专利名称：稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法
技术领域：
本发明属于氯霉素滴眼液的检测方法，特别属于含有银杏提取物的氯霉素 滴眼液的检测方法。
背景技术：
氯霉素滴眼液是一种眼部常用的药品，曾经作为OTC甲类药品在市场上流 通使用，其主要成份为氯霉素、缓冲液、抑菌剂、水，也有在氯霉素滴眼液中 加入玻璃酸钠、甘油以增强粘度，改善在眼部的保留时间。《中国药典》2005年 版二部中第778页公开了氯霉素滴眼液的检测方法，检测项目包括性状项、鉴 别项、检査项、含量测定项、类别项、规格项、贮藏项，在检查项中包括PH值 项、有关物质项、其它项的检测，在鉴别项中所提供的两种鉴别方法均为主药 氯霉素的鉴别方法，方法l为颜色反应，方法2为高效液相色谱法。
药品通常的有效期或保质期为2年，而氯霉素滴眼液的保质期只能达到8 一12个月，这是由于氯霉素滴眼液中氯霉素容易分解成氯霉素二醇物、对硝基 苯甲醛，氯霉素二醇物及对硝基苯甲醛对眼睛有较强的刺激性，影响患者的使 用。通过研究发现，通过对氯霉素滴眼液中物质成份进行调整，可以使氯霉素 滴眼液的保质期提高至2年以上，这些物质成份直接影响氯霉素滴眼液的保质 期，对氯霉素滴眼液的质量起着重要作用，有些物质成份还有一定的辅助治疗 作用，但目前中国药典所记载的氯霉素滴眼液的检测方法中对这些物质没有进 行鉴别或者含量测定，存在着一定的缺陷。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供完整的稳定性好的氯霉素滴眼液检测方法。
本发明解决技术问题的技术方案为氯霉素滴眼液的检测方法，包括中国 药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，在鉴别项中，增加了银杏提取物的鉴别方 法。
由于银杏提取物中含有黄酮醇苷和萜类内酯，黄酮醇苷主要包括槲皮素、 山奈素、异鼠李素，萜类内酯主要包括银杏内酯A，银杏内酯B，银杏内酯C， 及白果内酯。
所述的银杏提取物的鉴别方法可以为黄酮醇苷的鉴别方法，也可以为砲类 内酯的鉴别方法。
银杏叶提取物在氯霉素滴眼液中的用量一般为总重量0.3-0.5%，为了更加 准确的对氯霉素滴眼液中银杏提取物进行的用量控制，还可在含量测定项中， 增加银杏提取物的含量测定方法。
所述的银杏提取物的含量测定方法为高效液相色谱条件下进行测定 通过检测氯霉素滴眼液中黄酮醇苷及萜内酯的含量来确定银杏提取物的含量。
当采用了高效液相色谱法测定银杏提取物的含量后，还可在氯霉素滴眼液 检测方法的鉴别项中增加高效液相色谱鉴别方法，具体为在含量测定项下的 银杏提取物的测定中，氯霉素滴眼液的主峰保留时间应与槲皮素、山奈素、异
鼠李素、银杏内酯A，银杏内酯B，银杏内酯C，及白果内酯的保留时间一致。
为了避免银杏提取物鉴别过程中主药氯霉素的干扰，可以在鉴别反应中增
加预处理步骤，所述的预处理步骤为取氯霉素滴眼液，加入混合菌种，在30
一35X:保温搅拌不小于30分钟，过滤沉淀，即可，氯霉素滴眼液与混合菌种体 积比为100: 0.5-5。混合菌种可以选择性针对氯霉素滴眼液中氯霉素产生黄色沉淀，而不影响 氯霉素滴眼液中其它的物质成份。
所述的混合菌种为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) CGMCC 1.794、 粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens) CGMCC 1.203、大肠埃希氏菌(Escherichia coli) CGMCC 1.1575、其扩大培养液混合的体积比为6-10: 1-10: 5-15。
申请人认为银杏提取物作为天然的抗氧化剂，具有很强的清除溶液中自由 基的作用，通过对氯霉素滴眼液中自由基的消除，能够使氯霉素滴眼液有效期 达到2年以上，同时还有一定的保健治疗作用，因此在中国药典的鉴别项中增 加银杏提取物的鉴别方法，能够更加有效的提高中国药典中氯霉素滴眼液检测 的完整性。
由于在氯霉素滴眼液中增加了银杏提取物能够提高氯霉素滴眼液的稳定 性，故可以将中国药典中氯霉素的标示量规定为85 — 115%，而不是现行规定的 标示量大于85%即为合格产品，从而避免部分生产厂家采用多加主药氯霉素的形 式使氯霉素滴眼液在8 — 12个月的有效期内标示量达标。
由于药品的有效期目前采取备案制度，不同厂家的相同产品的有效期经常
不一致，从而使消费者产生困惑，为此，在中国药典的氯霉素滴眼液的检测项 中增加有效期项，并将有效期定为2年。
