专利名称：鸟类性别判定的方法
技术领域：
本发明涉及孵化前鸟类胚胎性别判定的方法和装置。更具体而言，本发明涉及用于蛋中测定鸟类物种性别并可将所述蛋分成基本上由雄性或雌性胚胎组成的组的非侵入性方法和装置。本发明使用非侵入性的蛋内测定方法进行性别鉴定。蛋内测定是指在蛋内进行测定，而不需要从蛋中取样。相关技术描述性别分离是所有鸟类物种生产的一个重要方面，但尤其是肉鸡和基本上所有的产蛋鸡和火鸡生产。对于肉鸡和火鸡，性别分离可以根据两种性别的需求提供更适合的管理和喂养，其在某种程度上不同于现在大多数情况下所做的单一性别饲养。通过使用群体性别分离，基本上所有商业上孵出的母鸡均可以成为产蛋母鸡。公鸡在孵蛋处被淘汰，而母鸡最终用于产蛋。目前有三种方法可用于家禽性别鉴定。鸡苗可通过肛门/泄殖腔性别鉴定、或羽毛性别鉴定方法鉴定性别。或者，可以将雄性和雌性的雏鸡饲养在一起直到第二性征显现出来，然后可基于性别分离小鸡。肛门/泄殖腔性别鉴定依赖于性别的视觉鉴定，基于性别相关的解剖结构的外观。羽毛性别鉴定基于雄性和雌性小鸡的不同羽毛特点，例如翅膀羽毛的彩色图案和生长速度的快/慢。第三种方法依赖于自然的第二性征的外观，例如，雄性的鸡冠和肉垂比雌性的更大。鸡苗的肛门/泄殖腔性别鉴定困难且昂贵。鉴别鸟类的性别需要非常熟练的人员。虽然更容易执行，但羽毛性别鉴定缺点在于仅限于特定的鸟类遗传杂交。第二性征的性别鉴定是最容易实施的方法，但缺点是要求两种性别的鸟类孵化后在一起饲养一周，鉴于饲料成本和饲料转化的考虑，其比肛门/泄殖腔性别鉴定的费用更加昂贵。最重要的，因为肉类和蛋类制品的生产都不断优化，被淘汰的产蛋鸡的雄性小鸡不再适合于经济上有吸引力的肉类生产。因此，每年在美国和欧洲有超过5亿只雄性小鸡被毒气、电击或切碎杀死。这不仅仅是一个经济问题，也越来越成为一个道德问题。显然，商业孵化产业需要一种方法，其能够在很早的阶段区分鸟类的性别，而不需要娴熟的技术人员或者使用特定的鸟类遗传杂交。最近已经开发了一些方法。在US6512839中描述了通过超声肛门或泄殖腔扫描技术确定幼体性别。虽然其可以自动化并降低性别测定过程中的成本，但它依然具有缺点这是孵化后的技术，因此蛋必需孵化，雄性小鸡需要处死。US6029080中描述了蛋内测定鸟类物种性别的方法，包括对整个蛋进行NMR成像 (非侵入性)以测定正在孵化的蛋的胚胎中雄性或雌性器官的存在。检测NMR信号并转化为性器官成像，其通过图像处理计算机分析，鉴定蛋中的胚胎性别。尽管是一项非侵入性技术，但其仍然具有若干缺点。该方法的一个具体的缺点是其仅可用于胚胎发育的晚期阶段， 性器官发育到一定程度以便能够进行确认。除了浪费孵化能力以外，其缺点还在于雄性蛋不能被用于其他目的，而且破坏该发育阶段的胚胎依然可能产生伦理学问题。此外，该方法在经济上欠缺吸引力，因为首先所有的NMR检测装置，尤其是与成像设备配套的装置非常昂贵，而且该技术很复杂，因为鸡蛋最好是冷却的，以防止胚胎的运动。US7167579描述了通过拍摄鸡蛋的图像确定鸡蛋性别，其从图像中产生二维轮廓影像数据，从轮廓影像数据中提取参数，使用所提取的参数确定鸡蛋的性别。该方法被认为不够可靠。W02004/016812中鸟类个体的蛋性别通过从蛋中取样确定，优选取自尿囊液或羊水。通过与特定的核酸探针杂交确定某些DNA序列的存在。杂交样本的分析包括PCR扩增步骤。尽管该方法是准确且充分可靠的，但也是高度精细、缓慢和昂贵的，因此在经济上没有吸引力，但是最重要的是它应用于发育后期，此时羊膜已经形成。