专利名称：犬心血管病模型的建立方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物医药领域，涉及一种带有生物信号遥测系统的动物病理模型，尤其是犬心血管模型的建立方法，及该动物病理模型的应用，特别是在药物筛选中的应用。
背景技术：
目前，心血管系统的疾病，例如冠心病和高血压等严重危害着人类健康，患病人群呈现逐步增多的趋势。用于治疗心血管系统的疾病的药物开发有广大的市场应用前景。由于新药开发的成本不断增加、时间逐步增长，在一定程度上制约了新药开发的进程。目前， 在新药开发的前期过程中，采用细胞水平的大规模筛选已应用广泛，然而因体内、体外生理环境的差异，使细胞水平的实验结果并不能有效、准确地说明化合物的适应症。采用病理动物模型进行新化合物的活性筛选是新药开发中常用的方法，而且在药物临床应用前采用病理动物模型系统全面的评价药物在一种或者多种适应症的生理活性是药物临床应用的基石出。建立病理动物模型的方法通常有手术形成、药物诱导、遗传改造和环境诱导等。其中，通过手术方法形成犬、兔或大鼠等模型较为常见。目前文献报道动物模型也很多，例如心肌缺血动物模型、高血压动物模型等。然而，在研究中，往往采用单一模型进行药物在体研究，耗时长，动物使用数量多、成本高。而且，一次实验只能判断化合物的一种适应症，并且与一般临床疾病患者病症和并发症并存的情况不符。本申请人之前递交的申请CN101507655A针对上述问题，公开一种在同一只犬体内建立多种疾病动物模型的方法及其应用。通过在一只动物体内建立多种疾病模型，可以减少动物使用量，降低成本。然而，通过上述方法建立的动物模型，均是在动物处于麻醉状态时测量各生理参数，评价模型和筛选药物。由于处于麻醉状态的动物的生理现象与临床相差甚远，数据可信度较低，仍不能满足新药开发的需要。此外，对于上述病理动物模型，建模评价及药物筛选时均需动物处于手术麻醉状态，模型动物处于手术状态的时间较长，对动物损伤大。
发明内容
本发明是基于现有技术存在的上述技术问题作出的。在此，本发明人意识到需要建立一种可在模型动物处于清醒状态时测量各生理参数来评价模型和测量药物活性。本发明提供一种犬心血管病模型的建立方法，包括采用手术方法在犬体内植入生物信号遥测系统，以及在带有生物信号遥测系统的犬体内采用手术方法建立心血管病模型。采用本发明，通过植入犬体内的生物信号遥测系统，可以在犬术后处于清醒状态时测量各生理参数用于评价模型和测量待选药物活性，不但可以有效、快捷地筛选化合物及研究其机理，发现目标化合物潜在的新的临床适应症，而且数据可信度高，与人的临床病症更加接近。此外，模型动物无需长期处于手术状态，模型动物损伤小，动物可重复使用，可进一步降低动物使用量，成本低。在本发明中，所述心血管病可以是心肌缺血，所述建立方法包括在带有生物信号遥测系统的犬体内采用手术方法建立心肌缺血模型。采用该方法建立的动物模型可针对性地用于筛选治疗冠心病等的药物。又，所述心血管病可以是高血压，所述建立方法包括在带有生物信号遥测系统的犬体内采用手术方法建立高血压模型。采用该方法建立的动物模型可针对性地用于筛选治疗高血压的药物。又，所述心血管病可以是心肌缺血并发高血压，所述建立方法包括在带有生物信号遥测系统的犬体内采用手术方法建立心肌缺血并发高血压模型。进一步，所述建立方法包括在带有生物信号遥测系统的犬体内采用手术方法建立心肌缺血模型，以及在具有心肌缺血模型的犬体内再建立高血压模型以形成心肌缺血并发高血压模型。采用该方法建立的动物模型可针对性地用于筛选治疗心肌缺血和/或高血压的药物。并可了解用于治疗心肌缺血/或高血压是否具有高血压或心肌缺血的适应症，对扩大已有药物的适应症有重要意义。通过该方法，可以建立多疾病动物模型，在研究周期、动物使用量、成本等方面比单一的动物模型具有明显的优势。又，通过本发明的方法建立的模型可以快速、有效地筛选出药物的药效及其作用靶点，同时通过本发明的方法建立的动物模型还可以发现化合物新的未知适应症，在发现并研究化合物的潜在适应症方面有重要的意义。在本发明中，心肌缺血模型可以测定心电图和/或心肌酶来评价。在一个例子中， 模型组和对照组的心脏ST段值的统计学中的卩值< 0. 05，表明两者之间具有统计学上的显著性差异；优选P < 0.01。在又一个例子中，模型组和对照组的统计学中的P值< 0.05; 优选P < 0.01。其中，心肌酶值可采用磷酸肌酸激酶值和/或乳酸脱氢酶值。又，高血压模型可以测定动脉压来评价。在一个例子中，模型组和对照组的平均动脉压的统计学中的P值<0. 05 ；优选P<0. 01。另一方面，本发明还提供带有生物信号遥测系统的犬心血管病模型在筛选治疗心血管病的药物中的应用。所述心血管病可以是心肌缺血、高血压或心肌缺血并发高血压。
具体实施例方式以下结合具体的实施例来进一步说明本发明。应注意，下述实施例仅是示例性而非限制本发明。犬的许多特性和人比较接近。在本发明，采用犬作为模型动物。但应理解，可以采用其它常用动物，如兔、大鼠等。Beagle犬作为一个品系具有品种固定且优良、遗传性能稳定等特点，而且一般无遗传性疾患，在研究工作中重复性好且稳定，一直作为经典的实验动物适合药理、生理及外科学的研究。因此，在本发明中，具体采用Beagle犬作为模型动物。选择Beagle犬，等分成若干组，作为对照组和模型组。例如，选取30只健康的 Beagle犬(8 10kg)，雌雄各半，普通级动物房(温度18 ^°C、日温差彡5°C、相对湿度 40 70%、气流速度0. 1 0. 2 m/s、落下菌数彡30/皿、氨浓度彡14 mg/m3、噪声彡60 dB、照度150 3001x、昼夜明暗交替时间12h/12h)饲养14天。随机分成5组，但每组中犬均为雌雄各半，作为对照组1、对照组2、模型组1、模型组2，及模型组3。实施例1 在犬体内植入生物信号遥测系统
