专利名称：一种治疗风湿、中风类疾病的药物的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及来源于植物原料的医药制品的质量控制，具体涉及一种治疗风湿、中风类疾病的药物的质量控制方法。
背景技术：
治疗风湿、中风类疾病的药物的中药制剂，如云南金乌黑药制药有限公司的产品
三乌胶、三乌胶丸，该品种收载于“中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制剂第二十
ππ ” 册ο所述的治疗风湿、中风类疾病的药物的中药制剂是由如下重量配比的原料制备的生草乌900g 生川乌 600g 何首乌 450g附子(附片) 150g 生白附子 300g 乳香 30g冰糖90g 鲜猪蹄 500g。三乌胶依据中药命名原则，按处方中生草乌、生川乌和何首乌三味药材命名为“三乌”，因处方中辅料鲜猪蹄具有成胶的作用，制成的浸膏具有胶剂的性质，制成的制剂种类属于胶剂，因此命名为“三乌胶”。所述的中药制剂可以是以上述活性成分为原料制成的三乌胶、三乌胶丸或是其它剂型的产品。CN1265309A公开了该中药制剂的制备方法，其制备工艺成熟，疗效确切，安全可靠。目前的质量控制方法主要包括乌头碱限量和挥发性碱性物质，如“中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制剂第二十册”中规定的方法。乌头碱限量检测方法是精密称取5g，置具塞锥形瓶中，加氨试液5ml，搅拌成浆，加硅藻土 8g，研勻，加氯仿60ml，密塞， 放置过夜，超声处理15分钟，滤过，滤渣及滤器用氯仿20ml洗涤，合并氯仿液，置水浴上蒸干，继续蒸15分钟，残渣用无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取乌头碱对照品，力口无水乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μ 1、对照品溶液5μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G薄层板上，以环己烷-二乙胺(8 2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点ο临床应用证明，仅检测上述项目不能满足对制剂质量控制的要求。因此为了更好的控制所述治疗风湿、中风类疾病的药物的中药制剂的质量，为了对所述风湿、中风类疾病的药物的中药制剂的活性成分进行有效的监控，有关部门十分期望能够提出一种新的、更合理、科学的、有效的质量控制方法，以满足制药领域和临床应用的需要。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是公开一种治疗风湿、中风类疾病的药物的中药制剂的质量控制方法，以克服现有方法所存在的上述缺陷，满足需要。所述的风湿、中风类疾病的药物的中药制剂是由上述的8味原料制备的，如对制剂的全部指标成分含量进行测定，显然不利于实际的工业化生产，申请人认为，必须对其有选择的进行检测，为此，申请人提出了如下的技术方案(1)何首乌的指标成分含量测定方法；(2)产品中双酯型生物碱含量测定方法；(3)乳香的薄层色谱检测方法；(4)何首乌的薄层色谱检测方法；(5)挥发性碱性物质检测方法。本发明之所以选用如上的技术方案，主要因为运用这些技术方案，可以对该治疗风湿、中风类疾病的药物的中药制剂进行质量控制，确认该制剂中是否含有技术方案标定的药材，并且通过以上的至少二种技术方案组合，在质量控制方法中认定二个及二个以上的质量控制点，提高制剂的质量控制方法更好的对制剂质量进行控制。最佳技术方案是将以上所有的五种技术方案组合在一起，共同对制剂质量进行控制，可以对制剂从5个控制点进行质量监控。其中(1)何首乌的指标成分含量测定方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水 (20 80)为流动相；检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4 ‘-四羟基二苯乙烯-2-0-β -D-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2_0_ β-D-葡萄糖苷对照品适量，加稀乙醇制成每Iml含0. Img的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品研细，取约0. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚(30 60°C ) 15ml，密塞，超声处理5分钟，静置，弃去石油醚液，再同法处理一次，残渣微温挥干，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率25kHz) 15分钟， 放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。(2)产品中双酯型生物碱含量测定方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以0.04mol/L三乙胺 (磷酸调节PH =3.0)-甲醇(60 40)为流动相；检测波长235nm;柱温40°C。理论板数按乌头碱峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取新乌头碱、次乌头碱和乌头碱对照品适量，精密称定，力口 10%甲醇溶液(磷酸调PH = 2. 0)制成每Iml各含0. 05mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取本品研细，精密称取5g，加石油醚(30 60°C ) 15ml，超声处理5分钟，静置，倾去上清液，再同法处理一次，微温挥干，加氨试液5ml，混勻，加乙醚 30ml，密塞，超声处理(水温25°C以下)15分钟，放置过夜，分取乙醚液。残渣加乙醚30ml， 超声处理(水温25°C以下)15分钟，分取乙醚液。残渣加乙醚搅拌洗涤3次，每次15ml，合并乙醚液，40°C以下蒸干，残渣加10%甲醇溶液(磷酸调PH = 2. 0)使溶解成5ml，摇勻，即