该方法是侵入性的， 表明必须从蛋中取样，其显著增加了成本和造成感染和畸变的风险。此外，该方法依赖于非常昂贵且费时的核酸扩增技术，例如PCR。这表明该性别鉴定方法不可能具有很高的生产率，对于商业孵化所是不具有经济吸引力的。文献W02004/016812也提到了使用对于由性别特异性DNA序列编码的肽(及其衍生物、片段和能结合所述多肽的合成构建体)的(单克隆)抗体。该方法包括用所述(优选带有可检测标记的)抗体接触从所述鸟类个体中提取的样本，并且是蛋外的。该文献同样提及包含共价连接部分的合成抗体构建体，其提供了除抗原结合外的其他一些需要的性质，例如标记(可检测的标记，例如荧光或放射性标记)或药物活性剂。实施例9描述了生产用于鉴定FAF肽的单克隆抗体的方法。发明概述本发明要解决的问题是提供用于孵化前鸟类胚胎性别鉴定的方法和装置，其可在胚胎发育早期应用，是非侵入性的，表明不需要从蛋中取样，并且相对简单、便宜和快速，因此对于商业孵化所在经济上具有吸引力。根据本发明，该问题通过一种用于鸟类的蛋中胚胎的孵化前性别鉴定的方法已得到解决，该方法包括以下步骤a.在蛋中引入匹配胚胎的性别特异性抗原的抗体，该抗体是被标记的，b.使标记的抗体移动到胚胎上的性别特异性抗原并与之结合，c.使用位于蛋外的检测装置检测所述标记抗体在胚胎上的结合。当受精蛋孵化时，胚胎上的性别特异性抗原在胚胎发育的很早期阶段在胚盘中形成，其位于卵黄的一侧。标记的抗体将结合，并呈现出在胚胎内或胚胎附近较高浓度的标记抗体。本文中“标记的”表示具有作为标签以检测所述抗体以及抗体-抗原复合物的官能团。雄性蛋可通过检测胚胎上结合的抗体的局部浓度进行鉴定，或者当标记的抗体对于雌性抗原是特异性时，通过无该结合来鉴定。发明人发现了使用选择的抗体和通过位于蛋外的检测装置检测结合从而检测所述性别特异性抗原存在的方法，该方法是非侵入性的，即， 能够不需要从蛋中取样而进行。附图简述本发明的特色和优点将参考
图1和2进行说明。图1显示了大头向上的鸡蛋1.蛋壳，2.外膜，3.内膜，4.卵带，5.外卵白(外部的薄卵白)，6.中卵白(内部的厚卵白)，7.卵黄膜，8. Pander核，9.胚盘(也称为囊胚层或胚泡层)，10.黄卵黄，11.白卵黄，12.内卵白，13.卵带，14.气囊和15.角质层，并且显示了检测装置I，其包含光源I. 3和检测器I. 2，穿透角质层(15)、蛋壳(1)和外膜(2)但未穿过内膜(3)，终止于气囊(14)。检测器I. 2测定来自于结合胚胎的标记抗体的发射光 (II. 1),1.4处理数据，确定标记的抗体是否存在指示雌性胚胎的局部高浓度。图2显示了带检测装置I的鸡蛋，该装置包括位于蛋外部的光源I. 3，以及同样位于蛋外部的检测器I. 2，用于检测胚胎或胚盘附近的标记抗体的发射光(II. 1)，以及评价装置I. 4，用于根据测定的值确定和评价性别特异性标记抗体的结合，以指示胚胎的存在。图3显示了带检测装置I的鸡蛋，该装置包括两个光源I. 3. 1和I. 3. 2，分别位于蛋外侧的顶部和底部(沿中轴线)，以及检测器I. 1和I. 2，同样位于蛋外侧，用于测定标记抗体的发射光。I. 4用于测定和评价第一和第二检测器的测量值的比值或差异，建立性别特异性标记抗体的结合以指示胚胎的存在。发明详述本方法包括将经设计匹配胚胎上的性别特异性抗原的抗体引入蛋内的步骤，其中所述抗体是经标记的。