用于他汀引发的肌肉毒性的灵敏检测的生物标志物的制作方法
【专利摘要】本发明特别提供了通过检测生物样品的脂质浓度或脂质比率并将其与对照比较从而预测他汀引发的肌肉毒性或其并发症(例如肌痛、肌病和横纹肌溶解)的方法，以及所述方法的应用。所述方法已经鉴定出在检测这些他汀引发的肌肉毒性方面比当前应用的临床标志物更具特异性和灵敏度的脂质标志物。本发明还提供了针对所述脂质的抗体，以及所述抗体在预测、诊断他汀引发的肌肉毒性中的应用。本发明另外涉及包含脂质和/或其抗体的试剂盒，所述试剂盒用于预测和/或诊断他汀引发的肌肉毒性。
【专利说明】用于他汀引发的肌肉毒性的灵敏检测的生物标志物
【技术领域】
[0001]本发明涉及预测或诊断他汀引发的肌肉毒性的涉及脂质水平的方法和应用。本发明特别适用于确定受试对象是否需要调整他汀治疗和用于评估新降脂药引起的肌肉毒性。所述方法包括分析生物样品的脂质水平，并将其与对照比较。
【背景技术】
[0002]他汀目前是最广泛使用的降脂药，这是因为他汀将不同患者群的严重心血管端点事件(心血管死亡、心肌梗塞和中风)降低了 25%至35%。这些群体包括患有稳定或不稳定的冠心病、糖尿病的群体和带有其他风险因素的高血压患者。通常，虽然会发生肌肉、肝脏和胃肠道的副作用，但他汀耐受良好。他汀可与多种肌肉副作用相关联，从非特异性或非典型的肌痛到肌病和晚期横纹肌溶解综合征。
[0003]将肌痛定义为肌肉疼痛或肌肉酸痛的不适，其可以是全身性的，或者是局部的。这种症状可在高达10%的患者中发生，可迫使医师降低剂量、采用试错法更换为其他他汀或完全终止药物治疗。这些肌肉症状也可以导致相对高比例的患者在治疗的头2年中停止他汀治疗。因此，甚至更多的良性肌肉症状可具有重要后果并限制了这些药剂所可能带来的较大临床和社会经济效益。
[0004]肌病虽然危害小于横纹肌溶解，但还能够在他汀治疗之后发生，其被定义为肌肉疼痛和/或衰弱，肌酸激酶(CK)水平比正常上限升高至少10倍。肌病的发病率为约1%至5%。他汀相关的肌肉毒性的已知的诱病风险因素包括肾功能不全、甲状腺机能减退、遗传性或获得性肌肉疾病、其他他汀或贝特类药物(fibrate)引起的肌肉毒性的病史、纤维酸(fibric acid)衍生物的同时使用、酒精滥用、可能发生他汀血浆水平升高的临床情况以及亚洲血统(Asian ancestry)。
[0005]横纹肌溶解是罕见事件(远低于0.1%的他汀使用者)，但构成了威胁生命的病况，特征为严重的肌肉毒性、血浆肌酸激酶(CK)水平的大幅升高(超过10，000U/L)和肌红蛋白毒性继发的肾功能不全。横纹肌溶解已引起了数例患者死亡并且已经导致一种他汀西立伐他汀(Bayco I，Bayer)的撤市。另一种HMG-CoA还原酶抑制剂辛伐他汀(Zocor’Merck&C0.)在以高剂量施用时(A至Z试验)最近也显示出使横纹肌溶解的发病率升高。
[0006]目前，采用血浆/血清肌酸激酶(CK)测定作为他汀引发的肌肉毒性的生物标志物。对于大多数病例，即使出现了症状，CK测定仍然不能提供充分信息。血浆/血清CK是非特异性标志物，这是因为其可由于包括锻炼在内的多种其他原因而升高。更大的局限是其灵敏度差，因为其仅在涉及CK从组织渗漏到血浆中的对肌肉细胞的实际损害发生后才给出提示。因此，对于这一问题理所当然需要开发用于诊断他汀引发的肌肉毒性的新的生物标志物。在组织病理学研究中对于从急性肌肉疼痛期间患者获得的肌肉试样的早期石开究(Phillips PS 等:“Statin-associated myopathy with normal creatine kinaselevel.’’Ann Intern Med.2002octl; 137 (7): 581-5)已经例如证明 了炎性细胞的累积。[0007]人体内脂质介体的数量很多。已经尝试通过质谱法和脂质生物化学的进展来辅助对这些介体的鉴定和定量，现在能够同时对统称为脂质组的数个脂质类别中的数百种分子脂质物质进行高通量鉴定和定量(Ejsing CS,等:Global analysisof the yeast lipidome by quantitative gunshot mass spectrometry.Proc NatlAcad Sci U S A2009,106:2136-2141;Stahlman M,等:High-throughput gunshotlipidomics by quadrupole time-of-flight mass spectrometry.J Chromatogr BAnalyt Technol Biomed Life Sci2009Hiukka A,等:ApocII1-enriched LDL intype2diabetes displays altered lipid composition, increased susceptibility forsphingophosphase, and increased binding to biglycan.Diabetes2009, 58:2018-2026;Linden D,等:Liver-directed overexpression of mitochondrial glycero 1-3-phosphateacyItransferase results in hepatic steatosis, increased triacylglycerolsecretion and reduced fatty acid oxidation.FASEB J2006, 20:434-443.)