Adam9基因对于腺样囊性癌的重要性的制作方法

专利名称：：Adam9基因对于腺样囊性癌的重要性的制作方法
技术领域：
：本发明涉及作为癌症指示基因表达的检测，涉及一种防止临床常见的口腔涎腺恶性肿瘤——腺样囊性癌转移的方法，具体地说是采用免疫学手段检测肿瘤的生物标志物以预测肿瘤转移潜能，并且采用基因沉默技术抑制肿瘤细胞中的转移相关基因，从而逆转肿瘤细胞转移特性的方法。
背景技术：
：腺样囊性癌是恶性程度较高的涎腺上皮性肿瘤，好发于腮腺、颌下腺、舌下腺以及腭腺等小涎腺，具有局部侵袭性强、血行性转移率高、长期预后较差等典型临床特性，局部浸润和远处转移是患者术后复发和死亡的主要原因。深入研究其侵袭、转移机制对患者预后的评价及治疗方案的制定具有重要意义。目前，有一些文献报道采用某些药物千预手段可以在动物实验中抑制涎腺腺样囊性癌的转移，也有一些文献报道了某些基因的过度表达与涎腺腺样囊性癌的转移生物学行为有关。现有文献报道采用的药物干预手段可以在体内外实验中一定程度地抑制涎腺腺样囊性癌的转移，但是这些研究对于药物作用的靶分子以及作用机制并没有很好地阐明。同样，尽管许多文献报道了一些基因的过度表达与涎腺腺样囊性癌的转移生物学行为有关，但众所周知，肿瘤转移发生是各种原因导致多基因突变累积和相互作用形成的基因网络调控的结果，大量下游基因都可能在一些关键基因变化的影响下出现异常表达，如果针对这些基因进行干预很难达到有效逆转肿瘤转移特性的效果，只有寻找到信号通路中的关键因子才可能对肿瘤转移的分子机制进行阐明，只有针对性地对于这些关键基因进行特异性地干预，才能安全、有效地抑制肿瘤转移。因此，目前这些研究的局限性在于，对于涎腺腺样囊性癌转移的药物治疗缺少耙向针对性，没有理想的、有效的治疗靶标和治疗手段。
发明内容本发明涉及作为特定癌症表型指示因子的基因表达水平的检测。本发明的基础部分在于这样一种现象，即ADAM9基因表达水平的升高表明是侵袭性的癌症表型，并且细胞的迁移性和/或移动性增强。侵袭性表型的非限定性例子包括原发性肿瘤块扩展到周围组织，其细胞作为转移瘤的一部分侵入到不同类型的组织内。在某些实施方式中，本发明适用于人，如患有或疑似患有癌症的人。在某些特殊实施方式中，本发明适用于腺样囊性癌对象。在第一方面，本发明提供了通过确定ADAM9基因表达水平升高或高于正常值从而将一个或多个细胞鉴定或分类为侵袭性和/或迁移性潜能升高的方法。通过与ADAM9表达的其它合适测量值相比较来确定ADAM9的表达水平是否升高。其中包括与其它对象或一群这类对象同一类型的癌细胞内ADAM9的表达水平相比较。在某些实施方式中，对象是患有同一种癌症但未发生癌症转移或复发的一群人。通过对这类对象或这类对象群的样品，如固定的样品，进行回顾性分析就可以很容易地完成这项工作。还可以与未发生转移或癌症复发的对象的细胞样品内表达水平的ADAM9表达水平数据库来比较。另外一种比较方法是与ADAM9表达的阈值水平来比较，在该水平或该水平以上表明转移、侵袭和/或迁移的可能性增加。因此，本发明可用于将一个或多个细胞鉴定或分类为侵袭前细胞，和/或侵袭和/或迁移潜能升高的细胞。可将这些细胞来源的对象鉴定为具有潜能升高的侵袭前癌细胞的对象。另外，本发明可用于将一个或多个细胞鉴定为侵袭性细胞。在某些实施方式中，一个或多个细胞是得自于对象的原发癌细胞，如原发腺样囊性癌细胞。本发明的这一方面可用作原发癌细胞侵袭潜能或转移潜能的早期预测因子或指示因子。它还可用作癌症复发可能的预测因子或指示因子，如癌症还未复发的对象。复发可能是未检测到的转移或微小转移的结果，这些转移在后来被确定为癌症复发，不论是局部的、区域的，还是远端的。在另一方面，检测ADAM9的表达水平可与结节状况联合作为侵袭或转移潜能的组合预测因子。因此，本发明可用于确定(1)至少有一处原发癌的对象是否患有向一个或多个淋巴结扩散的癌症，以及2)原发癌一个或多个细胞内ADAM9的表达水平。如果一个对象是"淋巴结阴性的"(淋巴结处未检测到癌症〉，并且癌细胞内的ADAM9表达水平很高或者高于正常值，那么这种癌细胞被鉴定为具有升高的侵袭、迁移和/或转移潜能。但是，本发明并不限于这一种组合评价方法，因为"结节阳性"与AMM9表达水平升高的组合也预示侵袭、迁移和/或转移的潜能。如上面和本文所阐释，鉴定样品的一个或多个细胞内ADAM9基因的表达水平有升高或位于正常值以上可用于确定该细胞和/或样品具有侵袭性表型。标本可以是患有癌症或疑似患有癌症，如腺样囊性癌的对象来源的生物标本所包含的细胞。细胞还可以是被鉴定为非典型性细胞或癌前细胞。在某些实施方式中，标本来自于患有或疑似患有癌症如腺样囊性癌的对象。在某些情况下，癌症的存在是己知的，本发明用于确定这种癌症，如腺样囊性癌，是否具有侵袭性表型。在其它实施方式中，利用外科手术，如某些腺样囊性癌对象所进行的手术，所得到的含细胞的样品通过本发明的方法来确定腺样囊性癌是否具有侵袭性表型，从而判断转移(局部、区域或远端)的可能性或潜能是否升高。本发明的方法包括通过测定ADAM9基因相应的表达的核酸分子或表达的多肽分子来确定ADAM9基因的表达水平。因此，基于检测核酸分子或多肽分子的转录或翻译水平以及稳定性的测定方法可用于实现本发明。本发明可通过检测转录自ADAM9基因的任何序列的表达来实现。因此，本发明可通过检测表达自ADAM9基因的核酸或多肽部分来实施。简言之，利用杂交介导的检测方法(例如，但不限于以微芯片为基础的技术)或定量PCR介导的检测方法(例如，但不限于实时PCR和逆转录酶PCR)可检测全部或部分ADAM9转录子的表达，这两种检测方法都是非限定性的例子。相应的，通过检测全长或部分ADAM9核酸和/或多肽序列以及本领域所熟知的或在本领域的知识范围内的序列的表达可实施本发明。在另外一个方面，本文所描述的方法可用于将样品中的一个或多个细胞鉴定或分类为侵袭和/或迁移潜能未升高的细胞，其根据是ADAM9基因的表达水平未升高或者与同一类型的正常细胞和/或组织的表达水平相比未升高。这类方法也可用于将一个或多个细胞鉴定为非侵袭性的或侵袭前的细胞，因而其侵袭和/或迁移潜能未升高。在另外一个方面，本发明的方法可用于癌症对象的辅助诊断和治疗。本文所描述的方法可用于建立一种诊断对象体内的癌症是侵袭性的或者是非侵袭性的方法，如侵袭性的或非侵袭性的腺样囊性癌，其中含细胞的样品取自该对象，用于测定ADAM9的表达水平。在非侵袭性分类的腺样囊性癌中，本发明的方法可用于建立一种侵袭和/或迁移潜能升高的侵袭前癌症如侵袭前腺样囊性癌的诊断方法。