将对照组2、模型组1、模型组2，及模型组3的犬转移至手术室，手术室术前消毒，例如喷洒70 %乙醇。人退出后，整个手术室紫外灯照射1 2小时，上下午各1次。手术器械全部高压灭菌消毒(蒸汽压力108kPa，温度121°C，消毒45分钟)。动物麻醉后仰卧于手术台上，例如采用10%的乌拉坦将犬麻醉，于动物腹部额面3 5cm处，做一水平切口，切口深度以刚好放入生物信号遥测系统(传感器)为宜。于大腿内侧腹股沟处切开皮肤长约5cm， 钝性分离出股动脉，将传感器的血压传感导线插入股动脉。经皮下穿入导线套管，引导2根电极线到胸左侧切口外，胸右侧部标记处切一小口约1cm，导线套管由此切口穿入，经皮下下行到胸左侧切口穿出，引导1根电极线到胸右部上方切口外。伤口全部缝合好后用碘伏消毒伤口，肌肉注射抗生素，将动物移回犬舍等待苏醒。注意术后护理，手术存活率100%，3 周后可用于建立以下模型。实施例2 建立犬心肌缺血模型
在本发明中，可采用常用的结扎的方法建立犬心肌缺血模型。在上述经手术的模型组 1的犬手术3周后，采用10%的乌拉坦将上述模型组1的犬麻醉，背位固定，剪颈部毛后做气管插管，连接呼吸机，左侧第4肋间开胸术，维持正常呼吸，暴露心脏，剪开心包做心包床， 分离冠状动脉左前降支中段穿线结扎。依次缝合肌肉、皮下组织和皮肤，以碘酒和乙醇消毒手术伤口。手术存活率100%。分别测定对照组1、对照组2、和模型组1的犬结扎前后的心电图和心肌酶来评价建立的模型。其中心电图观察指标以心脏ST段升高或降低和心肌酶变化为指标。测量结果如下表1、表2所示。表1
权利要求
1.一种犬心血管病模型的建立方法，其特征在于，包括采用手术方法在犬体内植入生物信号遥测系统；以及在带有生物信号遥测系统的犬体内采用手术方法建立心血管病模型。
2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述心血管病是心肌缺血，所述建立方法包括在带有生物信号遥测系统的犬体内采用手术方法建立心肌缺血模型。
3.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述心血管病是高血压，所述建立方法包括在带有生物信号遥测系统的犬体内采用手术方法建立高血压模型。
4.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述心血管病是心肌缺血并发高血压，所述建立方法包括在带有生物信号遥测系统的犬体内采用手术方法建立心肌缺血并发高血压模型。
5.根据权利要求4所述的建立方法，其特征在于，所述建立方法包括在带有生物信号遥测系统的犬体内采用手术方法建立心肌缺血模型，以及在具有心肌缺血模型的犬体内再建立高血压模型以形成心肌缺血并发高血压模型。
6.根据权利要求2、4或5所述的建立方法，其特征在于，建立的心肌缺血模型通过测定心电图来评价，其中模型组和对照组的心脏ST段值的统计学中的P值< 0. 05。
7.根据权利要求6所述的建立方法，其特征在于，模型组和对照组的心脏ST段值的统计学中的卩值< 0.01。
8.根据权利要求6所述的建立方法，其特征在于，建立的心肌缺血模型通过测定心肌酶来评价，其中模型组和对照组的心肌酶值的统计学中的P值< 0. 05。
9.根据权利要求8所述的建立方法，其特征在于，模型组和对照组的心肌酶值的统计学中的卩值< 0.01。
10.根据权利要求2、4或5所述的建立方法，其特征在于，建立的心肌缺血模型通过测定心肌酶来评价，其中模型组和对照组的心肌酶值的统计学中的P值< 0. 05。
11.根据权利要求10所述的建立方法，其特征在于，模型组和对照组的心肌酶值的统计学中的卩值< 0.01。
12.根据权利要求3、4或5所述的建立方法，其特征在于，建立的高血压模型通过测定动脉压来评价，其中模型组和对照组的动脉压的统计学中的P值< 0. 05。
13.根据权利要求12所述的建立方法，其特征在于，模型组和对照组的动脉压的统计学中的卩值< 0.01。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的建立方法建立的犬心血管病模型在筛选治疗心血管病的药物中的应用，其特征在于，所述心血管病是心肌缺血、高血压或心肌缺血并发高血压。
全文摘要
本发明涉及一种犬心血管病模型的建立方法和应用，所述建立方法包括采用手术方法在犬体内植入生物信号遥测系统；以及在带有生物信号遥测系统的犬体内采用手术方法建立心血管病模型。采用本发明，不但可以有效、快捷地筛选化合物及研究其机理，发现目标化合物潜在的新的临床适应症，而且数据可信度高，与人的临床病症更加接近。
文档编号G01N33/15GK102274085SQ20111020466
公开日2011年12月14日 申请日期2011年7月21日 优先权日2011年7月21日
发明者宋浩亮 申请人:上海美迪西生物医药有限公司