。脂质组学研究已经试图鉴定脂质细胞分布并描述其生物化学机理、相互作用和动力学。脂质组学原则上能够对脂质组的确切化学组成进行定量(Han X, Gross Rff:Global analyses ofcellular lipidomes directly from crude extracts of biological samples by ESImass spectrometry:a bridge to lipidomics.J Lipid Res2003, 44:1071-1079)。
[0008]现有技术中大量脂质数据表示了总和组成形式的脂质，即，磷脂酰胆碱(PC) 34:1 (Brugger B,等:Quantitative analysis of biological membrane lipidsat the low picomole level by nano-electrospray ionization tandem massspectrometry.Proc Natl Acad Sci U S A1997, 94:2339-2344),其中分子脂质和所连接的脂肪酸尾仍未被鉴定。分子脂质物质的鉴定，例如PC16:0/18:1 (Ekroos K,等:Chartingmolecular composition of phosphatidylcholines by fatty acid scanning and iontrap MS3fragmentation.J Lipid Res2003, 44:2181-2192)是高级脂质组学中的主要特征，其给出了高分辨的分子脂质物质，而不是总的脂肪酸信息。例如，揭示了脂肪酸种类及其与构成具体PC分子的甘油骨架的连接位置的信息。已有如薄层色谱结合气相色谱等常规技术，但这些常规技术不仅需要相当大的样品量和费力的样品制备，它们还不能给出分子脂质物种。虽然多种质谱技术能够表征脂质实体，但其中大多数技术在绝对或接近绝对浓度方面仍不能给出可靠的高质量定量数据。
[0009]需要用于检测和诊断他汀引发的肌肉毒性的特异性且可靠的方法，以及用于这方面的标志物。还需要改进他汀或降脂药的现有的治疗方案。
【发明内容】
[0010]本发明特别提供用于检测和诊断他汀引发的肌肉毒性的新型脂质组学标志物，所述他汀引发的肌肉毒性是诸如与肌肉疾病、肌营养不良、肌痛、肌炎、肌病或横纹肌溶解相关的他汀引发的肌肉毒性。
[0011]在本发明的一个方面，本文特别公开和/或要求保护用于检测与从非特异性或非典型的肌痛到肌病和晚期横纹肌溶解综合征的他汀相关的肌肉副作用的方法、脂质组学标志物、诸如抗体等试剂以及试剂盒。肌痛被定义为肌肉疼痛或肌肉酸痛的不适，其可以是全身性的，或者是局部的。肌病危害小于横纹肌溶解，但还能够在他汀治疗之后发生，其被定义为肌肉疼痛和/或衰弱，CK水平比正常上限升高至少10倍。
[0012]本发明的方法可以包括例如以下步骤:a)提供来自正在进行他汀治疗、待进行他汀治疗或已经进行过他汀治疗的受试对象的生物样品；b)确定所述样品中的根据本发明在此鉴定为有用的脂质组学标志物的一种或多种脂质的浓度和/或一种或多种脂质比率；和c)将所确定的所述脂质浓度和/或脂质比率与对照中的相应脂质浓度和/或脂质比率进行比较。
[0013]本发明的脂质组学标志物使得能够灵敏检测他汀引发的肌肉毒性。应当意识到的是，所述脂质组学标志物同样适用于他汀引发的肌肉毒性的并发症。这有助于改善患者护理、减轻疾病症状发展和痛苦、并实现与他汀副作用相关的发病率/死亡率的降低。因此，本文所述并要求保护的脂质组学标志物使得能够对以他汀治疗或待以他汀治疗的患者实现个体定制的药物干预。另外，本发明可用于测试他汀和他汀样化合物的动物实验。本发明特别会对所要进行的新型脂质降低药物治疗做出更好的安全性评估。
