专利名称：一种结核IgM抗体的快速检测试纸的制作方法
技术领域：
[0001]本实用新型涉及一种结核IgM抗体的快速检测试纸。
背景技术：
据世界卫生组织报道，全球已有近1/3的人口感染了结核菌，每年新发病人数有870万，死于结核病达200万例，全球目前有结核病2000万例。我国结核病人数居全球第二位，据卫生部2004年估计我国的结核病人为450万。据中国疾病预防和控制中心的数据显示，2005年2006年结核的新发病例数分别为125万113万。我国75%的肺结核病人年龄在15-54岁之间,给社会、家庭造成严重的经济负担；80%的肺结核病人在农村。每年约有13万人死于结核病，大大超过其他传染病死亡人数的总和。疫情在中西部地区最高。常用结核诊断技术中，主要方法是痰涂片染色镜检，结合X线胸片检查，辅以结核分枝杆菌培养确认。痰涂片阳性率低，检查敏感性差，分离培养结核杆菌周期过长，X线检查又往往缺乏特异性，难以满足临床需要。结核病的发生、发展及转归与机体的免疫功能密切相关。结核抗体反应是一种体液免疫，是由体内B细胞产生的免疫球蛋白。研究发现结核病人体液免疫水平是升高的，其增高的程度与病变活动程度成正比。病情越重，愈为明显，随病情好转而恢复。按照免疫反应的一般规律人体感染细菌后，首先产生的是IgM抗体，然后是IgG，理论上IgM早期抗体作为新近感染的指标。结核感染一般不同于呼吸道的其他急性感染，一般是个慢性的疾病过程，当出现临床症状或X线异常时，检测结核抗体IgG，亦已经转为阳性并维持较长的时问，此时IgM可能已转为阴性。由于结核病病程不同，体内产生体液免疫出现IgM、IgG的时间不同，因此应根据病程确定应该检测IgM或者IgG。由此看来，抗结核抗体IgM的检测在结核病早期诊断中有重要的参考意义，可作为一项主要诊断指标，也可作为结核抗体IgG的补充实验，提高检测的灵敏度。
实用新型内容为解决上述技术问题，本实用新型提供一种操作简便、快速、可用肉眼判断结果、稳定性好、便于推广、无需特殊精密仪器的结核IgM抗体的快速检测试纸，填补了以往只检测活动性结核抗体IgG的不足，为临床结核病早期诊断提供重要的参考价值。本实用新型的结核IgM抗体的快速检测试纸，包括粘贴在塑料支撑板上的硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的右端连接吸样垫，吸样垫的左端搭接在硝酸纤维素膜上，所述硝酸纤维素膜的左端连接含有标记抗人IgMu链单克隆抗体的胶体金垫，胶体金垫的右端搭接在硝酸纤维素膜上，胶体金垫的左端连接上样垫，上样垫的右端搭接在胶体金垫上，所述硝酸纤维素膜上的中部包被有混合抗原的检测线和羊抗鼠IgG抗体的质控线，质控线与检测线之间还设有用于标识加样位置的加样指示线。本实用新型的结核IgM抗体的快速检测试纸，所述加样指示线与质控线之间的距离为 2. 5_3mm。[0008]与现有技术相比本实用新型的有益效果为本实用新型的结核IgM抗体的快速检测试纸操作简便、快速、可用肉眼判断结果，具有稳定性好、便于推广、无需特殊精密仪器等特点，填补了以往只检测结核抗体IgG的不足，为临床结核病早期诊断提供重要的参考价值。
图I是本实用新型实施例所述的结核IgM抗体的快速检测试纸的结构示意图。图中I、塑料支撑板；2、硝酸纤维素膜；3、吸样垫；4、胶体金垫；5、上样垫；6、检测线； 7、质控线；8、加样指示线。
具体实施方式
以下结合附图和实施例，对本实用新型的具体实施方式
作进一步详细描述。以下实施例用于说明本实用新型，但不用来限制本实用新型的范围。如图I所示，一种结核IgM抗体的快速检测试纸，包括粘贴在塑料支撑板I上的硝酸纤维素膜2，硝酸纤维素膜2的右端连接吸样垫3，吸样垫3的左端搭接在硝酸纤维素膜2上，所述硝酸纤维素膜2的左端连接含有标记抗人IgMy链单克隆抗体的胶体金垫4，胶体金垫4的右端搭接在硝酸纤维素膜2上，胶体金垫4的左端连接上样垫5，上样垫5的右端搭接在胶体金垫4上，所述硝酸纤维素膜2上的中部包被有混合抗原的检测线6和羊抗鼠IgG抗体的质控线7，质控线7与检测线6之间还设有用于标识加样位置的加样指示线8。本实用新型的结核IgM抗体的快速检测试纸，所述加样指示线8与质控线7之间的距离为2. 5_3mm。