更常见的是，本发明的方法用于诊断或鉴定细胞，其中包括将未知转移潜能是否升高的癌细胞或癌前细胞鉴定为转移前细胞和/或转移潜能升高的细胞。ADAM9表达水平的测定可作为分析含细胞样品或标本的标准临床病理学方法所使用的免疫组化技术(和/或荧光原位杂交)的一部分来进行。因而可根据诊断结果选择合适的治疗措施，并且根据ADAM9表达水平的检测情况来使用这些治疗措施。根据本发明所描述的含细胞样品中ADAM9表达水平的检测结果，本发明的方法可用于确认或否定对对象所作出的其癌症为侵袭性癌症的诊断结果，例如侵袭性腺样囊性癌或转移潜能升高的腺样囊性癌。确认或否定可以是对基于标准临床病理学技术(未检测ADAM9的表达)，如对对象的含细胞样品的免疫组化检査和视检，而作出的初步诊断结果的确认或否定。因此，本发明提供了一种改进的方法，该方法在参考根据以前的方法所作出的癌症侵袭性的测定结果的基础上能够获得更准确的诊断结果。根据诊断结果，这种诊断结果的依据全部或部分来自于ADAM9基因的表达水平，对治疗措施进行的选择包括避免采用或去除不可能带来益处的某些治疗措施。其中一个非限定性的例子是，将对象准确诊断为患有侵袭性癌症或具有转移潜能的癌症而不是非侵袭性癌症可为选择更积极的治疗措施而不是采用较保守的治疗措施使癌症更恶化提供支持。另外，对非侵袭性癌症的准确诊断可用于支持选择较保守的治疗措施，这样就可以使对象避免发生因采用更积极的治疗措施而带来的不适和不期望的副作用。在本发明的另一方面，本发明提供了根据本文所描述的ADAM9基因的表达水平来确定对象预后的方法。在这个方面，ADAM9的表达水平与癌症侵袭性的对应性和癌症侵袭性与对象预后或疾病结果相关的信息有关，因此，AMM9的表达水平可作为预后或疾病结局的指示因子。在非限定性例子中，预后和/或疾病结局包括预期寿命、经过不同的时间后癌症复发的可能性以及癌症侵袭和/或转移到对象其它组织或其它部位的可能性。本发明还提供了作为对象临床或医疗护理一部分的本发明的用途。其它临床方法包括基于本文所描述的ADAM9表达水平的检测结果来为对象提供医疗护理所涉及的那些方法。在某些实施方式中，这些方法与基于ADAM9表达水平而提供的诊断服务有关，其中涉及或不涉及对表达水平的意义或应用的解释。在某些实施方式中，提供本发明的诊断服务的方法可在确定需要该服务前进行。在其它实施方式中，这些方法包括在监测服务的执行情况时所采取的动作以及在要求或接受执行服务的赔偿时所采取的动作。对本发明的一个或多个实施方式的详细描述列于下文的附图和说明书中。从附图和详细描述以及权利要求中可以了解本发明的其它特征和优点。图1A是本发明实施例中ADAM9蛋白在涎腺腺样囊性癌淋巴结转移灶中的表达示意图IB是本发明实施例中ADAM9蛋白在涎腺腺样囊性癌原发灶中的表达示意图2是本发明实施例中ADAM9基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞株ACC-M、SACC-LM侵袭能力的影响的结果图3是本发明实施例中ADAM9基因沉默的亚细胞株和亲本细胞株体内实验性转移瘤形成能力的结果图。具体实施例方式现依据附图，对本发明做进一步的描述。本发明提供了确定细胞内ADAM9表达水平升高与侵袭和/或迁移特性的表型之间关系的方法，这些表型包括在患有原发癌的对象的其它组织或其它部位形成癌症的转移潜能表型。这种特性的非限定性例子包括细胞移动性和/或迁移性增强、穿过细胞外基质或基底膜的侵袭和/或迁移能力，如体内或在胶原存在的情况下的那些特性。这些特性还可以被认为是侵袭和/或转移的可能性升高，或者成为侵袭性瘤和/或转移瘤的能力。因此，本发明提供了第一方法用于将一个或多个样品细胞鉴定或分类成侵袭和/或迁移潜能升高的细胞，这是通过确定所述一个或多个细胞内ADAM9基因的表达水平来实现的，其中表达水平相对升高或位于正常水平之上说明所述一个或多个细胞的转移、侵袭和/或迁移潜能升高。ADAM9表达水平相对升高的量可通过与ADAM9的其它表达水平相比较而确定，如ADAM9在其它对象或对象群的细胞内的表达水平。这些细胞可以是非癌性细胞，也可以是癌细胞，其中包括那些可导致癌转移或侵袭的细胞或者那些不会导致癌转移或侵袭的细胞。当然，这种比较可在两种相同类型的组织之间进行,如腺样囊性癌对小涎腺组织。在某些实施方式中，是与其它对象或这种对象群的同一类型的癌细胞内的ADAM9表达水平相比较，其中同一类型的癌却不具有相同的转移、侵袭和/或转移表型，如本文所描述。利用对象的癌固定样品可以很容易地进行这种比较，其中对象的后继病程和临床结局是已知的。这种后继临床病史的非限定性例子包括转移或癌症复发。这种样品内的表达水平可被当作参考水平，新样品、试验样品或未知样品内的ADAM9表达水平可与之比较。这些参考表达水平可形成数据库，新样品、试验样品或未知样品内的表达水平与之比较。数据库也可包括后来未发生癌转移或复发的对象样品的参考表达水平。这些表达水平也可在实现本发明时用于和新样品、试验样品或未知样品内的ADAM9表达水平相比较，其中水平相同预示着可能产生相同的结果。在其它非限定性实施方式中，发生或未发生后继转移或癌症复发的对象的参考表达水平都可用于形成ADAM9表达水平的阈值，在这个阈值以上就表示存在转移、侵袭和/或迁移的可能性升高的情况。本发明提供了第二种方法用于将一个或多个样品细胞鉴定或分类成侵袭性的细胞，这是通过确定所述一个或多个细胞内ADAM9基因的表达水平来实现的，其中表达水平位于正常水平之上说明所述一个或多个细胞是侵袭性的。本发明提供了第三种方法用于将一个或多个样品细胞鉴定或分类成侵袭和/或迁移潜能未升高的细胞，其中包括在原发癌对象的其它组织或部位发育成癌的转移潜能表型，这是通过确定所述一个或多个细胞内ADAM9基因的表达水平来实现的，其中表达水平正常或位于正常水平之下说明所述一个或多个细胞的转移、侵袭和/或迁移潜能未升高。因此，通过与上述第一方法相结合，本发明提供了将一个或多个细胞鉴定或分类为具有转移到其它组织内的潜能的方法。这种方法包括确定所述一个或多个细胞内的ADAM9基因的表达水平，其中表达水平位于正常水平以上说明所述的一个或多个细胞的转移潜能升高，表达水平正常或位于正常水平之下说明转移的潜能未升高或者下降。本发明提供了第四种方法用于确定对象的预后，这是通过测定从所述对象获得的生物标本内的一个或多个细胞的ADAM9表达水平来实现的，其中表达水平位于正常水平以上说明所述对象发生侵袭性癌的可能上升，ADAM9表达水平正常或位于正常水平之下说明对象发生侵袭性癌的可能未上升。在一个相关方式中，本发明提供了预测对象预后或疾病结局的方法。