专利名称：测定脂质体相变温度的方法
技术领域：
本发明属于分析测试领域，具体是涉及一种测定脂质体相变温度的方法。
背景技术：
药物与载体相结合形成药物载体系统后，药物的吸收和分布不再由药物本身决定，而是受到载体的理化性质的影响。根据临床要求选择适当的药物载体材料，不仅可以将药物输送到靶器官，而且对于药物的理化性质和药理活性也起到有益的作用。脂质体作为药物传递与控释的载体，构成了一种新的药物控释体系。这种载体不仅可以提高药物的溶出度，有利于药物吸收，还可以使药物快速到达靶部位，尤其适合抗肿瘤药物制剂。
当脂质体将包载的药物运送到人体的病灶部位后，通常局部加热使药物释放，以达到治疗的目的。脂质体膜主要是由磷脂所构成的。磷脂分子在水中可自动生成闭合的磷脂双分子层，随温度的不同脂质体膜可发生相变。在相变温度以下时，膜结构处于胶晶态，结构相对紧密；在相变温度以上时，脂质体处于流体态和液晶态，膜的流动性和通透性迅速增加，脂质体所携带的化学药物会迅速释放。因此准确测定脂质体的相变温度方法是相变点调变、药物释放控制等技术的重要基础。
目前国内外已报道的脂质体药物载体存在难以实现温控释放药物的问题。最经典的脂质体相变测定方法是差示扫描量热法(DSC)。DSC法是一种比较成熟的测定相变的方法，但由于脂质体的相变热非常小，导致相变温度的检测灵敏度差，同时由于检测过程中放热峰、吸热峰的重叠或杂峰较多等问题，导致测定的相变温度发生错误。
其它常用的测定方法包括荧光去极化法、浊度法、放射标记法、核磁共振法和自淬灭荧光法等。但是，由于上述方法存在检测灵敏度低、实验操作复杂等缺点，不能被用于脂质体相变点的测定。此外，运用孵化温度与脂质体包封率之间的关系，虽然也可以大致推断脂质体的相变温度，但该实验方法周期长，且实验过程复杂，不适用于脂质体相变温度的确定。本专利根据脂质体的相变除能引起焓的变化外，也会引起其它物理化学性质明显变化的基本原理，结合我们在研究中发现的脂质体包封率与脂质体相变温度存在的一定关系(当孵化温度越接近脂质体的相变温度，脂质体的包封率就越高)，提出一种准确测定脂质体相变温度的方法。
发明内容
为了解决现有测定脂质体相变温度的方法灵敏度低、操作复杂的不足，本发明提供了一种确定相变温度的方法，有效地克服了现有技术的不足。
本发明解决技术问题所采用的技术方案是一种测定脂质体相变温度的方法，其特征在于，在用DSC法测定某种脂质体的相变温度的同时，测定药物包封率与孵化温度的关系曲线，根据曲线中包封率最高峰所对应的孵化温度，在DSC图谱中的众多吸热峰中确定该脂质体的实际相变峰即准确的相变温度。
上述技术方案具体操作是1)DSC法测定脂质体的相变温度将制得的脂质体混悬液于离心机上以12000r·min-1离心30min，移去上层清液，保留下层脂质体；称取10.0mg左右置于差示扫描量热仪中以2℃·min-1升温速度检测；2)测定孵化温度对脂质体包封率的关系根据DSC测定的结果，选取一系列孵化温度，制备脂质体混悬液，精密量取1mL混悬液于已洗涤的透析袋内，每3小时换取透析外液25mL，透析外液即为游离药物溶液，12小时后收集四次透析的溶液混合、定容至100mL。然后在一定波长下，用紫外分光光度仪测定上述溶液的吸光度，通过标准曲线折算透析外液中药物的浓度，根据以下公式计算脂质体的包封率；包封率＝(1-C游离/C总)×100％式中C游离为未包入脂质体游离药物的量；C总为药物总量以孵化温度为横坐标，包封率为纵坐标做图；3)根据2)中曲线包封率最高点对应的温度确定1)中DSC图谱中的相变峰，该峰所对应的温度即为脂质体的相变温度。
本发明所说的测定脂质体相变温度的方法，能比较准确地确定脂质体的相变温度。通过本方法得到准确的相变温度后，若对该种脂质体进行进一步的相变点调变，只需运用DSC跟踪该相变峰的位置变化，避免其它杂峰的干扰，进而方便快捷准确地测定脂质体的相变。
图1脂质体(100％卵磷脂)DSC图谱图2标准曲线图3脂质体(100％卵磷脂)孵化温度与包封率的关系图4脂质体(卵磷脂与胆固醇质量比为3比1)DSC图谱图5脂质体(卵磷脂与胆固醇质量比为3比1)孵化温度与包封率的关系图6脂质体(卵磷脂与胆固醇的质量比为5比1)DSC图谱图7脂质体(卵磷脂与胆固醇质量比为5比1)孵化温度与包封率的关系实施例在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例1制备盐酸小檗碱脂质体(100％卵磷脂)混悬液，将制得的脂质体混悬液于离心机上以12000r·min-1离心30min，移去上层清液，保留下层脂质体。称取10.0mg左右置于差示扫描量热仪中以2℃·min-1升温速度检测。根据DSC图谱(见图1)，60.6℃时出现一个较大的吸热峰。