所述抗体可通过本领域已知的多种方法引入蛋内，优选注射入蛋内， 优选使用针头进行微量注射、或使用高压流体喷射进行微流体注射、或渗透。适当的注射方法描述于W02006/078499中。该文献描述了用于检测平面口袋中是否含有鸡蛋，或使用传感器(光学相机)检测注射工具相对于鸡蛋位置的方法。这是用于将物质注射到鸡蛋内或从鸡蛋内提取物质的装置的一部分，其可用于本发明的方法中。注射物质的实例包括疫苗、抗生素和维生素。术语“标记的抗体”定义为具有能被检测的官能团的抗体。优选地，所述标记的抗体可通过光的吸收和发射检测。优选地，所述官能团是发光基团，更优选是光照发光基团， 其可以被光激发而发出特征波长的光，最优选是荧光或磷光基团。另外，官能团可以是磁性纳米颗粒，其能够被磁力或电检测手段检测。标记的抗体可以直接注射到卵白中，或可以注射到气囊中，并通过内壳膜扩散到卵白中。所述第一种方法的优点是扩散时间，因此注射和检测之间的时间间隔更短。后一种方法的优点是可以减少与内膜穿透相关的不良因素，例如感染。引入标记的抗体后，给其足够的时间扩散通过卵白，迁移到胚胎并结合胚胎上选定的性别特异性抗原。不同的标记抗体的扩散速率可以不同。技术人员通过在标记抗体 (相对)浓度的测定中测定获得足够强的检测信号所需要的时间，可以确定用于具体选定的标记抗体的适当扩散时间。所述引入可以在孵育开始前或后进行。在该方法的一个实施方案中，标记的抗体在鸡蛋开始孵育足以产生足够量的结合和检测所述标记抗体的抗原的时间之后引入。通常，可以在孵育开始后2-10天检测，优选2-7天，更优选2-5天。该实施方案的优点是引入和检测可以在一个处理步骤中进行。当所选的标记抗体的扩散速率较低时，标记的抗体优选在孵育开始前注射，使得标记抗体具有足够的时间扩散通过卵白。胚胎上的性别特异性抗原优选是W染色体特异性的蛋白抗原，或TL染色体特异性的蛋白抗原，或其他间接表达的性别特异性蛋白。所述胚胎的性别特异性抗原可以适当的选自W特异性基因/蛋白表达，特别是CHD1W、ATP5A1W、Spin-W、ASff,以及最优选是 FET-I (雌性表达的转录物；跨膜结构域)，或U特异性基因/蛋白表达；特别是DMRTl、SF1 和Daxl，或间接表达的性别特异性蛋白，尤其是AMH (抗-苗勒管激素)。
所述抗体可以是多克隆抗体，单克隆抗体或重链抗体(纳米抗体)或其片段。重链抗体(纳米抗体)和抗体片段的优点是其更小，具有更高的扩散速率。所述抗体可以使用选定的性别特异性抗原通过本领域已知的方法以商业规模生产。抗体在其常规组成的一部分上可以具有能被检测的官能团，或可以通过本领域已知的方法提供可检测的官能团。官能团优选通过使发光基团与Fc区域结合而提供给重链的恒定区，即抗体的Fc区域(片段，可结晶的)。使用荧光染料标记抗体或抗原在免疫荧光领域是已知的。适当的荧光染料是异硫氰酸荧光素(FITC)，其具有约496nm/521nm的激发和发射波长。与大多数荧光染料一样，其很容易出现光漂白作用。为此开发了荧光素的新一代衍生物，例如Alexa 488和DyLight 488，其被用于需要更高的耐光性、更高的荧光强度或不同附着基团的多种化学和生物学应用。其他适当的和常见的荧光基团有罗丹明 (TRITC)、香豆素和花青素的衍生物。其他适当的可检测官能团是含有荧光蛋白结构域的重组蛋白，例如绿色荧光蛋白(GFP)。那些“加标记的”蛋白的使用使其具有更好的定位，并且蛋白质功能损失较小。