这种方法包括确定所述对象来源的生物标本内的一个或多个细胞的ADAM9基因的表达水平，其中表达水平位于正常水平以上说明所述对象发生癌转移的可能上升、癌症复发的可能性升高或者预期寿命下降，ADAM9表达水平正常或位于正常水平之下说明所述对象不存在发生癌转移的可能上升、癌症复发的可能性升高或者预期寿命下降的情况。本发明还提供了利用预后或疾病结果确定对象治疗方案的方法。这种方法包括按照上面所描述的确定对象的预后或疾病结局，并且根据所述的预后或疾病结局来确定所述对象的治疗方案。治疗方案的选择包括避免或去除某些不可能有益的治疗措施。对于某些病例来说，这可能意味着具有转移潜能的癌症对象需要选择吏积极的治疗措施，而非侵袭性癌症对象却相反。对于另外一些病例来说，这可能意味着需要选择较保守的治疗措施，以避免对象发生不舒服和不期望的副作用，因为对象的癌症是非侵袭性的。在本发明的其它实施方式中，可以检査对象的结节状况，并和本文所描述的方法中的ADAM9表达水平一并加以考虑。因此，本发明包括含有评价对象结节状况的方法，其中无癌症的淋巴结状况结合正常水平以上的ADAM9表达用于指示所述的转移和/或侵袭或迁移潜能升高。正如技术人员所认识到的，侵袭性表型的一个例子是原发的(或起始的)肿瘤块扩散到周围组织内，不需要细胞从肿瘤块上脱离下来并侵入到器官的不同组织或不同部分。另外一个例子是癌细胞从器官的一部分扩散或转移到其它部分(或不同组织)。这需要癌细胞从其初始位置上离开并重新定位，然后形成一个或多个次级(或转移)瘤，这是转移过程的一部分。因此，侵袭性导管癌的细胞不需要是转移性的，因为他们如果没有必须的转移潜能几乎不可能突破导管环境进入到周围的小涎腺组织。但是，本发明能够根据ADAM9的表达将这种细胞鉴定为具有转移潜能的细胞。另外也和技术人员所熟知的一样，发生转移的细胞可能会，也可能不会保留进一步转移的潜能。因此，次级瘤或转移瘤的细胞其ADAM9的表达水平可能升高，也可能不升高，如本文所描述的。在某些实施方式，ADAM9表达的检测是在选自如下癌症的癌细胞上进行乳腺腺癌、宫颈腺癌、食管腺癌、胆囊腺癌、肺腺癌、胰腺腺癌、小肠-大肠腺癌、胃腺癌、星形细胞瘤、皮肤基底细胞癌、肝胆管癌、卵巢透明细胞腺癌、弥散性大B细胞淋巴瘤、睾丸胚胎性癌、子宫内膜样癌、尤因肉瘤、甲状腺滤泡状癌、胃肠道间质瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、胶质母细胞瘤、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤、肺大细胞癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、乳腺小叶癌、恶性纤维组织细胞瘤、甲状腺髓质癌、黑色素瘤、脑膜瘤、肺间皮瘤、卵巢粘液腺癌、肌纤维肉瘤、肠神经内分泌瘤、少突神经胶质瘤、骨肉瘤、甲状腺乳头状癌、嗜铬细胞瘤、肾细胞癌、横纹肌肉瘤睾丸精原细胞瘤、卵巢浆液性腺瘤、肺小细胞癌、宫颈鳞状上皮细胞癌、食管鳞状上皮细胞癌、喉头鳞状上皮细胞癌、肺鳞状上皮细胞癌、皮肤鳞状上皮细胞癌、滑膜肉瘤、T细胞淋巴瘤或膀胱移行上皮癌。在其它实施方式中，ADAM9表达的检测是在选自如下组织的细胞或癌细胞上进行肾上腺、膀胱、骨、脑、乳腺、宫颈、子宫内膜、食管、胆囊、肾、喉头、肝、肺、淋巴结、卵巢、胰腺、前列腺、皮肤、软组织、小肠/大肠、胃、睾丸、甲状腺或子宫。特别的是选自腮腺、颌下腺、舌下腺以及鄂腺等小涎腺。本发明的基础部分在于两个发现。第一个发现是ADAM9的表达在侵袭前的原发癌和侵袭性原发癌中升高。第二个发现是抑制ADAM9在ACC-M和SACC-LM细胞内的异位表达可抑制细胞迁移和侵袭，说明ADAM9的表达可促使肿瘤侵袭和转移。同样，本发明的测定方法可利用ADAM9序列表达水平相关的方法，只要该方法能定量地或定性地反映该序列的表达。在某些实施方式中，优选采用定量测定方法。确定转移、侵袭和/或迁移特性的能力是通过识别ADAM9表达水平的相关性而不是通过测定实际表达水平的测定形式来提供的。序列的特征鉴定包括而不限于用于编码(DNA)或表达(RNA)ADAM9序列或表位的独特核酸序列，其中的表位是ADAM9序列编码蛋白特异性的，或者具有该蛋白的活性。其它方法包括检测核酸扩增产物作为表达水平升高的指示因子，以及检测核酸的失活、缺失或甲基化作为表达水平降低的指标。换句话说，可通过测定负责ADAM9序列表达的DNA模板、用作中间物表达该序列的RNA、或该序列所表达的蛋白产物、以及该产物的蛋白水解片段中的一项或多项来实施本发明。这样，可通过检测这些DNA、RNA和蛋白质分子是否存在、存在的量、稳定性、或其降解(包括降解率)来实施本发明。当然，作为一个非限定性例子，任何ADAM9核酸分子的检测都可通过与探针序列的杂交来完成。另外，可测定ADAM9编码产物的功能或翻译后修饰，用作表达的指示因子。非限定性的例子包括测定ADAM9蛋白与一种或多种结合伙伴之间的相互作用、或者ADAM9多肽的共价修饰，例如而不限于磷酸化、糖基化或乙酰化。本领域技术人员需要了解的是，ADAM9表达水平的测定可用于将对象或患者至少定义为两类，如高于和低于表达水平，例如正常细胞的表达水平。特定的ADAM9序列与对象样品细胞所表达的序列之间的少量错配不会影响本发明的实施。这种错配存在的非限定性例子见于同一物种不同个体之间出现序列多态性的情况，例如人类内部的不同对象。知道了ADAM9序列(和由于少量错配而变异的序列)的表达与侵袭性和/或迁移表型之间的相关性，就完全了解了应该用含有适当细胞的样品通过测定表达来实施本发明。在某些实施方式中，本发明所使用的含细胞样品含有单一细胞或同源细胞群，该样品已经去除了因简单组织活检而污染的细胞，或者是从组织活检样品中分离或纯化出来的。这些细胞可以是任何来源的，其中包括而不限于有机体如人来源的含液体、含细胞或含组织的样品。其它非限定性的例子包括组织活检样品，如癌前组织活检样品或确诊的癌组织活检样品。这些细胞还可以是那些被鉴定为不典型细胞或癌前细胞，但是也可用于本发明中以鉴定本文所述的侵袭性表型的细胞。细胞的分离方法是本领域所熟知的，其中包括显微解剖、激光捕获显微解剖(LCM)或激光显微解剖(LMD)。另外，组织"切片"内未分离的细胞也可以使用。现在有许多可用于这种分析的方法，其中包括试验内的表达检测以测定样品内的基因总体或近似总体表达情况(例如，作为基因表达序型分析方法的一部分，如在微阵列上进行的基因表达序型分析)，或者特异性检测方法，如定量PCR(Q-PCR)或实时定量PCR。