[0014]因此，此处特别提供了用于确定受试对象是否罹患或有风险发展他汀引发的肌肉毒性和/或一种或多种其并发症的方法，所述方法包括:确定来自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质的浓度，其中，与对照相比时所述样品中的浓度升高或降低表明所述受试对象罹患所述他汀引发的肌肉毒性和/或所述并发症，其中与对照相比其浓度升高的一种或多种脂质选自表2:12-HETE、15-HETE、13-H0DE、PE P-18:0/20:4, PE 0-18:1/20:4, LacCer(dl8:1/22:O)、LacCer(dl8:1/20: O)、PE18:0/20:4、Cer (dl8:1/18:0)、LacCer (dl8:1/24:0)、Cer (dl8:1/20:0)、PC16:0/20:3，、AA、Cer(dl8:l/24:1)、Cer (dl8:1/26:1)、Glc/GalCer (dl8:1/24:1)、Cer (dl8:1/22:0)、Glc/GalCer(dl8:1/18:0)、Cer(dl8:1/16:0)、LacCer(dl8:1/24:1)、SM(dl8:1/14:0)(dl8:1/13:1-OH)、LacCer (dl8:1/16:0)、CE18:3 和 PC16:0/20:4 ;并且，其中与对照相比其浓度降低的一种或多种脂质选自表2中的脂质:ll_12-DHET、14_15-DHET、5-HETrE、5-HETE和 8_9-DHET。
[0015]在优选的实施方式中，与对照相比其浓度升高的一种或多种脂质选自表5中的脂质:12-HETE、15-HETE、PE P_18:0/20:4、PE 0-18:1/20:4, LacCer (dl8:1/22:0)和Cer(dl8:1/18:0)。
[0016]在另一优选的实施方式中，与对照相比其浓度降低的一种或多种脂质选自表5中的脂质:5-HETE 和 8_9-DHET。
[0017]在替代性实施方式中，本发明涉及用于确定受试对象是否罹患或有风险发展他汀引发的肌肉毒性和/或一种或多种其并发症的方法，所述方法包括:确定来自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质比率，其中，与对照相比时所述样品中的脂质比率升高或降低表明所述受试对象罹患所述他汀引发的肌肉毒性和/或所述并发症，其中与对照相比升高的一种或多种脂质比率选自表4中的脂质比率:12-HETE/5-HETrE、12-HETE/8_9-DHET、12-HETE/5-HETE、12-HETE/14_15-DHET、12-HETE/CE20:4、12-HETE/15-HETrE、12-HETE/LPC16: O、15-HETE/8_9_DHET、12-HETE/5-HEPE、12-HETE/PC18:0/18:2、12-HETE/CK、15-HETE/5-HETE、12-HETE/CE18:3、13-H0DE/8_9_DHET 和15-HETE/15-HETrE ;其中与对照相比降低的一种或多种脂质比率选自表4中的脂质比率:I1_12-DHET/CE18:2、14_15_DHET/CE18:2、Il_12-DHET/LacCer(dl8:1/24:0)、I1_12_DHET/Cer(dl8:1/16:0)、5_HETE/CE20:4、14_15_DHET/LacCer(dl8:1/22:0)、14_15_DHET/Glc/GalCer(dl8:1/18:0),15-HETrE/LacCer(dl8:1/22:0),1l_12-DHET/Cer (dl8:1/20:0),5-HETE/CE18:2、5-HETE/CE18:1、8_9-DHET/CE18:2、8_9-DHET/CE18:1、8_9-DHET/CE22:6、14_15-DHET/Cer(dl8:1/18:0)、5_HETE/LacCer(dl8:1/24:1)、8_9_DHET/CE16:0、5-HETE/Glc/GalCer(dl8:1/18:0)、8_9_DHET/Cer(dl8:1/26:0)、8_9_DHET/LacCer(dl8:1/16:0)、5-HETE/9-HODE、8_9-DHET/Cer(dl8:1/16:0)、8_9_DHET/Cer(dl8:1/26:1)、8_9_DHET/Glc/GalCer(dl8:1/18:0)、I1_12-DHET/I2-HETE,8_9-DHET/9-HODE,5-HETE/Cer(dl8:1/18:0)、8_9-DHET/AA、5-HETE/PC16:0/20:3、8_9-DHET/Cer(dl8:1/24:1)、8_9_DHET/CE16:1、
I1-HETE/I2-HETE,8_9-DHET/Cer(dl8:1/20:0)、8_9_DHET/PC16:0/20:3 和 8_9_DHET/Cer(dl8:1/18:0)。
[0018]在优选的实施方式中，与对照相比升高的一种或多种脂质比率选自表6中的脂质比率:12-HETE/5-HETrE、12-HETE/5-HETE、12-HETE/CE20:4、12-HETE/15-HETrE、12-HETE/LPC16:O、15-HETE/8_9-DHET、12-HETE/CK,13-H0DE/8_9_DHET and15-HETE/15-HETrE?