本发明与现有技术相比，将氯霉素滴眼液中对有效期有影响的银杏提取物 检测出来，从而使氯霉素滴眼液的有效期能够达到2年以上，有利于氯霉素滴 眼液的检测标准统一，便于厂家的生产、销售，以及消费者使用。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明做详细的说明。
槲皮素、山奈素、异鼠李素、银杏内酯A，银杏内酯B，银杏内酯C，及白 果内酯对照品均从中检所购买。。
所述的氯霉素滴眼液的样品通过以下方法进行制备。取氯霉素2.5克，硼酸1.5克，硼砂0.5克，氯化钠6.5克，银杏提取物 0.3克，用水加到IOOO毫升即可。 实施例1:
黄酮醇苷的鉴别方法-
取槲皮素对照品、山奈素对照品、异鼠李素对照品加甲醇制成每毫升溶液 分别含有上述3种物质10 u 1的混合溶液，作为标准溶液，按照中国药典附录 中薄层色谱法规定，分别吸取氯霉素滴眼液样品及标准溶液6"1，分别点于同
一含4呢醋酸钠的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯、丁酮、甲酸、水(5: 3: 1: 1) 为展开剂，展开，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外灯(365nm) 下检视，氯霉素滴眼液样品色谱中。在与标准品溶液色谱相应的位置上，显相 同颜色的荧光斑点。 实施例2:
萜类内酯的鉴别方法
取银杏内酯A，银杏内酯B，银杏内酯C，及白果内酯加丙酮对照品，制成 每毫升溶液中分别含有上述4种物质1毫克的混合溶液，作为标准溶液，按照 中国药典附录中薄层色谱法规定，分别吸取氯霉素滴眼液样品及标准溶液5u 1， 分别点于同一含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂的硅胶G薄层板上，
以甲苯、乙酸乙酯、丙酮、甲醇(10: 5: 5: 0.6)为展开剂，在15。C以下展开，
取出，晾干，在醋酐蒸气中熏15分钟，在140 — 16(TC加热30分钟，置紫外灯 (365)下检视，氯霉素滴眼液样品色谱中。在与标准品溶液色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点。 实施例3:
取氯霉素滴眼液l毫升，过滤，取滤清液10"1，注入高效液相色仪，记录
色谱图，色谱条件为以十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相为 体积比为50: 50的甲醇一0.4%磷酸溶液，检测波长360nm;另取槲皮素对照品、山奈素对照品、异鼠李素对照品适量，同法测量，以 外标法计算银杏提取物中槲皮素、山奈素、异鼠李素的含量，以此来确定银杏 提取物的含量。
实施例4:
取氯霉素滴眼液l毫升，过滤，取滤清液10ul，注入高效液相色仪，记录 色谱图，色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相为 体积比为25: 10: 65的甲醇一四氢呋喃一水溶液，蒸发光散射检测器检测，检 测波长360nm;
另取银杏内酯A，银杏内酯B，银杏内酯C，及白果内酯对照品适量，同法 测量，以外标两点法对数方程计算银杏提取物中银杏内酯A，银杏内酯B，银杏 内酯C，及白果内酯的含量以此来确定银杏提取物的含量。
实施例5:
a) 混合菌种的制备
取多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa) CGMCC 1.794、粘质沙雷氏菌 (Serratiamarcescens) CGMCC 1.203、大肠埃希氏菌(Escherichiacoli) CGMCC 1.1575、其扩大培养液混合的体积比为6: 1: 5。(每毫升液体中含有2Xl(y个 活性菌体以上)。
b) 将混合菌种按照体积比1: 50用水稀释，将稀释好的混合菌种按照氯霉 素滴眼液样品体积的W(V/V)加入，在30—35'C保温搅拌30分钟，过滤黄色沉 淀，取滤清液2ml，作为氯霉素滴眼液样品，按实施例1的方法进行检测。
实施例6:
a)混合菌种的制备为
取多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa) CGMCC 1.794、粘质沙雷氏菌 (Serratiamarcescens) CGMCC 1.203、大肠埃希氏菌(Escherichia coli) CGMCC1.1575、其扩大培养液混合的体积比为1: 1: 1.5。(每毫升液体中含有2X107 个活性菌体以上)