其它非限定性的检测技术包括那些以质谱为基础的技术。虽然主要就人腺样囊性癌描述了本发明，但是利用任何的人类癌症或任何的动物癌症也可以实现本发明。应用本发明时优选的动物是哺乳动物，尤其是那些对农业应用重要的哺乳动物(例如但不限于，牛、羊、马和其它"家畜")，以及人类的伴侣动物(例如但不限于狗和猫)。如本文所使用，"基因"是一种编码性质为RNA或蛋白质的不连续产物的多核苷酸。应当理解的是一个以上的多核苷酸可能编码一种不连续产物。该术语包括编码相同产物的基因的等位基因和基因多态性，或其功能相关(包括功能的获得、缺失或调节)类似物，这要根据染色体的位置和正常有丝分裂期间能否重组而定。术语"序列"或"基因序列"在这里是指由一系列核苷酸碱基构成的核酸分子或多核苷酸。该术语包括编码一种性质为RNA或蛋白质的不连续产物的一系列碱基(即"编码区")。应当理解的是，一个以上的多核苷酸可以编码同一个不连续产物。还应当理解的是，所述的ADAM9序列可存在等位基因和多态性，这些等位基因和多态性可用于实施本发明来鉴定所述ADAM9序列或其等位基因或多态性的表达水平。等位基因或多态性的鉴定部分依赖于染色体位置和有丝分裂期间的能否重组。术语"相关"或"相关性"或其等价形式指一种或多种基因的表达与一种生理表型或特性之间的关系。"多核苷酸"是任何长度的核苷酸，核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸，的聚合形式。该术语仅指分子的一级结构。因此，该术语包括双链和单链DNA和RNA，也包括已知类型的修饰，其中包括本领域己知的标记、甲基化、"加帽"用类似物取代一个或多个天然核苷酸以及核苷酸间的修饰如该多核苷酸的不带电荷的连接子(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)以及多核苷酸的非修饰形式。从广义上来说，术语"扩增"是指用DNA或RNA聚合酶催化产生的扩增产物。如本文所用，"扩增"一般是指产生多个拷贝的所需序列，特别是样品的序列的过程。"多拷贝"指至少2个拷贝。"拷贝"不一定指与模板序列完全互补或完全相同的序列。扩增mRNA的方法通常是本领域已知的。另一种可使用的方法是定量PCRf或Q-PCR)。另外，RNA可以其相应cDNA的形式通过本领域己知的方法直接标记。"相应的"是指一个核酸分子与另一个核酸分子共有相当数量的序列一致性。相当数量指至少95%，通常至少98%，更常见的是至少99%，序列一致性可用BLAST算法测定。"微阵列"是优选不连续区域组成的线性、二维或三维(和固相)阵列，各自具有在固相支持物表面形成的限定区域，所述固相支持物包括但不限于玻璃、塑料或合成膜。一个固相支持物表面上可被检测的固定的多核苷酸总数，确定了微阵列上不连续区域的密度，优选至少约50/cm2，更优选至少约100/cm2、约500/cm2，但是最好在约1，000/cm2以下。优选的是，该阵列含有总共不到约500个、约1000个、约1500个、约2000个、约2500个或约3000个固定的多核苷酸。如本文所用，DNA微阵列是安置在芯片或其它表面上的寡核苷酸或多核苷酸探针的阵列，用于杂交从样品扩增的或克隆的多核苷酸。由于各特定探针组在阵列中的位置是已知的，故样品多核苷酸的鉴别可根据它们与微阵列中特定位置的结合而确定。作为使用微阵列的任选方案，在实现本发明时可使用任何尺寸的阵列，其中包括在固相中将一个或多个位置安排成二维或三维排列以检测单个基因序列的表达。在某些实施方式中，本发明所使用的微阵列可通过光刻录技术(如在表面上从3'末端开始合成核酸探针)或通过合成核酸然后固定在固体表面上来制备。由于本发明依赖于对基因表达的鉴定，因此本发明的一个实施方式包括通过使样品细胞中的mRNA或其扩增或克隆产物与特定ADAM9序列的独特多核苷酸的杂交来测定(所述基因的)表达。此类型的优选多核苷酸包含在其它基因序列中未发现的ADAM9序列的至少约16个、约18个、约20个、约22个、约24个、约26个、约28个、约30个或约32个连续碱基对。如前面句子所用的，术语"约"指比所述数值多1或少1。更优选的是包含在其它基因序列中未发现的基因序列至少或约50个、至少或约100个、至少或约150个、至少或约200个、至少或约250个、至少或约300个、至少或约350个、至少或约400个、至少或约450个、或者至少或约500个连续碱基对的多核苷酸。前面句子所用的术语"约"指比所述数值多或少10%。当然，更长的多核苷酸可以包含不影响与样品中核酸杂交的小量错配(例如，通过存在的突变，这种多核苷酸还指能够与本文所述的基因序列或其独特片段杂交的多核苷酸探针。可标记这种多核苷酸以便于其检测。优选地，序列是基因编码的mRNA序列、这种mRNA相应的cDNA和/或这种序列的扩增形式。在本发明优选的实施方式中，可将多核苷酸探针固定在可定位该探针的阵列、其它固相支持装置或各个点中。在本发明的另一个实施方式中，可扩增和检测ADAM9序列的全部或部分序列，使用的方法如聚合酶链式反应(PCR)和其变化形式，例如但不限于定量PCR(Q-PCR)、逆转录PCR(RT-PCR)和实时PCR(包括测定样品中各个序列的mRNA拷贝的初始量)，任选实时RT-PCR或实时Q-PCR。这些方法采用与ADAM9序列的一部分互补的1种或2种引物，利用引物引发核酸合成。新合成的核酸还可以被标记，并被直接检测或通过与本发明的多核苷酸杂交来检测。新合成的核酸可在允许它们杂交的条件下与本发明的多核苷酸(包括序列)接触。检测被表达的核酸表达水平的其它方法包括RNA酶保护试验，其中包括液相杂交和细胞原位杂交。另外，在本发明另一个实施方式中，可利用一种或多种抗体来分析目的细胞样品中表达的蛋白来检测ADAM9的表达，其中的抗体是对象所述细胞样品或体液中的不同AMM9基因的产物(蛋白质)或其蛋白水解片段的一个或多个表位特异性的抗体。细胞样品可以是从对象中富集的小涎腺癌细胞，例如通过采用抗细胞表面标志的标记抗体再用荧光激活细胞分选术(FACS)来富集。优选标记该抗体，使其在结合基因产物后易于被检测。适用于实现本发明的检测方法包括而不限于对含细胞的样品或组织进行免疫组织化学分析、酶联免疫吸附试验(ELISA)，其中包括对含有细胞的组织或血液样品进行抗体夹心法试验、质谱分析和免疫-PCR。术语"标记物"或"标记的"是指能产生表明标记分子存在的可检测信号的一种成分。合适的标记物包括放射性同位素、核苷酸生色团、酶、底物、荧光分子、化学发光分子、磁性粒子、生物发光基团等。