专利名称：氧化酶活性和氧化酶底物浓度的检测方法
技术领域：
本发明涉及生物技术 领域，特别涉及氧化酶活性和氧化酶底物浓度的检测方法。
背景技术：
氧化酶是直接以分子氧作为电子受体生成水，催化底物氧化的酶。常见的氧化酶有葡萄糖氧化酶、尿酸氧化酶、乳酸氧化酶和单胺氧化酶等。氧化酶是大部分生物体内不可或缺的物质，决定了生物体内的氧化代谢进程和次生代谢产物的产生于消除，以保证生物体在不同的生长环境下具有不同的适应状态，其活性对于维持生物体正常代谢具有重要作用。因此，氧化酶活性和氧化酶底物含量的检测在生物分析和临床测定中都具有重要意义。酶活性是其对酶底物催化反应能力的表征，酶活性单位为IU，简写为U,其定义为=Imin能转化1 μ mol底物的酶量，即IIU = 1 μ mol/min。申请号为200710067620. 7的中国专利公开了一种单胺氧化酶活性的荧光检测方法，该方法是以单胺氧化酶水解探针形成荧光物质，测定荧光强度，获得单胺氧化酶活性数据。但是采用此种方法对其他种类的氧化酶进行测定需要制备不同种类的荧光探针，通用性较低。各种氧化酶虽然作用于不同的底物，但其公共特征为氧化酶氧化底物的同时将氧还原成过氧化氢(H2O2)。根据这一特征，现有的氧化酶活性及氧化酶底物的检测有采用分光光度法测得，如申请号为200810107036. 4的中国专利公开了一种生成物为H2O2的氧化酶活性检测方法，其是将氧化酶提取液和显色液在缓冲溶液中混合，然向混合溶液中加入氧化酶底物，一段时间后采用分光光度法测定波长550nm处光密度值，由此测得氧化酶的浓度。此种方法的通用性虽有所提高，但是分光光度法检测操作繁琐且灵敏度不高，由此也影响了测试结果的精准度。
发明内容
本发明解决的技术问题在于提供一种操作简单、检测灵敏度高的氧化酶活性检测方法和氧化酶底物浓度的检测方法。有鉴于此，本发明提供一种氧化酶活性的检测方法，包括al)、将待测溶液与氧化酶底物和芳基硼化合物混合，得到含有酚类化合物的中间待测溶液；a2)、采用电化学检测法检测所述中间待测溶液中酚类化合物的浓度，根据酚类化合物的浓度计算出待测溶液中氧化酶的活性。优选的，所述芳基硼化合物为式(I)结构的化合物，式(I)中R1为氨基或羟基，R2
为硼酸基或硼酸频那醇酯基；
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优选的，所述电化学检测法为伏安分析法。
优选的，所述伏安分析法为循环伏安法，电压扫描范围为0 0. 4V，扫描速度为 0.03V/s 0. lV/s。本发明还提供一种氧化酶底物浓度的检测方法，包括bl)、将待测溶液与氧化酶和芳基硼化合物混合，得到含有酚类化合物的中间待测溶液；1^2)、采用电化学检测法检测所述中间待测溶液中酚类化合物的浓度，根据酚类化合物的浓度计算出所述待测溶液中氧化酶底物的浓度。优选的，所述芳基硼化合物为式(I)结构的化合物，式(I)中R1为氨基或羟基，R2
为硼酸基或硼酸频那醇酯基；
权利要求
1.一种氧化酶活性的检测方法，包括al)、将待测溶液与氧化酶底物和芳基硼化合物混合，得到含有酚类化合物的中间待测溶液；a2)、采用电化学检测法检测所述中间待测溶液中酚类化合物的浓度，根据酚类化合物的浓度计算出待测溶液中氧化酶的活性。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述芳基硼化合物为式(I)结构的化合物，式(I)中队为氨基或羟基，R2为硼酸基或硼酸频那醇酯基；
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述电化学检测法为伏安分析法。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述伏安分析法为循环伏安法，电压扫描范围为0 0. 4V，扫描速度为0. 03V/s 0. lV/s。
5.一种氧化酶底物浓度的检测方法，包括bl)、将待测溶液与氧化酶和芳基硼化合物混合，得到含有酚类化合物的中间待测溶液；1^2)、采用电化学检测法检测所述中间待测溶液中酚类化合物的浓度，根据酚类化合物的浓度计算出所述待测溶液中氧化酶底物的浓度。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述芳基硼化合物为式(I)结构的化合物，式(I)中R1为氨基或羟基，R2为硼酸基或硼酸频那醇酯基；
7.一种氧化酶底物浓度的检测方法，包括以芳基硼化合物和氧化酶修饰的碳糊电极作为工作电极，采用电化学检测法检测待测溶液中酚类化合物的浓度，根据酚类化合物的浓度计算出待测溶液中氧化酶底物的浓度。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述芳基硼化合物为式(I)结构的化合物，式(I)中队为氨基或羟基，R2为硼酸基或硼酸频那醇酯基；
9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述电化学检测法为恒电位扫描法， 扫描电位为0. 08V 0. 15V，扫描时间为IOs 18s。
10.一种氧化酶底物浓度的检测方法，包括cl)、将待测溶液与芳基硼化合物混合，得到中间待测溶液；c2)、以氧化酶修饰的碳糊电解作为工作电极，采用电化学检测法检测所述中间待测溶液中酚类化合物的浓度，根据酚类化合物的浓度计算出待测溶液中氧化酶底物的浓度。
全文摘要
本发明提供一种氧化酶活性的检测方法，包括将待测溶液与氧化酶底物和芳基硼化合物混合，得到含有酚类化合物的中间待测溶液；采用电化学检测法检测所述中间待测溶液中酚类化合物的浓度，根据酚类化合物的浓度计算出待测溶液中氧化酶的活性。本发明是基于电化学检测酚类化合物浓度来间接检测出氧化酶的活性，由于酚类化合物具有氧化电位低的特点，因此易于进电化学检测，同时由于电化学检测法具有操作简单、灵敏度高的特点，由此使得本发明提供的方法具有操作简便，灵敏度和检测准确度高的特点。本发明还提供三种氧化酶底物浓度的检测方法，这三种检测方法的检测思路与上述检测方法相同，该方法易于操作，灵敏度和检测准确度较高。
文档编号G01N27/48GK102353713SQ20111018845
公开日2012年2月15日 申请日期2011年7月6日 优先权日2011年7月6日
发明者徐国宝, 胡连哲 申请人:中国科学院长春应用化学研究所