另外，所述官能团可以是酶，其可以与某种物质组合添加，该酶可以转化成可检测的信号。因此，在荧光的情况下，当适当波长的光照射到样品上时，任何抗原 /抗体复合物会发出荧光，其强度与其量成比例。荧光信号可通过检测器检测。标记的抗原/抗体复合物使用位于鸡蛋外部的检测装置检测。鸡蛋外部表示位于鸡蛋内膜以外，或更优选整个鸡蛋以外。其也指非侵入性或蛋内测定，与需要从蛋中取样的侵入性的蛋外测定相反。将光源放置在鸡蛋外部照射蛋壳的结果是显著的光吸收和散射， 但当蛋壳对于所选波长是至少部分透明的时候则是有可能的。蛋壳和膜对光的吸收是下文所描述的示差检测技术所需要考虑的鸡蛋特征。光散射可通过使用强光束源和/或在蛋壳上应用具有近似于蛋壳折射率的物质而减少。现有多种方法测定(蛋内)标记抗体与胚胎上或胚胎附近抗原的结合存在与否。 该测定可基于胚胎附近标记的抗体浓度更高的事实，因为其结合来自于胚胎的性别特异性抗原(或在另一种性别时相反)。可通过光学或声学手段透过蛋壳确定胚胎或胎盘的位置。 当鸡蛋大头向上放置时，即气囊在上方(如图1-3所示)，胎盘或胚胎将向上移动靠近气囊。 优选通过气囊在这个位置测定来自胎盘或胚胎的检测信号，因为光散射和光吸收更少，可以获得更好的测量信号。在一个简单的实施方案中，如图2所示，标记抗体的浓度可通过测定胎盘附近标记抗体的浓度或与所述浓度有关的信号，并将测定的浓度或信号与预定的标准比较而进行检测。该标准可在未受精或未孵育的鸡蛋上对于任何选定的测量条件预先确定，所述测量条件包括但不限于抗体上标记的具体选择，选定的抗体/抗原组合，选定的检测装置，例如检测光的波长和强度，温度等等。如果测定的信号强度高于预定的标准，则确定抗体/抗原结合的存在。在另一个更可靠的方法中，提供了内部参照测定，其中通过检测标记抗体分布的不均一性来检测标记抗体是否与胚胎结合。不均一性可如下确定测定标记抗体在接近胚盘的区域和远离胚盘的区域的局部浓度，通过与预定标准比较所述测定的浓度的差异或比值确定结合存在与否，该标准优选从未受精或未孵育的鸡蛋中获得。在一个特别优选的方法中，远离胚盘的区域优选在与卵黄的胚盘侧相对的另一侧，此时卵黄位于两个测定点的中间，减少了两次测量间的干扰。另一个显著的优点是该相对测量将抵偿蛋壳的吸收谱。因此，从白色蛋上获得的结果和从褐色蛋上获得的结果是一样的。
在最优选的实施方案中，所述抗体用可通过光检测的标记物标记，优选荧光基团， 检测装置包括光源、检测器和任选的滤光片，以改善吸收或发射光的信噪比，优选为光谱仪。如图1所示，检测装置(I)优选包括照射卵白的光源(I. 3)，第一和第二检测器，其中第一检测器(1. 测定胚盘附近标记的抗体浓度，优选通过测定标记抗体发射的光的光强度进行，其中第二检测器(1. 测定远离胚盘或胚胎区域的标记抗体浓度，优选在卵黄的另一侧。明显地，各检测器可与单个光源组合，如图3所示，或可以使用超过2个检测器和 /或光源。优选地，选择检测装置的波长，使得光源的光和/或抗体上标记基团发射的光被卵黄吸收，以区分胚盘或胚胎附近的第一检测器测定和卵黄另一侧的第二检测器的测定， 并减少两次测定之间的干扰。或者，在测定标记抗体浓度的过程中使鸡蛋沿其长轴方向旋转，优选在胚盘所在的与长轴方向垂直的位置进行测定。因为发育早期阶段胚盘和胚胎不在鸡蛋的中心，其被能够吸收光的卵黄分开，在接近胚胎的地方具有较高浓度的标记抗体，在发光检测信号中显示为一个峰。