因此，标记物是可用光谱、光化学、生化、免疫化学、电学、光学或化学方法检测的任何成分。术语"支持物"指常规支持物，例如小珠、颗粒、浸渍片、纤维、滤膜、薄膜和甲硅烷或硅酸盐支持物如载玻片。另外，"样品"可通过侵入性方法收集，其中包括而不限于手术组织活检。用于本发明的含细胞样品的非限定性例子包括液体样品，如血液、血清或血浆；富含上皮细胞、内皮细胞、循环的肿瘤细胞或其它任何目的细胞的样品；含细胞和/或蛋白质、DNA或RNA的液体，如尿液或膀胱冲洗液，或含细胞团或其分散物的液体；宫颈刮屑(如巴氏涂片)；子宫内膜涂片；粪便；口颊细胞；含细胞的抽吸物，如从身体的某个部位如肿瘤块中抽吸的液体；含细胞的剥脱物；以及组织样品，如细针组织吸取物、针吸活组织。在某些实施方式中，样品是对象或患者的原发(初始)癌的样品。肿瘤可以是雌激素受体阳性的。"表达"和"基因表达"包括核酸物质的转录和/或翻译。如本文所用，术语"包括"和其同源词以它们所含的意义使用；即等同于术语"包含"及其对应的同源词。"允许"某事件发生的条件，或"适合"某事件如杂交、链延伸等发生的条件，或"适当"的条件是指不阻止这类事件发生的条件。因此，这些条件可允许、提高、促进和/或有助于该事件的发生。本领域已知的和本文所述的这种条件取决于，例如，核苷酸序列的性质、温度和缓冲条件。这些条件也取决于期望发生何种事件，如杂交、切割、链延长或转录。如本文所用，序列"突变"是指本文所述感兴趣基因序列与参比序列相比发生的任何序列变化。序列突变包括由于如取代、缺失或插入等机制所致的单个核苷酸的变化或序列中一个以上核苷酸的改变。单核苷酸多态性(SNP)也是本文所用的一种序列突变。由于本发明依据的是基因表达的相对水平，因此在实施本发明时也可测定本文所述基因非编码区中的突变。"检测"包括任何检测方法，包括基因表达及其变化的直接和间接检测。例如，可以直接或间接观察到产物"可检测地增加"，该术语表示任何增加。可以直接或间接观察到产物"可检测地减少"，该术语表示任何减少(包括缺乏可检测信号)。根据与正常细胞相比的百分变化或倍数变化，ADAM9序列表达的升高或降低用下列术语表示。升高可以是超过正常细胞表达水平的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180或200%。另外，成倍增加可以是高于正常细胞表达水平的1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10倍。降低可以是低于正常细胞表达水平的10、20、30、40、50、55、60、65、70、75、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、99或100%。除非另有说明，本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域普通技术人员通常所理解的意义相同的意义。为了在本发明实施过程中测定ADAM9的表达水平(升高或降低)，可采用本领域已知的任何方法。在本发明的一个优选实施方式中，利用了基于RNA检测所得到的表达数据，该RNA可与本文鉴定和描述的基因杂交。这不难通过本领域已知的或被认为是等价形式的RNA检测或扩增+检测方法进行，例如，但不限于，检测RNA稳定化序列或RNA失稳序列是否存在的方法。另外，还可使用基于DNA状态的检测结果所得到的表达数据。测定ADAM9基因是否甲基化或缺失也可用于检测水平降低的表达。测定所得到的ADAM9启动子区的状态可以指示ADAM9序列的表达水平降低。一个非限定性的例子是启动子区所见到的序列甲基化状态。相反，扩增的ADAM9基因的检测可用于表达水平升高与特定腺样囊性癌结局相关的基因。这些方法不难通过本领域己知的PCR、荧光原位杂交(FISH)和染色体原位杂交(CISH)方法进行。基于ADAM9蛋白水平或活性的存在、增加或降低的检测结果所得到的表达数据也可以使用。检测可通过本领域已知的并被认为是适合检测蛋白质的以免疫组织化学(IHC)、体液(其中在体液，例如而不限于血液，中发现有ADAM9多肽或其片段1、抗体(包括抗己有蛋白质的自身抗体)、脱落细胞(来自癌症)、质谱、和影像(包括使用标记的配基)为基础的方法来进行。当癌细胞来源未知时，以抗体和影像为基础的方法还适用于在通过使用非侵入性方法(例如导管灌洗或细针抽吸)获得的细胞确诊癌症之后给肿瘤定位。标记的抗体或配基可用于定位对象体内的癌或帮助从体液中富集脱落的癌细胞。用于这种检测方法的抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体，其中，多克隆抗体可以分离白存在该抗体的天然资源，单克隆抗体包括用ADAM9多肽或其片段作为抗原制备的抗体。这些抗体及其片段(包括但不限于Fab片段)由于能够特异性结合ADAM9多肽而非其它多肽并产生可检测信号，因此可用于检测或诊断非正常细胞或癌细胞。具有相同能力的重组、合成和杂合抗体也可用于实现本发明。通过用ADAM9多肽或其片段免疫接种可以很容易地制备抗体，多克隆血清也可用于实现本发明以抗体为基础的检测方法是本领域所熟知的，非限定性的例子包括夹心法和ELISA试验以及蛋白质印迹和以流式细胞术为基础的检测方法。这些方法所分析的样品包括含有ADAM9多肽的任何样品。非限定性的例子包括含有小涎腺细胞和细胞成分的那些样品，以及含有多肽的体液(非限定性的例子包括血液、血清、唾液、淋巴液、以及粘膜液和其它细胞分泌物)。利用以核酸为基础的方法来测定表达的优选实施方式是将一个或多个ADAM9序列固定在固体支持物上，其中包括而不限于，本领域已知的以阵列技术为基础的固相底物。另外，也可采用本领域已知的以溶液为基础的表达测定方法。固定的ADAM9基因可以是ADAM9独特的或特异的多核苷酸形式，因此该多核苷酸能够与ADAM9DNA或RNA杂交。这些多核苷酸可以是全长的ADAM9基因，也可以是该基因的短序列(通过序列5'末端或3'末端的缺失比本领域已知的全长序列至少短一个核苷酸)，这种短序列可以选择被间断(例如，通过错配或插入了不互补的碱基对)程度最小的，这样就不会影响与ADAM9相应的DNA或RNA杂交。所用多核苷酸优选从基因的3，端开始，例如从基因或表达序列的聚腺苷酸信号或聚腺苷酸化位点开始长约350、约300、约250、约200、约150、约100或约50个核苷酸以内。也可使用相对于本文所述基因的序列来说含有突变的多核苷酸，只要该突变的存在仍然能够实现杂交并产生可检测的信号就可以。