5得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。(3)乳香的薄层色谱检测方法取本品研细，称取10g，置具塞锥形瓶中，加乙醚60ml，超声处理15分钟，分取乙醚液，滤过，滤液微温挥干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。取乳香对照药材 0. 25g，置具塞锥形瓶中，加乙醚30ml，密塞，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇Iml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述对照药材溶液2μ 1、供试品溶液6 10μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C)_苯-乙酸乙酯(10 1.5 1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。以此来判断制剂中是否含有乳香。(4)何首乌的薄层色谱检测方法取本品研细，称取10g，置具塞锥形瓶中，加乙醚60ml，超声处理15分钟，分取乙醚液，滤过，滤液微温挥干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。取何首乌对照药材0. 25g，同法制成对照药材溶液。取大黄素对照品，加无水乙醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液3 5 μ 1、对照药材溶液及对照品溶液各3μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(8 :2:1: 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为淡红色。以此来判断制剂中是否含有何首乌。(5)挥发性碱性物质检测方法取本品研细，精密称取0. 5g，置IOOml圆底烧瓶中，加水IOml使溶解，加0. IOg氧化镁粉，迅速密塞，混勻，通入水蒸气进行蒸馏，以2%硼酸溶液10ml，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液5滴为接收液，从滴出第1滴凝结水珠时起，蒸馏15分钟停止，馏出液照氮测定法(附录IX L 二法)滴定，即得。IOOg样品中挥发性碱性物质的含量以氮(N)计，不得过 60mg本发明采用中药的指标成分含量测定与薄层色谱检测方法相结合，达到控制及评价该中药制剂质量的目的。本发明所提供的方法对于该中药原有质量控制方法相比较，更为科学合理、有效。从操作上看，本发明提供的方法简单易行，准确可靠。精确度高，具有很高的实用价值。由于本发明采用了上述的方法，因此，可以大大提高有关产品的质量控制， 以确保产品的质量，能够满足有关方面对治疗风湿、中风类疾病的药物的质量监控的需要。
具体实施例方式实施例1三乌胶的检验供试品采用上述的8味药制制备的胶剂，云南金乌黑药制药有限公司生产。三乌胶的检验方法的具体操作过程如下
(1)何首乌的指标成分含量测定方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水 (20 80)为流动相；检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4 ‘-四羟基二苯乙烯-2-0-β -D-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2_0_β-D-葡萄糖苷对照品适量，加稀乙醇制成每Iml含0. Img的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品研细，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚 (30 60°C ) 15ml，密塞，超声处理5分钟，静置，弃去石油醚液，再同法处理一次，残渣微温挥干，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率25kHz) 15分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。检测结果如下三乌胶中每Ig含何首乌以2，3，5，4 ‘-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C2tlH32O9)计，4. 05mg/g。(2)产品中双酯型生物碱含量测定方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以0. 04mol/L三乙胺(磷酸调节PH = 3. 0)-甲醇(60 40)为流动相；检测波长235nm ；柱温40°C。理论板数按乌头碱峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取新乌头碱、次乌头碱和乌头碱对照品适量，精密称定，力口 10%甲醇溶液(磷酸调PH = 2. 0)制成每Iml各含0. 05mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取本品研细，精密称取5g，加石油醚(30 60°C ) 15ml，超声处理5分钟，静置，倾去上清液，再同法处理一次，微温挥干，加氨试液5ml，混勻，加乙醚 30ml，密塞，超声处理(水温25°C以下)15分钟，放置过夜，分取乙醚液。残渣加乙醚30ml， 超声处理(水温25°C以下)15分钟，分取乙醚液。残渣加乙醚搅拌洗涤3次，每次15ml，合并乙醚液，40°C以下蒸干，残渣加10%甲醇溶液(磷酸调PH = 2. 0)使溶解成5ml，摇勻，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。检测结果如下三乌胶中含双酯型生物碱以新乌头碱(C33H45NO11)、次乌头碱 (C33H45NO10)和乌头碱(C34H47NO11)的总量计，为 0.015%。(3)乳香的薄层色谱检测方法取本品研细，称取10g，置具塞锥形瓶中，加乙醚60ml，超声处理15分钟，分取乙醚液，滤过，滤液微温挥干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。