[0019]在另一优选的实施方式中，与对照相比降低的一种或多种脂质比率选自表6 中的月旨质比率:11_12-DHET/Cer(dl8:l/16:0)、5-HETE/CE18:2、8_9-DHET/CE18:1、8_9-DHET/LacCer(dl8:1/16:0)、5-HETE/9-H0DE、8_9-DHET/Glc/GalCer(dl8:1/18:0)、5-HETE/Cer(dl8:1/18:0)、8_9_DHET/Cer(dl8:1/24:1)、11-HETE/12-HETE 和 8_9_DHET/Cer(dl8:1/18:0)。
[0020]在又一替代性实施方式中，本发明涉及用于确定受试对象是否罹患或有风险发展他汀引发的肌肉毒性和/或一种或多种其并发症的方法，所述方法包括确定来自所述受试对象的样品中的脂质标志物组合中的一种或多种脂质浓度和一种或多种脂质比率，其中所述脂质标志物组合包括表2、5或7的至少一种脂质和表4或6的至少一种脂质比率，其中与对照相比时所述样品中所述脂 质的浓度升高或降低和/或所述脂质比率的升高或降低表明所述受试对象罹患所述他汀引发的肌肉毒性和/或所述并发症。改变方向(降低或升高)如表2、4、5、6和7所示。
[0021]在优选的实施方式中，根据本发明的任何方法确定的脂质浓度是表7中鉴定的任何脂质组合中的脂质浓度。
[0022]在另一方面，本发明涉及用于确定受试对象的他汀治疗和/或降脂药治疗是否需要调整的方法，所述方法包括确定来自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质的浓度，其中，与对照相比时所述样品中的浓度升高或降低表明所述治疗需要调整，其中与对照相比其浓度升高的一种或多种脂质选自表2中的脂质:12-HETE、15-HETE、13-H0DE、PE P-18:0/20: 4、PE 0-18:1/20: 4、LacCer (dl8:1/22:0)、LacCer (dl8:1/20:0)、PE18:0/20:4, Cer (dl8:1/18:0)、LacCer (dl8:1/24:0)、Cer (dl8:1/20:0)、PC16:0/20:3、AA、Cer(dl8:l/24:1)、Cer (dl8:1/26:1)、Glc/GalCer (dl8:1/24:1)、Cer (dl8:1/22:0)、Glc/GalCer(dl8:1/18:0)、Cer (dl8:1/16: 0)、LacCer (dl8:1/24:1)、SM(dl8:1/14:0)(dl8:1/13:1-OH)、LacCer (dl8:1/16:0)、CE18:3 和 PC16:0/20:4 ；并且其中与对照相比其浓度降低的一种或多种脂质选自表2中的脂质:11_12-DHET、14_15-DHET、5-HETrE、5-HETE和 8_9-DHET。
[0023]在优选的实施方式中，与对照相比其浓度升高的一种或多种脂质选自表5中的脂质:12-HETE、15-HETE、PE P-18:0/20:4, PE 0-18:1/20:4, LacCer (dl8:1/22:0)和Cer(dl8:1/18:0)。
[0024]在另一优选的实施方式中，与对照相比其浓度降低的一种或多种脂质选自表5中的脂质:5-HETE 和 8_9-DHET。
[0025]在替代性实施方式中，本发明涉及用于确定受试对象的他汀治疗或降脂药治疗是否需要调整的方法，所述方法包括确定来自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质比率，其中，与对照相比时所述样品中的脂质比率升高或降低表明所述治疗需要调整，其中与对照相比升高的一种或多种脂质比率选自表4中的脂质比率:12-HETE/5-HETrE、12-HETE/8_9_DHET、12-HETE/5-HETE、12-HETE/14_15_DHET、12-HETE/CE20:4、12-HETE/15-HETrE、12-HETE/LPC16:0、15-HETE/8_9_DHET、12-HETE/5-HEPE、