可利用固定的ADAM9基因来检测从小涎腺细胞样品制备的核酸样品的状态，以预测该样品的对象(例如，样品来源于该对象)结局未知的预后，或者证实该样品的对象结局已确定的结果。这些细胞可得自ER+或ER-腺样囊性癌对象，但这并不意味着限制本发明。在合适的条件下，只需要固定的多核苷酸就足以与得自样品的相应核酸分子特异性杂交。如本领域技术人员将理解的那样，某些ADAM9序列包含对本文所述序列的独特性无贡献的3'聚腺苷酸(或互补链上的聚胸苷酸)延伸链。因此，可使用缺少3'聚腺苷酸(或聚胸苷酸)延伸链的序列来实施本发明。所述序列的独特性是指只在该核酸中发现了序列的一部分或全部，包括在其3'非翻译区部分发现的序列。用于实现本发明的优选独特序列是ADAM9的共有序列，这样，独特序列就可用于检测多种个体中的表达，而不仅仅是一些个体中存在的多态性的特异性序列。另外，也可以使用对某个体或某个亚群独特的序列。优选的独特序列具有本文所讨论的本发明的多核苷酸的长度。在本发明特别优选的实施方式中，在实施本发明时，使用含有存在于ADAM9序列3'非翻译区和/或非编码区上的序列的多核苷酸来检测癌细胞或腺样囊性癌细胞内的表达水平。这种多核苷酸还可以包含ADAM9序列编码区3'部分所发现的序列。包含编码区和3'非编码区序列组合的多核苷酸优选具有连续排列的序列，并且未插入异源序列。另外，可利用具有ADAM9序列的5'非翻译区和/或非编码区上存在的序列的多核苷酸来实施本发明，以检测癌细胞或腺样囊性癌细胞内的表达水平。这种多核苷酸还可以包含编码区5，部分所发现的序列。包含编码区和5'非编码区序列组合的多核苷酸优选具有连续排列的序列，并且未插入异源序列。也可用ADAM9编码区所存在的序列来实施本发明。优选的多核苷酸包含从3'或5'非翻译区和/或非编码区开始的含至少约16、至少约18、至少约20、至少约22、至少约24、至少约26、至少约28、至少约30、至少约32、至少约34、至少约36、至少约38、至少约40、至少约42、至少约44或至少约46个连续核苷酸的序列。上句中使用的术语"约"是指所述数值加l或减l。更优选的是包含至少或约50、至少或约100、至少或约150、至少或约200、至少或约250、至少或约300、至少或约350、至少或约400个连续核苷酸的序列的多核苷酸。上句中使用的术语"约"是指所述数值加或减10%。从本发明的多核苷酸中所出现的ADAM9编码区3'或5'末端开始的序列所具有的长度与上面所描述的那些序列相同，除非它们受编码区天然长度的限制。编码区的3'端可包括多达3'编码区一半的序列。相反的，编码区5'端可包括多达5'编码区一半的序列。当然，也可使用上述序列、或编码区和包含其一部分的多核苷酸的完整序列。在本发明的另一个实施方式中，可使用包含ADAM9序列5'和/或3'端核苷酸缺失的多核苷酸。缺失优选从5'和/或3'端开始缺失1—5、5-10、10—15、15—20、20-25、25.30、30-35、35-40、40-45、45.50、50.60、60.70、70-80、80—90、90-100、100一125、125.150、150.175或175.200个核苷酸，虽然缺失的长度天然地受限于序列的长度以及能够使用多核苷酸来检测表达水平的要求。得自AMM9序列3'端的本发明的其它多核苷酸包含用于定量PCR的引物序列，还可以含有探针序列。优选的引物和探针是那些能扩增距离基因或表达的序列的聚腺苷酸信号或聚腺苷酸化位点不到约350、约300、约250、约200、约150、约100、或约50个核苷酸的区域的引物和探针。其它可用于实施本发明的多核苷酸包括与ADAM9序列具有充分同源性从而可以通过杂交技术来检测其表达的那些多核苷酸。这种多核苷酸优选与本文所述的ADAM9序列具有约或95%、约或96%、约或97%、约或98%、或约或99%的一致性。一致性可用如上所述的BLAST算法测定。根据多核苷酸在约30—50Xv/v的甲酰胺、0.01.0.15M的杂交用盐浓度、约0.01.0.15M的洗涤盐浓度、约55—65。C或更高温度的严谨条件或与其相当的条件下，与本发明的多核苷酸能够杂交的情况，本文还描述了可用于实现本发明的其它多核苷酸。在本发明的另一个实施方式中，提供了包含人ADAM9序列的单链或双链的单链核酸分子群作为探针，这样所述核酸分子群的至少一部分可以和从癌细胞如腺样囊性癌细胞的RNA定量扩增得到单链或双链核酸分子杂交。该核酸分子群可以只是人ADAM9序列的反义链，这样腺样囊性癌细胞的或从腺样囊性癌细胞扩增的反义链分子可与所述群的一部分杂交。与包含正常腺样囊性细胞的互补ADAM9序列的核酸分子表达(或扩增)量相比，该群优选包含充分过量的所述单链或双链的人ADAM9序列。这种过量条件可使腺样囊性癌细胞中核酸的表达量增加时其增量可以被很容易地检测出来。本文所描述的核酸分子群也能与ADAM9序列杂交，其中ADAM9序列所含有的核酸分子水平至少是正常细胞核酸分子两倍。在上述实施方式中，核酸分子可以是从癌细胞或腺样囊性癌细胞定量扩增得到的核酸分子，因而可反映所述细胞表达的量。优选将核酸分子群固定在固相支持物上，可以选白固定在微阵列上的形式。一部分核酸分子群优先与通过RNA扩增而从非正常或异常(小涎腺)细胞中扩增出的核酸分子杂交。扩增出的RNA可以是癌细胞或腺样囊性癌细胞产生的RNA，只要所用的扩增方法是关于含ADAM9的序列的定量扩增方法。在其它实施方式中，得自癌细胞样品的核酸优选通过使用合适的引物扩增，使得只扩增ADAM9序列以减少细胞所表达的其它基因所产生的背景信号造成的污染。另外，当同时分析其它基因或所使用的细胞很少(或一个细胞)时，可在与固定的多核苷酸杂交之前总体扩增得自样品的核酸。当然，也可以不扩增，而用本领域已知的方法直接标记和使用RNA、或其cDNA对应物。可以许多不同的方式应用本文所描述的试验实施方式以鉴定或检测侵袭性癌症。在一些病例中，这将体现为对已经完成作为初步筛选的物理检查的患者的第二次筛选。如果初次筛选为阳性，则经后续的细针吸取活组织、导管灌洗、细针抽吸或其它类似的最小侵入性方法提供样品，用于上述试验实施方式。本发明尤其适合与非侵入性方法如导管灌洗或细针抽吸联用，来制备小涎腺细胞样品。本发明提供了一套更客观的标准，以ADAM9表达水平的形式，来区分(或描绘)(小涎腺)癌结局之间的差异。在本发明特别优选的实施方式中，根据癌症是否是侵袭性的结果，利用这些试验来区分好的和差的结局。在约10、约20、约30、约40、约50、约60、约70、约80、约90、约100或约150个月后进行比较以区分结局之间的差异。