取乳香对照药材 0. 25g，置具塞锥形瓶中，加乙醚30ml，密塞，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇Iml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述对照药材溶液2μ 1、供试品溶液6 10μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C)_苯-乙酸乙酯(10 1.5 1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)何首乌的薄层色谱检测方法取本品研细，称取10g，置具塞锥形瓶中，加乙醚60ml，超声处理15分钟，分取乙醚液，滤过，滤液微温挥干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。取何首乌对照药材0. 25g，同法制成对照药材溶液。取大黄素对照品，加无水乙醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液3 5 μ 1、对照药材溶液及对照品溶液各3μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(8 :2:1: 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为淡红色。(5)挥发性碱性物质检测方法取本品研细，精密称取0. 5g，置IOOml圆底烧瓶中，加水IOml使溶解，加0. IOg氧化镁粉，迅速密塞，混勻，通入水蒸气进行蒸馏，以2%硼酸溶液10ml，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液5滴为接收液，从滴出第1滴凝结水珠时起，蒸馏15分钟停止，馏出液照氮测定法(附录IX L 二法)滴定，即得。IOOg样品中挥发性碱性物质的含量以氮(N)计，不得过 IOOmg0检测结果如下20.25mg/100g实施例2三乌胶丸的检验供试品采用上述的8味药制制备的胶剂，云南金乌黑药制药有限公司生产，三乌胶的检验方法的具体操作过程如下(1)何首乌的指标成分含量测定方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水 (20 80)为流动相；检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4 ‘-四羟基二苯乙烯-2-0-β -D-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2_0_ β-D-葡萄糖苷对照品适量，加稀乙醇制成每Iml含0. Img的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品研细，取约0. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚(30 60°C ) 15ml，密塞，超声处理5分钟，静置，弃去石油醚液，再同法处理一次，残渣微温挥干，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率25kHz) 15分钟， 放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。检测结果如下三乌胶丸中每Ig含何首乌以2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2_0-β -D-葡萄糖苷(C2tlH22O9)计，4. 20mg/g。(2)产品中双酯型生物碱含量测定方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以0.04mol/L三乙胺 (磷酸调节PH =3.0)-甲醇(60 40)为流动相；检测波长235nm;柱温40°C。理论板数按乌头碱峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取新乌头碱、次乌头碱和乌头碱对照品适量，精密称定，力口10%甲醇溶液(磷酸调PH = 2. 0)制成每Iml各含0. 05mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取本品研细，精密称取5g，加石油醚(30 60°C ) 15ml，超声处理5分钟，静置，倾去上清液，再同法处理一次，微温挥干，加氨试液5ml，混勻，加乙醚30ml， 密塞，超声处理(水温25°C以下)15分钟，放置过夜，分取乙醚液。残渣加乙醚30ml，超声处理(水温25°C以下)15分钟，分取乙醚液。残渣加乙醚搅拌洗涤3次，每次15ml，合并乙醚液，40°C以下蒸干，残渣加10%甲醇溶液(磷酸调PH = 2. 0)使溶解成5ml，摇勻，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。检测结果如下三乌胶中含双酯型生物碱以新乌头碱(C33H45NO11)、次乌头碱 (C33H45NO10)和乌头碱(C34H47NO11)的总量计，为 0.010%。(3)乳香的薄层色谱检测方法取本品研细，称取10g，置具塞锥形瓶中，加乙醚60ml，超声处理15分钟，分取乙醚液，滤过，滤液微温挥干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。取乳香对照药材 0. 25g，置具塞锥形瓶中，加乙醚30ml，密塞，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇Iml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述对照药材溶液2μ 1、供试品溶液6 10μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C)_苯-乙酸乙酯(10 1.5 1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(4)何首乌的薄层色谱检测方法取本品研细，称取10g，置具塞锥形瓶中，加乙醚60ml，超声处理15分钟，分取乙醚液，滤过，滤液微温挥干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。