)抑制剂活力单位定义为在相同的条件下降低1个酶活力单位所需的抑制剂量，抑制百分比＝(抑制剂活力/酶活力)×100％。
本发明的体外检测方法操作简便，周期短，2天内可出检测结果；准确率高，可达到为阳性对照的96.95％。
本发明通过对蚕桑样品降血糖有效成分的分离，运用生物化学的方法检测α-葡萄糖苷酶的抑制效果，经与高血糖动物实验的检测及临床实验比较，具有较好的一致性。
本发明的优点1.操作简便根据蚕桑产品对2型糖尿病降血糖为抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用机理，测定分析蚕桑产品对α-葡萄糖苷酶的抑制效果。
2.省时、省力一个检测周期在2天内可出结果，常规分析试剂。
3.有利于产品质量和生产的标准化根据对α-葡萄糖苷酶的抑制效果，评估产品的质量标准。
具体实施例方式
本发明的制备步骤如下1、蚕桑产品降血糖有效成分的提取按1∶1的比例将蚕桑产品如全蚕粉，蚕蛹粉，桑叶粉，桑根粉，桑椹等与浸提缓冲液混匀，置4-8℃环境下浸提24小时；然后，过滤、分离浸提液。
2、麦芽糖糖苷酶的制备取小鼠小肠粘膜，磨碎并重悬于磷酸缓冲液(PH7.2～7.6)中，4000RPM 4℃离心10分钟，再10000RPM离心20分钟，取上清作麦芽糖糖苷酶。
3、α-糖苷酶抑制剂活性测定50ul麦芽糖糖苷酶溶液中，加水50ul，再加100ul底物0.028M麦芽糖/0.1M马来酸PH6.8，37℃预温水酶混合物5分钟，加入即蚕桑产品浸提液后37℃水浴，用2.6M Na2CO340ul终止反应。取20ul溶液测定葡萄糖含量。
4、降血糖效果的评估(计算)酶活力单位定义为在37℃，pH 6.8的条件下，1min内水解麦芽糖释放1μmol葡萄糖所需的酶量。抑制剂活力单位定义为在相同的条件下降低1个酶活力单位所需的抑制剂量。抑制百分比＝(抑制剂活力/酶活力)×100％。
运用上述方法检测经生物转化、超低温冷冻干燥制备的全蚕粉对α-葡萄糖苷酶的抑制效果，50mg/ml剂量全蚕粉和拜糖平的抑制效果分别为79％和81.6％。高血糖动物实验，按1mg/天的剂量，罐胃全蚕粉和拜糖平20天后空腹血糖值分别降低35.37％和35.02％；30天后餐后2小时的血糖值分别降低了15.68％和18.29％。
检测不同方法制备的全蚕粉对α-葡萄糖苷酶抑制效果的体外实验表明经生物转化、超低温冷冻干燥制备的全蚕粉为93.93％，经防氧化处理后再经冷冻干燥制成的全蚕粉(CN95115559.8)为93.35％，将鲜活健康蚕直接经真空冷冻干燥得到的全蚕粉(CN03116235.5)为91.91％，而阳性对照(拜糖平)为94.80％。
权利要求
1.一种蚕桑产品对2型糖尿病降血糖效果的体外检测方法，其特征是(1)蚕桑产品降血糖有效成分的提取将蚕桑样品粉碎，与浸提缓冲液混匀，置4-8℃环境下浸提、过滤、分离；(2)麦芽糖糖苷酶的制备取小鼠小肠粘膜，磨碎并重悬于磷酸缓冲液中，离心分离麦芽糖糖苷酶；(3)α-糖苷酶抑制剂活性测定将麦芽糖糖苷酶溶液、底物在37℃下预温，加入蚕桑样品浸提液后继续水浴，用Na2CO3终止反应，测定葡萄糖含量；(4)进行降血糖效果的评估计算。
全文摘要
本发明涉及一种蚕桑样品对2型糖尿病降血糖效果的体外检测方法。其采取将蚕桑样品粉碎，与浸提缓冲液混匀，置4－8℃环境下浸提、过滤、分离；再取小鼠小肠粘膜，磨碎并重悬于磷酸缓冲液中，离心分离麦芽糖糖苷酶；将麦芽糖糖苷酶溶液、底物在37℃下预温，加入蚕桑样品浸提液后继续水浴，用Na
文档编号G01N31/00GK1866024SQ200610040720
公开日2006年11月22日 申请日期2006年5月30日 优先权日2006年5月30日
发明者桂仲争, 侯成香 申请人:江苏科技大学