虽然好的和差的存活结局是通过相互比较而得出的相对概念，但是，"好"的结局可视作手术介入切除小涎腺癌肿瘤约60个月后存活率高于50%。"好"的结局也可以是手术介入约60个月后存活率高于约60%、约70%、约80%或约90%。"差"的结局可视作手术介入切除小涎腺癌肿瘤约60个月后存活率为50%或更低。"差"的结局也可以是手术介入约40个月后存活率为约60%或更低，或约20个月后存活率为约80%或更低。在本发明的一个实施方式中，小涎腺癌细胞样品的分离和分析按如下过程进行(1)对患者进行导管灌洗或其它非侵入性或最小侵入性方法以获取样品。(2)制备样品并将其涂覆在载玻片上。应注意，导管灌洗可导致在进行细胞学检査时观察到细胞簇。'(3)病理学家或图像分析软件扫描样品以观察是否存在不典型细胞。(4)如果观察到不典型细胞，则收集这些细胞(例如，通过显微解剖法，如LCM)。(5)从收集的细胞内提取RNA。(6)直接测定RNA，或者将RNA转化为cDNA或扩增后，检测ADAM9序列的表达。在检査到有可触摸病损，然后用细针抽吸或细针吸取活检小涎腺细胞时，上述讨论也是适用的。平铺这些细胞，由病理学家或用可选择细胞的自动成像系统进行观察以分析这些细胞。然而，本发明还可使用实体组织活检样品，其中包括作为冷冻标本或FFPE(甲醛固定，石蜡包埋)标本储藏的那些样品。另外，本发明也可采集并使用新鲜的或固定的样品。作为另一个非限定性的例子，可收集和制备实体组织活检样品用于肉眼观察，然后测定本文所鉴定的一个或多个基因的表达以确定(小涎腺)癌的结局。作为另一个非限定性的例子，可收集和制备实体组织活检样品用于肉眼观察，然后测定ADAM9的表达。一个优选方法是利用与多核苷酸或蛋白质鉴定探针进行原位杂交以分析ADAM9的表达。固定样品的非限定性例子包括用福尔马林或甲醛固定的样品(包括FFPE样品)、用Boudin试剂、glutaldehyde、丙酮、乙醇或其它固定剂，如用于固定细胞或组织样品进行免疫组化(IHC)的那些固定剂，固定的样品。其它的例子包括可沉淀细胞相关核酸和/或蛋白质的固定剂。在本发明的某些用途中，样品用标准的病理学技术，例如而不限于以免疫组织化学为基础的测定方法，是无法分类的。在另外一个方法中，实体组织活检样品可用于提取分子，然后分析ADAM9的表达。这样就可能不要求只观察和收集癌细胞或怀疑为癌性细胞的细胞了。当然，这种方法可加以改动，使那些只有经过阳性筛选的细胞才被收集并用于提取分析用的分子。在FFPE样品的例子中，收获细胞后要按照本文所描述的方法进行RNA提取、扩增和检测。本发明提供的方法还可以全部或部分自动化。本发明的第四方面提供了与临床活动相关的本发明的用途。本发明的材料和方法适于按照熟知的方法制备试剂盒。因此，本发明提供了装有用于检测ADAM9序列表达的试剂(非限定性的例子如本文所述的多核苷酸和/或抗体)的试剂盒。这种试剂盒还可以包含所述鉴定试剂或关于它们在本发明方法中如何使用的标签或说明书。这种试剂盒包含容器，每个容器装有一种或多种本发明中所使用的不同试剂(通常为浓缩形式)，例如包括，预制的微阵列、缓冲液、合适的核苷三磷酸(例如，dATP、dCTP、dGTP和dTTP;或rATP、rCTP、rGTP和UTP)、逆转录酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶和一种或多种本发明的引物复合物(例如，连接到可与RNA聚合酶反应的启动子上的合适长度的聚(T)或随机引物)。试剂盒通常还包括一套说明书。现在已从总体上描述了本发明，通过参考以说明形式提供的以下实施例将更容易地理解本发明，除非另有说明，阐述这些实施例不意味着对本发明的限制。实施例lADAM9蛋白在腺样囊性癌原发灶及转移灶中的表达采用免疫组化SP法，DAB显色。主要试剂包括鼠抗人ADAM9单克隆抗体(BD公司)、兔抗人ADAM10多克隆抗体(Calbiochem公司)。以PBS代替一抗作为阴性对照。结果以半定量的方式判断。阴性(一)阳性细胞<30%;阳性(+):阳性细胞30%60%;强阳性(++):阳性细胞>60%。阳性及强阳性结果判定为免疫组化染色阳性。在15例腺样囊性癌淋巴结转移灶组织中，有12例存在ADAM9蛋白的阳性表达(图1A);而在相应的原发肿瘤组织中仅有5例出现ADAM9蛋白的表达(图1B)。结果显示，ADAM9蛋白在腺样囊性癌淋巴结转移灶中比原发灶明显高表达。经Fisher，s确切概率比较分析有显著的统计学差异(P=0.025)。实施例2ADAM9基因沉默的腺样囊性癌亚细胞株的建立及验证计算机软件辅助设计的ADAM9RNA干扰序列为:_目的基因名称RNA干扰序列_A雇9GGCGGGAU猫UGUGUUUGdTdT测序证实ADAM9基因siRNA表达载体pSuper-ADAM9克隆准确。用Lipofectamine2000转染试剂将ADAM9基因siRNA表达质粒和空白质粒分别转染涎腺腺样囊性癌高转移潜能细胞系ACC-M细胞和SACC-LM细胞。G418筛选(300ng/ml)稳定转染克隆。稳定转染并且ADAM9基因被有效抑制的细胞株分别命名为ACC-M-A9和SACC-LM-A9，稳定转染空白质粒的细胞株命名为ACC-M-MOCK和SACC-LM-MOCK。实时定量PCR方法检测证实ACC-M-A9和SACC-LM-A9细胞与亲本细胞比较，各亚细胞株中目的基因抑制效率均大于90%，ACC-M-MOCK和SACC-LM-MOCK细胞与亲本细胞比较ADAM9基因表达没有改变。实时定量PCR测序引物为<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>实施例3ADAM9基因沉默的亚细胞株和亲本细胞株Transwell法体外侵袭能力检测将8mg/ml的Matrigel以50w1/孔包被Transwell小室底部，4。C风干。在使用前30min用50ul无血清RPMI1640培养液水化基底膜。胰酶消化细胞，无血清RPMI1640培养液调整密度为lX106/ml，每个Transwell板的上室分别加入200yl细胞悬液，同时向下室加入5%胎牛血清RPMI1640培养液600y1，每细胞组设3个复孔。置37°C、5%湿化〔02孵箱中培养24h后，擦去上室膜上细胞，倒置上室，甲醇固定，Giemsa染色，计数侵入滤膜的细胞数。共计数中央和四周各5个视野(X400)，取平均值。实验重复3次。体外实验结果显示，ACC-M-A9和SACC-LM-A9细胞，与亲本细胞ACC-M和SACC-LM比较，穿过模拟基底膜的肿瘤细胞数目分别下降了58.5%和70%(P〈0.01)，而ACC-M-MOCK和SACC-LM-MOCK细胞与亲本细胞比较，细胞侵袭能力无明显差异(图2)。