任选地扣除来自未受精或未孵育鸡蛋的测定的参照基线。光源和/或检测器也可通过蛋壳上的小开口引入蛋中，优选在气囊中，但优选不穿过内壳膜。其优点是可以减少蛋壳的光散射和光吸收。这可以通过使用非常细的光纤探针完成，该探针包括光源和/或检测器探针以及任选的滤光片。光源可以放置在蛋壳外部， 而检测器被引入鸡蛋的气囊中。或者，仅将光源引入蛋中，一个或多个检测器位于蛋壳的外部。在一个实施方案中，还可以将光源和/或检测器放置在蛋外，其中激发光和/或发射光的波长基本上不被蛋壳吸收或散射。激发光和/或发射光的波长优选在700-2000nm之间， 优选700-1500、更优选700-1000或610-630nm之间。已发现蛋壳在这些波长下最为透明。另一方面，本发明涉及用于蛋内测量的方法和装置，即不需要从蛋中取样即可测定蛋中标记的分子。这些标记的分子可以是除本文所述的性别特异性的标记的抗体以外的性别特异性的分子。例如，其可以是另一种性别特异性的试剂，例如要引入蛋中的RNA或 DNA序列，或可以是任选在对鸡蛋(雏鸡)进行遗传修饰后鸡蛋本身具有的分子。标记的分子也可以是为其他目的引入蛋中的另一种分子，例如药物。所述分子用能在蛋内以类似于本文所述的标记抗体的方法检测的官能团标记。具体而言，所述方法包括a.提供包含标记分子的蛋，所述分子优选为性别特异性分子，更优选为性别特异性抗体，所述分子具有能通过蛋内检测装置检测的官能团，优选荧光或磁性官能团，b.测定所述标记分子的浓度，优选使用光源和检测器，更优选使用荧光光度计，c.评价测得的标记分子的量，优选用于确定蛋中胚胎的性别。本发明还涉及根据上文所述的任意一项方法实施方案中用于在孵化前确定蛋中胚胎性别的装置，其包括a.用于将标记分子、优选标记的抗体引入蛋中的装置，优选使用针头的微量注射装置或使用高压流体喷射的微流体注射装置，b.用于蛋内测定标记分子浓度的装置，优选光源和检测器，更优选荧光光度计，c.用于根据测定的标记分子的量评价标记分子是否在胚胎上存在结合的装置。优选地，所述装置包括第一和第二检测器，其中第一检测器测定胚盘附近的标记抗体浓度，而第二检测器测定远离胚盘的区域，优选在卵黄的另一侧的标记抗体浓度。本发明还涉及用于根据本发明的方法的抗体，其由可被蛋外测量测定的官能团所修饰，优选是发光基团，该抗体优选是多克隆抗体、单克隆抗体、重链抗体或其片段，其中选择抗原结合位点以匹配一种或多种性别特异性抗原，优选选自W-特异性基因/蛋白表达 CHDIff, ATP5A1W、Spin-W、ASff以及最优选FET-I (雌性表达的转录物；跨膜结构域)，或U 特异性基因/蛋白表达，尤其是DMRT1、SF1和Daxl，或间接表达的性别特异性蛋白，尤其是 AMH (抗苗勒管激素)。 选择抗苗勒管激素作为合适的性别特异性激素。已生产了该激素的抗体抗苗勒管激素(抗体213816，R&D Systems, Minneapolis, Minn.)。该抗体用绿色荧光蛋白 (GFP)修饰。GFP是非植物毒性的，认为在蛋中使用是安全的。使用荧光基团修饰抗体的适当技术描述于 Gutowski，M.，Carcenac, M.，Pourquier, D.，Larroque, C，Rouanet，P.