取何首乌对照药材0. 25g，同法制成对照药材溶液。取大黄素对照品，加无水乙醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液3 5 μ 1、对照药材溶液及对照品溶液各3μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(8 :2:1: 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为淡红色。(5)挥发性碱性物质检测方法取本品研细，精密称取0. 5g，置IOOml圆底烧瓶中，加水IOml使溶解，加0. IOg氧化镁粉，迅速密塞，混勻，通入水蒸气进行蒸馏，以2%硼酸溶液IOml，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液5滴为接收液，从滴出第1滴凝结水珠时起，蒸馏15分钟停止，馏出液照氮测定法(附录IX L 二法)滴定，即得。IOOg样品中挥发性碱性物质的含量以氮(N)计，不得过 60mgo检测结果如下18.15mg/100g实施例3采用选择组合的方法，选取任意一批三乌胶、三乌胶丸进行检测，组合方式见下表 (表中V代表选中的质量控制方法，X代表未选中的质量控制方法)
权利要求
1.一种治疗风湿、中风类疾病的药物的质量控制方法，其特征在于包含以下检验方法中的至少二种(1)何首乌的指标成分含量测定方法；(2)产品中双酯型生物碱含量测定方法；(3)乳香的薄层色谱检测方法；(4)何首乌的薄层色谱检测方法；(5)挥发性碱性物质检测方法。
2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征是该药物制剂为以下活性成分重量配比为原料制备成的制剂生草乌 900g生川乌 600g何首乌 450g附子(附片)150g 生白附子300g乳香 30g冰糖90g鲜猪蹄 500g。
3.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征是所述制剂为三乌胶、三乌胶丸或由三乌胶活性成分为原料制成的其它制剂。
4.根据权利要求1-3所述的质量控制方法，其特征在于所述的何首乌指标成分含量测定方法为以2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C2tlH22O9)为含量控制指标，采用高效液相色谱法测定，其色谱条件为采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水(20:80)为流动相，检测波长为320nm;理论板数按2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-0-β -D-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。
5.根据权利要求1-3所述的质量控制方法，其特征在于所述的双酯型生物碱指标含量测定方法为以十八烷基键合硅胶为填充剂；以0. 04mol/L三乙胺(磷酸调节PH=3. 0)-甲醇(60:40)为流动相；检测波长235nm ；柱温40°C，理论板数按乌头碱峰计算应不低于 3000。
6.根据权利要求1-3所述的质量控制方法，其特征在于所述的乳香薄层色谱检测方法为用乳香对照药材参比的方法，其色谱条件为以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板为层析板，以60 90°C条件下的石油醚-苯-乙酸乙酯(10:1. 5:1.5)为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，105°C加热至斑点显色清晰；比较供试品色谱中与对照药材色谱，在相应的位置上是否显相同颜色的斑点，以此来判断是否含有乳香药材。
7.根据权利要求1-3所述的质量控制方法，其特征在于所述的何首乌薄层色谱检测方法为用何首乌对照药材参比的方法，其色谱条件为以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G 薄层板为层析板，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(8:2:1:0. 2)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，比较供试品色谱与对照药材色谱，在相应的位置上，是否显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为淡红色，以此来判断是否含有何首乌药材。
8.根据权利要求1-3所述的质量控制方法，其特征在于所述的挥发性碱性物质测定方法为精密称取0. 5g，置IOOml圆底烧瓶中，加水IOml使溶解，加0. IOg氧化镁粉，迅速密塞， 混勻，通入水蒸气进行蒸馏，以2%硼酸溶液10ml，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液5滴为接收液，从滴出第1滴凝结水珠时起，蒸馏15分钟停止，馏出液照氮测定法(附录IX L 二法)滴定，即得，IOOg样品中挥发性碱性物质的含量以氮(N)计，三乌胶不得过lOOmg，三乌胶丸不得过60mg。
全文摘要
本发明公开了一种治疗风湿、中风类疾病的药物的质量控制方法，采用中药的指标成分含量测定与薄层色谱检测方法相结合，达到控制及评价该中药制剂质量的目的。本发明提供的方法简单易行，准确可靠，精确度高，具有很高的实用价值。由于本发明采用了上述的方法，因此，可以大大提高有关产品的质量控制，以确保产品的质量，能够满足有关方面对治疗风湿、中风类疾病的药物的质量监控的需要。
文档编号G01N31/16GK102507781SQ201110352120
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月9日 优先权日2011年11月9日
发明者何继祥, 尹志安, 李应芬, 李社花, 李竹琼, 杨洪芳, 赵明顺, 赵晴芳 申请人:云南金乌黑药制药有限公司