实施例4ADAM9基因沉默的亚细胞株和亲本细胞株体内实验性转移瘤形成能力检测经裸小鼠尾静脉注入ACC-M-A9和SACC-LM-A9细胞，以及亲本细胞ACC-M和SACC-LM的单细胞悬液0.2ml(细胞总数106)。4周后，处死动物，解剖、分离肺组织，观察肺表面瘤结节数。请见图3，结果证实，与亲本细胞比较，ACC-M-A9和SACC-LM-A9细胞形成肺转移性瘤的能力明显下降(P〈0.01)。证实ADAM9基因沉默后可以显著降低涎腺腺样囊性癌细胞的肺转移能力。权利要求1.一种鉴定或分类一个或多个样品细胞转移到其它组织内的潜能的方法，所述方法包括确定所述一个或多个细胞内ADAM9基因的表达水平，其中表达水平相对升高说明所述的一个或多个细胞的转移潜能升高。2.—种鉴定或分类一个或多个样品细胞侵袭其它组织的潜能的方法，该方法包括确定所述一个或多个细胞内ADAM9基因的表达水平，其中表达水平相对升高说明所述的一个或多个细胞的侵袭潜能升高。3.如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述一个或多个样品细胞是对象或患者的原发性癌细胞，任选为腺样囊性癌细胞。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述癌症选自乳腺腺癌、宫颈腺癌、食管腺癌、胆囊腺癌、肺腺癌、胰腺腺癌、小肠-大肠腺癌、胃腺癌、星形细胞瘤、皮肤基底细胞癌、肝胆管癌、卵巢透明细胞腺癌、弥散性大B细胞淋巴瘤、睾丸胚胎性癌、子宫内膜样癌、尤因肉瘤、甲状腺滤泡状癌、胃肠道间质瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、胶质母细胞瘤、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤、肺大细胞癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、乳腺小叶癌、恶性纤维组织细胞瘤、甲状腺髓质癌、黑色素瘤、脑膜瘤、肺间皮瘤、卵巢粘液腺癌、肌纤维肉瘤、肠神经内分泌瘤、少突神经胶质瘤、骨肉瘤、甲状腺乳头状癌、嗜铬细胞瘤、肾细胞癌、横纹肌肉瘤睾丸精原细胞瘤、卵巢浆液性腺瘤、肺小细胞癌、宫颈鳞状上皮细胞癌、食管鳞状上皮细胞癌、喉头鳞状上皮细胞癌、肺鳞状上皮细胞癌、皮肤鳞状上皮细胞癌、滑膜肉瘤、T细胞淋巴瘤或膀胱移行上皮癌。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述癌症是选自如下组织的癌症肾上腺、膀胱、骨、脑、乳腺、宫颈、子宫内膜、食管、胆囊、肾、喉头、肝、肺、淋巴结、卵巢、胰腺、前列腺、皮肤、软组织、小肠/大肠、胃、睾丸、甲状腺或子宫，特别的是选自腮腺、颌下腺、舌下腺以及鄂腺等小涎腺。6.如权利要求l所述的方法，该方法还包括确定对象的淋巴结状况，其中淋巴结无癌症存在结合ADAM9表达处于正常水平之上用于指示所述的转移潜能的升高。7.如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述一个或多个细胞存在于得自对象的细胞生物样品中。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述样品是新鲜样品、冷冻样品或固定样品。9.如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述确定包括测定ADAM9mRNA的表达水平、ADAM9RNA干扰或ADAM9蛋白的表达水平。10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述确定包括通过使用定量PCR，包括逆转录酶PCR和实时PCR,测定mRNA表达。11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述确定包括通过使用微阵列测定mRNA表达。12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述确定包括通过检测表达的ADAM9序列的片段或表位来测定蛋白质表达。13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，表达正常或表达水平位于正常值之下说明转移的潜能未升高或转移的潜能下降。14.一种预测对象预后或疾病结局的方法，所述方法包括确定所述对象来源的生物样品的一个或多个细胞内ADAM9基因的表达水平，其中表达水平高于正常值则说明所述对象发生癌症转移的潜能升高、癌症复发的可能性增加或预期寿命下降，ADAM9的表达正常或表达水平位于正常值之下则说明不存在癌症转移潜能升高、癌症复发的可能性增加或预期寿命下降。15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述癌症复发选白局部复发、区域复发、远端复发或对侧复发。16.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述样品是癌前样品或组织活检样品，或者是确诊的癌症样品或组织活检样品。17.—种确定对象治疗方案的方法，所述方法包括通过权利要求14所述的方法确定所述对象的预后或结局；以及根据所述预后或结局为所述对象确定治疗方案。18.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述癌症复发选自局部复发、区域复发、远端复发或对侧复发。19.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述一个或多个细胞是癌细胞，任选原发性癌细胞或转移性癌细胞。全文摘要本发明涉及检测ADAM9基因增强的表达作为侵袭性或转移性癌症表型的指示。本发明提供了检测ADAM9基因的表达水平，任选结合结节状况，作为侵袭性或转移性表型以及细胞迁移和/或运动能力升高的指示因子的方法。本发明还提供了检测ADAM9基因的表达水平以帮助确定对象的预后以及临床诊断和治疗方案的方法。文档编号G01N33/68GK101440405SQ20081020411公开日2009年5月27日申请日期2008年12月5日优先权日2008年12月5日发明者刘秀明,张志愿,骎徐,蔡以理,陈万涛申请人:上海交通大学医学院附属第九人民医院