12-HETE/PC18:0/18:2、12-HETE/CK、15-HETE/5-HETE、12-HETE/CE18:3、13-H0DE/8_9_DHET和15-HETE/15-HETrE ;并且其中与对照相比降低的一种或多种脂质比率选自表4中的脂质比率:ll_12-DHET/CE18:2、14_15-DHET/CE18:2、ll_12-DHET/LacCer(dl8:l/24:0)、Il_12-DHET/Cer(dl8:1/16:0)、5-HETE/CE20:4、14_15_DHET/LacCer(dl8:1/22: O)、14_15-DHET/Glc/GalCer(dl8:1/18:0)、15-HETrE/LacCer(dl8:1/22:0),11_12_DHET/Cer (dl8:1/20:0)、5_HETE/CE18:2、5_HETE/CE18: 1、8_9_DHET/CE18:2、8_9_DHET/CE18:1、8_9-DHET/CE22:6、14_15_DHET/Cer(dl8:1/18:0)、5_HETE/LacCer(dl8:1/24:1)、8_9-DHET/CE16:0、5-HETE/Glc/GalCer(dl8:1/18:0)、8_9_DHET/Cer(dl8:1/26:0)、8_9-DHET/LacCer(dl8:1/16:0)、5-HETE/9-H0DE、8_9_DHET/Cer(dl8:1/16:0)、8_9_DHET/Cer (dl8:1/26:1)、8_9_DHET/Glc/GalCer (dl8:1/18:0)、11_12-DHET/12-HETE、8_9-DHET/9-H0DE、5-HETE/Cer(dl8:1/18:0)、8_9_DHET/AA、5-HETE/PC16:0/20:3、8_9-DHET/Cer(dl8:1/24:1)、8_9_DHET/CE16: 1、11-HETE/12-HETE、8_9_DHET/Cer (dl8:1/20:0)、8_9_DHET/PC16:0/20:3 和 8_9-DHET/Cer(dl8:1/18:0)。
[0026]在优选的实施方式中，与对照相比升高的一种或多种脂质比率选自表6中的脂质比率:12-HETE/5-HETrE、12-HETE/5-HETE、12-HETE/CE20:4、12-HETE/15-HETrE、12-HETE/LPCI6:0、15-HETE/8_9-DHET、12-HETE/CK、13-H0DE/8_9_DHET 和 15-HETE/15_HETrE。
[0027]在另一优选的实施方式中，与对照相比其浓度降低的一种或多种脂质选自表 6 中的脂质比率:11_12-DHET/Cer(dl8:l/16:0)、5-HETE/CE18:2、8_9-DHET/CE18:1、8_9-DHET/LacCer(dl8:1/16:0)、5-HETE/9-H0DE、8_9-DHET/Glc/GalCer(dl8:1/18:0)、5-HETE/Cer(dl8:1/18:0)、8_9_DHET/Cer(dl8:1/24:1)、I1-HETE/12-HETE 和 8_9_DHET/Cer(dl8:1/18:0)。
[0028]同样，在优选的实施方式中，根据本发明的任何方法确定的脂质浓度是表7中鉴定的任何脂质组合的脂质浓度。
[0029]在又一替代性实施方式中，本发明涉及用于确定受试对象的他汀治疗或降脂药治疗是否需要调整的方法，所述方法包括确定来自所述受试对象的样品中的脂质标志物组合中的一种或多种脂质浓度和一种或多种脂质比率，其中所述脂质标志物组合包括表2、5或7中的至少一种脂质和表4或6中的至少一种脂质比率，其中与对照相比时所述样品中所述脂质的浓度升高或降低和/或所述脂质比率的升高或降低表明所述治疗需要调整。改变方向(降低或升高)如表2、4、5、6和7所示。[0030]出于确定受试对象的他汀治疗或降脂药治疗是否需要调整的方法的目的，所述他汀治疗的调整可包括(a)他汀剂量的减少；(b)他汀治疗的停止；(c)他汀治疗的重新开始；(d)更换为不同的他汀药；(e)更换为不同的降脂药或(f)因与一种或多种他汀相互作用而导致肌肉毒性的另一种药治疗的停止。
[0031]在另一实施方式中，本发明的方法可用于评估正接受新型他汀或脂质降低药物治疗的受试对象中由所述他汀或脂质降低药物引起的肌肉毒性的程度。
[0032]本发明的方法可用于确定所述所述受试对象中肌肉毒性的早期警示征兆。
[0033]另外，或作为另一种选择，所述方法可用于确定受试对象中发现的肌肉毒性的症状是否由他汀引发的肌肉毒性引起。
[0034]对于本发明的方法，可以确定表2、4、5、6或7中的至少一种脂质浓度或脂质比率或其组合，从而评估受试对象是否罹患或有风险发展他汀引发的肌肉毒性和/或一种或多种其并发症；或从而确定受试对象的他汀治疗或降脂药治疗是否需要调整。不过，还可以(并且可能有利的是)确定表2、4、5、6或7中的至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7或至少8种所述脂质浓度或脂质比率或其组合。同样，如上所述，可能有利的是确定表7中鉴定的脂质组合中的脂质的浓度。还可能有用的是进行上述确定的组合，例如，来确定表
2、5或7中至少一种脂质的浓度，和进一步确定表4或6中至少一种比率。当确定多于一种脂质组学标志物并用于评估时，可能有利的是在上述评估中特定的脂质浓度或脂质比率或特定的其组合以高于其它的权重给出。