本实用新型的结核IgM抗体的快速检测试纸，所述检测线6为包被在硝酸纤维素膜2上的38KD、16KDTB混合抗原，质控线7为包被在硝酸纤维素膜2上的羊抗鼠IgG抗体。本实用新型的结核IgM抗体的快速检测试纸具体使用时，胶体金垫采用以下方法制成以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30-50nm的胶体金溶液，0. 2MK2C03调节胶体金溶液的PH为8. 5-9. 5，然后置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每IOOml溶液含0. 5mg-3mg抗人IgMy链单克隆抗体缓慢滴加所述单抗至胶体金溶液中，室温搅拌I小时，加入BSA和PEG20000封闭，12000rpm离心，弃上清，沉淀加入保存液浓缩至原体积的1/10，用金标稀释液将浓缩胶体金稀释至不同浓度(5 %、10 %、15 %、20 % )，按每毫升金标稀释液铺22cm2的比例分别均匀地铺在无纺布上，再置干燥房(温度20-25°C，湿度在小于30%)干燥2-4小时。切成6mm胶体金条为胶体金垫。TB混合抗原的包被采用以下方式用0. OlM pH7. 2的PBS将TB抗原分别稀释成不同浓度，其中38KD抗原0. 4 0. 6mg/ml和16KD为0. 2 0. 4mg/ml,然后进行混合包被检测线6 ;同时包被羊抗鼠IgG抗体作为质控线7，包被标示加样位置的加样指示线。包被完成后干燥NC膜3 4小时。试纸的装配在干燥室内温度20 25°C，湿度小于30%，取塑料支撑板1，将已包被的硝酸纤维素膜2放置在塑料支撑板I的中部粘贴，在硝酸纤维素膜2的检测线6 —侧搭接胶体金垫4，在胶体金垫4另一侧搭接粘贴上样垫5 ;在硝酸纤维素膜2的质控线7 —侧距边缘搭接吸样垫3。然后用裁剪机将贴好的塑料板切成适当宽度的试纸条。切好的试纸条也可以装入塑料卡内，形成检测试剂卡。临床样本检测将制备好的试剂条平放，先在加样指示线8位置加入3_5ul待检样本，再加入适量稀释液，静置15分钟观察检测结果。只在试剂条质控线7位置有一条紫红色条带出现，则判读为阴性；在检测线6和质控线7均出现一条紫红色条带，则判读为阳性；检测线6和质控线7位置均不出现紫红色条带，则为无效结果。以上所述仅是本实用新型的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本实用新型的保护范围。
权利要求1.一种结核IgM抗体的快速检测试纸，包括粘贴在塑料支撑板⑴上的硝酸纤维素膜(2)，其特征在于所述硝酸纤维素膜(2)的右端连接吸样垫(3)，吸样垫(3)的左端搭接在硝酸纤维素膜(2)上，所述硝酸纤维素膜(2)的左端连接含有标记抗人IgMy链单克隆抗体的胶体金垫(4)，胶体金垫(4)的右端搭接在硝酸纤维素膜(2)上，胶体金垫(4)的左端连接上样垫(5)，上样垫(5)的右端搭接在胶体金垫(4)上，所述硝酸纤维素膜(2)的中部包被有混合抗原的检测线(6)和羊抗鼠IgG抗体的质控线(7)，质控线(7)与检测线(6)之间还设有用于标识加样位置的加样指示线(8)。
2.根据权利要求I所述的结核IgM抗体的快速检测试纸，其特征在于所述加样指示线(8)与质控线(7)之间的距离为2. 5-3mm。
专利摘要本实用新型涉及一种结核IgM抗体的快速检测试纸，包括粘贴在塑料支撑板上的硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的右端连接吸样垫，吸样垫的左端搭接在硝酸纤维素膜上，所述硝酸纤维素膜的左端连接含有标记抗人IgMμ链单克隆抗体的胶体金垫，胶体金垫的右端搭接在硝酸纤维素膜上，胶体金垫的左端连接上样垫，上样垫的右端搭接在胶体金垫上，所述硝酸纤维素膜上的中部包被有混合抗原的检测线和羊抗鼠IgG抗体的质控线，质控线与检测线之间还包被有加样指示线。本实用新型的检测试纸操作简便、快速、可用肉眼判断结果，具有稳定性好、便于推广、无需特殊精密仪器等特点，填补了以往只检测结核抗体IgG的不足，为临床结核病早期诊断提供重要的参考价值。
文档编号G01N33/577GK202421187SQ20112053385
公开日2012年9月5日 申请日期2011年12月19日 优先权日2011年12月19日
发明者李洲, 许俊艳 申请人:天津中新科炬生物制药有限公司