禾口 PelegriniA. (2001) ； 〃 Intraoperative immunophotodetection for radical resection of cancer !evaluation in an experimental model“ , Clin. Cancer Res. 7，1142_11480 标记的抗体在孵化前使用W02006/078499描述的微量注射技术注射到蛋中。鸡蛋大头朝上放置。孵育3天后将鸡蛋放置在包含2个光源和2个检测器的测量孔中(见图幻。用于激发GFP的光源在波长395nm处发射光，GFP发射峰为509nm。发射光检测器具有滤光片以滤除激发光。第一光源和检测器置于胚胎附近，第二(参比)光源和检测器位于胚胎反面，以便卵黄将第一和第二检测器隔开。测定第一和第二检测强度的比值。在完全相同测量的条件下测定未孵育鸡蛋的比值并作为参考。与未孵育的蛋相比，孵育的蛋显示两个检测信号的比值增加，表明标记的抗体优先在胚盘附近结合以及存在雄性胚胎。
权利要求
1.一种用于孵化前鸟类蛋中胚胎的性别鉴定的方法，包括步骤a.在蛋中引入匹配胚胎的性别特异性抗原的抗体，该抗体是被标记的，b.使标记的抗体移动到胚胎上的性别特异性抗原并与之结合，c.使用位于蛋外的检测装置检测所述标记抗体在胚胎上的结合。
2.权利要求1的方法，其中标记的抗体被注射入蛋内，优选通过使用针头的微量注射或使用高压流体喷射的微流体注射或渗透。
3.权利要求1或2的方法，其中标记的抗体被注射到卵白中。
4.权利要求1或2的方法，其中标记的抗体被注射到气囊中，并通过内壳膜扩散。
5.权利要求1-4任一项的方法，其中标记的抗体在孵育开始前被注射。
6.权利要求1-5任一项的方法，其中标记的抗体被注射，并给其足够的时间扩散和迁移到胚胎上的性别特异性抗原并与之结合。
7.权利要求1-6任一项的方法，其中胚胎上的性别特异性抗原是W染色体特异性的蛋白抗原，或TL染色体特异性的蛋白抗原，或其他间接表达的性别特异性蛋白。
8.权利要求1-7任一项的方法，其中检测在孵育开始后2-10天，优选2-7天，更优选 2-5天进行。
9.权利要求1-8任一项的方法，其中胚胎上的性别特异性抗原选自W特异性基因/蛋白表达，特别是CHD1W、ATP5A1W、Spin-W、ASff,以及最优选是FET-I (雌性表达的转录物；跨膜结构域)，或U特异性基因/蛋白表达，特别是DMRTl、SFl和Daxl，或间接表达的性别特异性蛋白，尤其是AMH (抗苗勒管激素)。
10.权利要求1-9任一项的方法，其中抗体是多克隆抗体、单克隆抗体或重链抗体或其片段。
11.权利要求1-10任一项的方法，其中标记抗体与胚胎的结合存在与否通过测定胚盘附近的标记抗体浓度并将测得的浓度与预定的标准比较而进行检测，所述的标准优选来自未受精或未孵育的蛋。
12.权利要求1-10任一项的方法，其中标记抗体与胚胎的结合存在与否通过检测标记抗体分布的不均一性进行检测。
13.权利要求12的方法，其中不均一性如下确定测定标记的抗体在接近胚盘的区域和远离胚盘的区域的局部浓度，通过与预定标准比较所述测定的浓度的差异或比值来确定结合存在与否，该标准优选从未受精或未孵育的蛋中获得。
14.权利要求12或13的方法，其中远离胚盘的区域位于与卵黄的胚盘侧相对的另一侧。
15.权利要求1-11任一项的方法，其中所述抗体用可通过光检测的标记物标记，优选荧光基团。
16.权利要求1-15任一项的方法，其中检测装置包括光源、检测器和任选的滤光片以改善吸收或发射光的信噪比，优选为光谱仪。