[0035]本发明的方法包括确定正用一种或多种他汀治疗的受试对象的样品中的脂质浓度或脂质比率。
[0036]作为选择，本发明的方法包括确定曾用他汀治疗但例如由于肌肉疼痛的发作而中断所述治疗的受试对象的样品中的脂质浓度或脂质比率。
[0037]在另一替代性方案中，本发明的方法包括确定未曾接受过他汀治疗的受试对象的样品中的脂质浓度或脂质比率。
[0038]本发明的方法还可以包括确定来自有高风险发展他汀引发的肌肉毒性和/或一种或多种其并发症的受试对象的样品中的脂质浓度或脂质比率。
[0039]为了本发明的方法的目的，进行受试对象的样品相对于对照的比较。
[0040]在优选的实施方式中，所述对照例如是对照样品，优选与受试对象的样品对应的对照样品。
[0041]在优选的实施方式中，对照样品来自进行他汀治疗但在肌肉毒性发作之前的同一受试对象。不过，对照也可以是来自进行他汀治疗之前或在他汀治疗中断过程中的同一受试对象的样品。在另一优选的实施方式中，对照还可以来自没有他汀引发的肌肉毒性的征兆或历史的另一受试对象。
[0042]在另一优选的实施方式中，所述对照是来自没有他汀引发的肌肉毒性的征兆或历史的受试对象群体的对照样品。
[0043]不过，在又一优选实施方式中，所述对照不是样品，而仅是由未处于他汀治疗并且没有肌肉毒性的征兆或历史的一个或多个受试对象建立的对照值。作为选择，对照可以有利的是由进行他汀治疗并且没有肌肉毒性的征兆或历史的一个或多个受试对象建立的对照值。[0044]根据本发明，将来自受试对象的所述样品中各脂质浓度或脂质比率优选与对照中的相应脂质的浓度或相应脂质比率相比较，只要其为用于确定受试对象是否罹患或有风险发展他汀引发的肌肉毒性(和/或一种或多种其并发症)，或确定受试对象的他汀治疗或降脂药治疗是否需要调整的对照样品或对照值。可以在受试对象的样品和对照之间进行的比
较的一些说明性实例如下表所示:
[0045]
【权利要求】
1.一种用于确定受试对象是否罹患或有风险发展他汀引发的肌肉毒性和/或一种或多种其并发症的方法，所述方法包括: (a)确定来自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质的浓度，其中，与对照相比时所述样品中的浓度升高或降低表明所述受试对象罹患所述他汀引发的肌肉毒性和/或所述并发症，其中与所述对照相比其浓度升高的一种或多种脂质选自:
12-HETE、15-HETE、PE P-18:0/20:4、PE 0-18:1/20: 4、LacCer(dl8:1/22:O)和Cer(dl8:1/18:0)； 并且其中与所述对照相比其浓度降低的一种或多种脂质选自:
5-HETE 和 8_9-DHET ； (b)确定来自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质比率，其中，与对照相比时所述样品中的脂质比率升高或降低表明所述受试对象罹患所述他汀引发的肌肉毒性和/或所述并发症，其中与对照相比升高的一种或多种脂质比率选自:
12-HETE/5-HETrE、12-HETE/5-HETE、12-HETE/CE20:4、12-HETE/15_HETrE、12-HETE/LPC16:0、15-HETE/8_9-DHET、12-HETE/CK、13-H0DE/8_9-DHET 和 15-HETE/15_HETrE ； 并且其中与所述对照相比降低的一种或多种脂质比率选自:
Il_12-DHET/Cer(dl8:1/16:O)、5-HETE/CE18:2、8_9_DHET/CE18: 1、8_9_DHET/LacCer(dl8:1/16:0)、5-H ETE/9-H0DE、8_9_DHET/Glc/GalCer(dl8:1/18:0),5-HETE/Cer(dl8:1/18:0)、8_9_DHET/Cer(dl8:1/24:1)、11-HETE/12-HETE 和 8_9_DHET/Cer (dl8:1/18:0);或 (c)确定来自所述受试对象的样品中的脂质标志物组合中的一种或多种脂质浓度和一种或多种脂质比率，其中所述脂质标志物组合包括权利要求1的(a)中的至少一种脂质和权利要求1的(b)中的至少一种脂质比率， 其中与对照相比时所述样品中所述脂质的浓度升高或降低和/或所述脂质比率的升高或降低表明所述受试对象罹患所述他汀引发的肌肉毒性和/或所述并发症。
2.一种用于确定受试对象的他汀和/或降脂药治疗是否需要调整的方法，所述方法包括 (a)确定来自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质的浓度，其中，与对照相比时所述样品中的浓度升高或降低表明所述治疗需要调整， 其中与对照相比其浓度升高的一种或多种脂质选自: 12-HETE、15-HETE、PE P-18:0/20:4、PE 0-18:1/20:4、LacCer(dl8:1/22:O)和Cer(dl8:1/18:0)； 并且其中与对照相比其浓度降低的一种或多种脂质选自:
5-HETE 和 8_9-DHET ； (b)确定来自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质比率，其中，与对照相比时所述样品中的脂质比率升高或降低表明所述治疗需要调整， 其中与对照相比升高的一种或多种脂质比率选自:
12-HETE/5-HETrE、12-HETE/5-HETE、12-HETE/CE20:4、12-HETE/I5-HETrE,12-HETE/LPC16:0、15-HETE/8_9-DHET、12-HETE/CK、13-H0DE/8_9-DHET 和 15-HETE/15_HETrE ； 并且其中与对照相比降低的一种或多种脂质比率选自:Il_12-DHET/Cer(dl8:1/16:0)、5-HETE/CE18:2、8_9_DHET/CE18: 1、8_9_DHET/LacCer(dl8:1/16:0)、5-HETE/9-HODE、8_9_DHET/Glc/GalCer(dl8:1/18:0),5-HETE/Cer(dl8:1/18:0)、8_9_DHET/Cer(dl8:1/24:1)、11-HETE/12-HETE 和 8_9_DHET/Cer (dl8:1/18:0);或 (c)确定来自所述受试对象的样品中的脂质标志物组合中的一种或多种脂质浓度和一种或多种脂质比率，其中所述脂质标志物组合包括权利要求1的(a)中的至少一种脂质和权利要求1的(b)中的至少一种脂质比率， 其中与对照相比时所述样品中所述脂质的浓度升高或降低和/或所述脂质比率的升高或降低表明所述治疗需要调整。
3.如权利要求2所述的方法，其中，所述他汀和/或降脂药治疗的调整包括， (a)他汀剂量的减少； (b)他汀治疗的停止； (C)他汀治疗的重新开始； (d)更换为不同的他汀药； (e)更换为不同的降脂药；或 (f)因与一种或多种他汀相互作用而导致肌肉毒性的另一种药治疗的停止。
4.如权利要求1所述的方法，其中，所述方法用于评估正接受新型他汀或脂质降低药物治疗的受试对象中由所述他汀或脂质降低药物引起的肌肉毒性的程度。`
5.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述方法用于 (a)确定所述受试对象中肌肉毒性的早期警示征兆，和/或 (b)确定受试对象中发现的肌肉毒性的症状是否由他汀引发的肌肉毒性引起。
6.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法包括确定 (a)所述脂质浓度和/或脂质比率中的至少2种、至少3种、至少4种或至少5种；和/或 (b)与对照相比任何以下脂质组合中的脂质的浓度有以下改变:
(i)升高:15-HETE、Cer(dl8:1/18:0)、Cer (dl8:1/22:0),降低:15-HETrE、9_HODE 和5-HETE;
(ii)升高:15-HETE,降低:8_9_DHET和 15-HETrE ;或 (iii)升高:15-HETE，降低:8_9_DHET。
7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中 (a)所述受试对象正用一种或多种他汀治疗； (b)所述受试对象曾接受他汀治疗，但由于肌肉疼痛的发作而中断所述治疗；或 (C)所述受试对象尚未用他汀治疗。
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述受试对象有高风险发展他汀引发的肌肉毒性和/或一种或多种其并发症。
9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，与其进行比较的所述对照是: (a)来自接受他汀治疗的同一受试对象在肌肉毒性发作之前的对照样品； (b)来自同一受试对象在他汀治疗之前或者在他汀治疗中断期间的对照样品； (C)来自无他汀引发的肌肉毒性的征兆或历史的受试对象的对照样品；(d)来自无他汀引发的肌肉毒性的征兆或历史的受试对象群体的对照样品； (e)由未处于他汀治疗并且无肌肉毒性的征兆或历史的一个或多个受试对象建立的对照值；或 (f)由处于他汀治疗并且无肌肉毒性的征兆或历史的一个或多个受试对象建立的对照值。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括确定或评估所述受试对象中或来自所述受试对象的样品中的肌酸激酶的水平，可选的是其中所述受试对象具有或不具有升高的肌酸激酶水平。