选取25℃，37℃，50℃，60℃，70℃，80℃，在6种孵化温度下制备盐酸小檗碱脂质体，用透析袋透析12小时后，定容透析外液到100mL，在345nm下用紫外分光光度法测定溶液的吸光度，通过标准曲线(见图2)折算溶液的浓度，脂质体的药物包封率与孵化温度的关系见图3所示。结果表明60℃时包封率最高。这与DSC测定的结果相吻合，可以确定脂质体的相变温度为60.6℃。
实施例2制备盐酸小檗碱脂质体(卵磷脂与胆固醇质量比为3比1)混悬液，将制得的脂质体混悬液于离心机上以12000r·min-1离心30min，移去上层清液，保留下层脂质体。称取10.0mg左右置于差示扫描量热仪中以2℃·min-1升温速度检测。根据DSC图谱(见图4)，41.8℃时出现一个较大的吸热峰。
选取39℃，41℃，43℃，45℃，在4种孵化温度下制备盐酸小檗碱脂质体，用透析袋透析12小时后，定容透析外液到100mL，在345nm下用紫外分光光度仪测定溶液的吸光度，通过标准曲线(见图2)折算溶液的浓度，脂质体的药物包封率与孵化温度的关系见图5所示。结果表明43℃时包封率最高。这与DSC测定的结果相吻合，可以确定脂质体的相变温度为41.8℃。
实施例3制备盐酸小檗碱脂质体(卵磷脂与胆固醇质量比为5比1)混悬液，将制得的脂质体混悬液于离心机上以12000r·min-1离心30min，移去上层清液，保留下层脂质体。称取10.0mg左右置于差示扫描量热仪中以2℃·min-1升温速度检测。根据DSC图谱(见图6)，55.8℃时出现一个较大的吸热峰。
选取47℃，50℃，53℃，56℃，59℃，在5种孵化温度下制备盐酸小檗碱脂质体，用透析袋透析12小时后，定容透析外液到100mL，在345nm下用紫外分光光度仪测定溶液的吸光度，通过标准曲线(见图2)折算溶液的浓度，脂质体的药物包封率与孵化温度的关系见图7所示。结果表明53℃附近包封率最高。这与DSC测定的结果较为吻合，可以确定脂质体的相变温度为41.8℃。
权利要求
1.一种测定脂质体相变温度的方法，其特征在于，在用DSC法首次测定某种脂质体的相变温度的同时，测定药物包封率与孵化温度的关系曲线，根据曲线中包封率最高峰所对应的孵化温度，在DSC图谱中的众多吸热峰中确定脂质体的实际相变峰即准确的相变温度。
2.如权利要求1所说的测定脂质体相变温度的方法，其特征在于，具体的操作是1)DSC法测定脂质体的相变温度将制得的脂质体混悬液于离心机上以12000r·min-1离心30min，移去上层清液，保留下层脂质体；称取10.0mg左右置于差示扫描量热仪中以2℃·min-1升温速度检测；2)测定孵化温度对脂质体包封率的关系根据DSC测定的结果，选取一系列孵化温度，制备脂质体混悬液，精密量取1mL混悬液于已洗涤的透析袋内，每3小时换取透析外液25mL，透析外液即为游离药物溶液，12小时后收集四次透析的溶液混合、定容至100mL。然后在一定波长下，用紫外分光光度仪测定上述溶液的吸光度，通过标准曲线折算透析外液中药物的浓度，根据以下公式计算脂质体的包封率；包封率＝(1-C游离/C总)×100％式中C游离为未包入脂质体游离药物的量；C总为药物总量以孵化温度为横坐标，包封率为纵坐标做图；3)根据2)中曲线包封率最高点对应的温度确定1)中DSC图谱中的相变峰，该峰所对应的温度即为脂质体的相变温度。
全文摘要
本发明属于分析测试领域，具体是涉及一种测定脂质体相变温度的方法。所说的测定脂质体相变温度的方法是在用DSC法测定某种脂质体的相变温度的同时，测定药物包封率与孵化温度的关系曲线，根据曲线中包封率最高峰所对应的孵化温度，在DSC图谱中的众多吸热峰中确定该脂质体的实际相变峰即准确的相变温度。该方法能比较准确地确定脂质体的相变温度，以后若对该种脂质体进行进一步的相变点调变，只需运用DSC跟踪该相变峰的位置变化，避免其它杂峰的干扰，进而方便快捷准确地测定脂质体的相变。
文档编号G01N33/15GK101078697SQ20071002482
公开日2007年11月28日 申请日期2007年6月29日 优先权日2007年6月29日
发明者安学勤, 张敏, 裘丹 申请人:南京师范大学