17.权利要求15或16的方法，其包括第一和第二检测装置，其中第一检测器测定胚盘附近的标记抗体浓度，其中第二检测器测定远离胚盘区域的标记抗体浓度，优选在卵黄的另一侧。
18.权利要求16或17的方法，其中选择检测装置的波长，使得光源的光和/或抗体上标记基团发射的光被卵黄吸收，以区分胚盘附近的第一检测器的测定和卵黄另一侧的第二检测器的测定。
19.权利要求16-18任一项的方法，其中光源和/或检测器通过蛋壳上的小开口引入蛋中，优选在气囊中，但优选不穿过内壳膜。
20.权利要求16-18任一项的方法，其中光源和/或检测器放置在蛋外，并且其中激发光和/或发射光的波长基本上不被蛋壳吸收或散射。
21.权利要求20的方法，其中激发光和/或发射光的波长选自700-2000nm之间，优选 700-1500、更优选 700-1000 或 610-630nm 之间。
22.用于权利要求1-21任一项的方法中的抗体，优选多克隆抗体、单克隆抗体、重链抗体或其片段，其中选择抗原结合位点以匹配一种或多种性别特异性抗原，优选选自W-特异性基因/蛋白表达CHDlW、ATP5AlW、Spin-W、ASW以及最优选FET-I (雌性表达的转录物；跨膜结构域)，或U特异性基因/蛋白表达，尤其是DMRTl、SFl和Daxl，或间接表达的性别特异性蛋白，尤其是AMH (抗苗勒管激素)。
23.用于蛋内测定标记分子的方法，包括a.提供包含标记分子的蛋，所述分子优选为性别特异性分子，更优选为性别特异性抗体，所述分子具有能通过蛋内检测装置检测的官能团，优选荧光基团，b.蛋内测定所述标记分子的浓度，优选使用荧光光度计，c.评价测得的标记分子的量，优选用于确定蛋中胚胎的性别。
24.根据权利要求23的任一项用于测定胚胎或胚盘附近标记分子的方法，其中蛋优选大头向上放置，并在胚盘或胚胎附近通过气囊测定标记分子的浓度。
25.根据权利要求对的任一项的方法，其中在步骤c中测定的浓度通过以下方式评价 1)比较测定的浓度和预定的标准值，该标准值优选来自参比鸡蛋，或幻比较测定的浓度和远离胚盘的区域中的第二测定浓度，所述区域优选在与卵黄的胚盘所在侧相对的一侧。
26.根据权利要求23或25任一项的方法，其中光源和/或检测器通过蛋壳上的小开口引入蛋中，优选在气囊中，但不穿过内壳膜。
27.用于在孵化前确定蛋中胚胎性别的装置，其包括a.用于将标记分子、优选标记的抗体引入蛋中的装置，优选使用针头的微量注射装置或使用高压流体喷射的微流体注射装置，b.用于蛋内测定标记分子浓度的装置，优选光源和检测器，更优选荧光光度计，c.用于根据测定的标记分子的量评价标记分子是否在胚胎上结合的装置。
28.根据权利要求22的装置，包括第一和第二检测器，其中第一检测器测定胚盘附近的浓度，其中第二检测器测定远离胚盘区域的浓度，优选在卵黄的另一侧。
全文摘要
本发明涉及用于孵化前鸟类胚胎性别判定的方法和装置。更具体而言，本发明涉及用于蛋中测定鸟类性别的非侵入性方法和装置，并可以将所述蛋分成基本上由雄性或雌性胚胎组成的组。该方法包括以下步骤在蛋中引入匹配胚胎的性别特异性抗原的抗体，该抗体是被标记的；使标记的抗体移动到胚胎上的性别特异性抗原并与之结合；使用位于蛋外的检测装置检测所述标记的抗体在胚胎上的结合。
文档编号G01N33/52GK102421282SQ201080020309
公开日2012年4月18日 申请日期2010年3月12日 优先权日2009年3月13日
发明者E·德屈佩尔, F·法伊 申请人:范德冯管理有限公司