b)将混合菌种按照体积比1: 50用水稀释，将稀释好的混合菌种按照氯霉
素滴眼液样品体积的P/。(V/V)加入，在30—35"C保温搅拌30分钟，过滤黄色沉 淀，取滤清液2ml，作为氯霉素滴眼液样品，按照实施例3进行检测。
实施例5与实施例1相比，荧光斑点更加清晰易辨。
实施例6与实施例3相比，没有氯霉素主峰。
上面结合实施例对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受 上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质 性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均 在本发明的保护范围之内。
权利要求
1、稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，包括中国药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，其特征在于在鉴别项中，增加银杏提取物的鉴别方法。
2、 根据权利要求1所述的稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在 于所述的银杏提取物的鉴别方法为黄酮醇苷的鉴别方法。
3、 根据权利要求1所述的稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在 于所述的银杏提取物的鉴别方法为萜类内酯的鉴别方法。
4、 根据权利要2所述的稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于: 在含量测定项中，增加银杏提取物含量测定方法。
5、 根据权利要4所述的稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于.-所述的银杏提取物的含量测定方法为高效液相色谱法。
6、 根据权利要5所述的稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于 在氯霉素滴眼液检测方法的鉴别项中增加高效液相色谱鉴别方法，具体为在 含量测定项下的氯霉素滴眼液的主峰保留时间应与槲皮素、山奈素、异鼠李素、银杏内酯A，银杏内酯B，银杏内酯C，及白果内酯的保留时间一致。
7、 根据权利要求2所述的稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于-在鉴别反应中增加预处理步骤，所述的预处理步骤为取氯霉素滴眼液， 加入混合菌种，在30—35"C保温搅拌不小于30分钟，过滤沉淀，即可，氯霉素 滴眼液与混合菌种体积比为100: 0.5-5。
8、 根据权利要求7所述的稳定性好的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在 于所述的混合菌种为多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)CGMCC 1.794、 粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens) CGMCC 1.203、大肠埃希氏菌(Escherichia coli) CGMCC 1.1575、其扩大培养液混合的体积比为6-10: 1-10: 5-15。
9、 根据权利要求2所述的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于所述的氯霉素的标示量为85 — 115%。
10、根据权利要求2所述的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于在中国药典的氯霉素滴眼液的检测项目中增加有效期项，并将有效期定为2年。
全文摘要
本发明公开了稳定性好氯霉素滴眼液的检测方法，包括中国药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，在鉴别项中，增加了银杏提取物的鉴别方法。本发明与现有技术相比，将氯霉素滴眼液中对有效期有影响的银杏提取物检测出来，从而使氯霉素滴眼液的有效期能够达到2年以上，有利于氯霉素滴眼液的检测标准统一，便于厂家的生产、销售，以及消费者使用。
文档编号G01N33/15GK101183095SQ20071019225
公开日2008年5月21日 申请日期2007年12月24日 优先权日2007年12月24日
发明者南 方 申请人:南 方