11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中 (a)所述样品是血浆、血清、血液的脂蛋白组分或肌肉活检组织；和/或 (b)通过使用质谱法、核磁共振谱法、荧光光谱法或双偏振极化干涉法、诸如HPLC或UPLC等高效分离法、诸如ELISA等免疫测定法和/或用能够特异性结合分析物的结合部分来确定脂质浓度和/或脂质比率。
12.针对权利要求1至3中任一项所述的任一种脂质或针对权利要求1至3中任一项所述的任一种脂质比率中的脂质的抗体，所述抗体用于预测、诊断、预防或治疗受试对象中他汀引发的肌肉毒性和/或一种或多种其并发症。
13.一种用于预测他汀引发的肌肉毒性和/或一种或多种其并发症、或用于执行权利要求I至11中任一项所述的方法的试剂盒，其中所述试剂盒包括: (a)选自权利要求1至3中任一项所述脂质的脂质标准物； (b)一种或多种对照标志物，诸如一种脂质或多种脂质，如权利要求1至3中任一项所述的脂质，或蛋白，诸如apoA、apoB或白蛋白；并且可选的是 (c)能够结合权利要求1至3中任一项所述的任一种脂质的抗体或其他结合部分；和/或 (d)进行所述方法或应用的试剂。
14.权利要求13所述的试剂盒在预测他汀引发的肌肉毒性和/或一种或多种其并发症中的应用，其中，来自受试对象的样品中的所述脂质浓度、脂质比率或其脂质组合可选地通过利用质谱法确定。
15.一种用于治疗罹患或有风险发展动脉粥样硬化或心血管疾病(CVD)和/或它们的一种或多种并发症的受试对象的他汀或降脂药，其中 (a)在应用权利要求1和4至11中任一项所述的方法、权利要求12所述的抗体、权利要求13所述的试剂盒或权利要求14所述的应用时，所述受试对象将被鉴定为罹患或有风险发展他汀引发的肌肉毒性； (b)通过权利要求1和4至11中任一项所述的方法、权利要求12所述的抗体、权利要求13所述的试剂盒或权利要求14所述的应用，所述受试对象已被鉴定为罹患或有风险发展他汀引发的肌肉毒性； (c)在应用权利要求1和4至11中任一项所述的方法、权利要求12所述的抗体、权利要求13所述的试剂盒或权利要求14所述的应用时，所述受试对象将被鉴定为未罹患或没有风险发展他汀引发的肌肉毒性；和/或 (d)通过权利要求1和4至11中任一项所述的方法、权利要求12所述的抗体、权利要求13所述的试剂盒或权利要求14所述的应用，所述受试对象已被鉴定为未罹患或没有风险发展他汀引发的肌肉毒性。
16.一种用于治疗罹患或有风险发展动脉粥样硬化或心血管疾病(CVD)和/或它们的一种或多种并发症的受试对象的他汀或降脂药，其中，利用权利要求2至11中任一项所述的方法对所述治疗进行评测或已经对所述治疗评测过，来确定所述治疗是否需要调整，并且是否对所述治疗进行调整或是否已经调整过所述治疗，其中所述他汀或降脂药治疗的所述调整包括: (a)他汀剂量的减少； (b)他汀治疗的停止； (C)他汀治疗的重新开始； (d)更换为不同的他汀药； (e)更换为不同的降脂药；或 (f)因与一种或多种他汀相互作用而导致肌肉毒性的另一种药治疗的停止。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法、抗体、试剂盒、应用或他汀或降脂药，其中: (a)所述他汀选自由阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、氟伐他汀XL、洛伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗舒伐他 汀和/或辛伐他汀组成的组； (b)所述降脂药可选自以下药物中的任一种=HMG-Co还原酶抑制剂、尼克酸(烟酸)、胆固醇吸收抑制剂、胆固醇酯转运蛋白(CETP)抑制剂、胆汁酸螯合剂；贝特类药物或植物甾醇； 其中，可选的是所述胆固醇吸收抑制剂是依泽替米贝或SCH-48461 ;所述胆固醇酯转运蛋白(CETP)抑制剂是托彻普、安塞曲匹或达塞曲匹；所述胆汁酸螯合剂是考来维仑、消胆胺或考来替泊；并且所述贝特类药物是非诺贝特、吉非贝齐、氯贝特或苯扎贝特； (c)所述肌肉毒性与肌肉疾病相关，例如，肌营养不良；和/或 (d)他汀引发的肌肉毒性的所述一种或多种并发症选自肌痛、肌炎、肌病和横纹肌溶解。
【文档编号】G01N33/92GK103502820SQ201180070668
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2011年4月8日 优先权日:2011年4月8日
【发明者】R·拉克松恩, K·埃克罗斯, R·霍尔姆, M·詹尼斯, R·卡塔恩, K·塔拉索夫 申请人:佐拉生物科学公司