专利名称：氯虫苯甲酰胺抗原及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种氯虫苯甲酰胺抗原及其制备方法与应用。
背景技术：
氯虫苯甲酰胺通用名为Chlorantraniliprole,化学名为3_溴-N-{4_氯_2_甲基_6_ [(甲氨基)羰基]苯基} -I- (3-氯-2-卩比唳基)-IH-卩比唑-5-酰胺，试验代号DPX-E2Y45,商品名为Altaco, Coragen 和 Rynaxypyr ；CAS 登记号500008-45-7 ;分子式为=C18H14BrCl2N5O2 ;相对分子量为483. I。氯虫酰胺(chlorantraniIoprole)是美国杜邦公司在日本农药公司工作的基础上，以氟虫酰胺(flubendiamide)为先导，于2000年发现的第一个具有邻甲酰胺基苯甲酰胺类化学结构的化合物，该化合物虽然在结构上同氟虫酰胺有一定差别，但是都作用于鱼尼丁受体，且对哺乳动物安全。其化学结构式如下
权利要求
1.1
2.一种制备权利要求I所述式A所示化合物的方法，包括如下步骤将氨基酸和2-[3-溴-1-(3-氯-2-卩比啶基)-111-5-吡唑]-6-氯-8-甲基-4H-苯并[d] [1,3]恶嗪_4_酮于有机溶剂中混匀进行反应，反应完毕得到式A所示化合物。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述氨基酸选自氨基乙酸、氨基丙酸、氨基丁酸、氨基戊酸和氨基己酸中的至少一种，优选氨基丁酸； 所述氨基酸和2-[3_溴-1-(3-氯-2-吡啶基)-lH-5-吡唑]-6-氯-8-甲基-4H-苯并[d] [1，3]恶嗪-4-酮的投料摩尔配比为10 1，优选1.2 I ； 所述反应步骤中，温度为0-50°C，优选25°C，时间为6-48小时，优选12小时； 所述有机溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜和四氢呋喃中的至少一种，优选N，N-二甲基甲酰胺； 所述制备权利要求I所述式A所示化合物的方法，还包括如下步骤在反应完毕后将反应体系倒入水中，调节pH值为3，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相后干燥，旋转蒸发去除溶剂，并用由体积比为3 I的正己烷和乙酸乙酯组成的混合液重结晶。
4.式B所示化合物，
5.一种制备权利要求4所述式B所示化合物的方法，包括如下步骤将权利要求I所述式A所示化合物、N-羟基琥珀酰亚胺与下述两化合物中的任意一种于有机溶剂或水中混匀进行反应得到所述式B所示化合物二环己基碳二亚胺或I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述有机溶剂均选自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜和四氢呋喃中的至少一种，优选N，N-二甲基甲酰胺；所述式A所示化合物、N-羟基琥珀酰亚胺与二环己基碳二亚胺或I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的投料摩尔比为I : 1-5 1-5，优选I : 1.3 : I. I; 所述反应步骤中，温度为0-50 V，优选25 °C，时间为4-24小时，优选8小时。
7.式C所示化合物，
8.一种制备权利要求7所述式C所示化合物的方法，包括如下步骤将权利要求4所述式B所示化合物与载体蛋白溶液混匀进行偶联反应，反应完毕得到所述式C所示化合物。
9.根据权利要求7所述的化合物或权利要求8所述的方法，其特征在于所述载体蛋白选自牛血清蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中的至少一种，优选牛血清蛋白或卵清蛋白；所述式B所示化合物与载体蛋白溶液中所述载体蛋白的投料摩尔比为5-30 1，优选15 I ； 所述偶联反应步骤中，温度为0-50°C，优选4°C，时间为8-36小时，优选12小时，pH值为5-9，优选7.5。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于所述载体蛋白溶液按照包括如下步骤的方法制备而得将载体蛋白与缓冲液混匀得到所述载体蛋白溶液；其中，所述缓冲液选自碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中的至少一种，所述缓冲液的PH值均为7. 5 ； 所述制备式C所示化合物的方法，还包括如下步骤在所述偶联反应之后，将反应体系进行透析；所述透析步骤中，所用透析液为PH值为7-10、浓度为0. 01-0. 2mol/L的PBS溶液，优选所述透析液的PH值为7. 5，浓度为0. lmol/L ； 所述透析步骤中，所述PH值为7-10、浓度为0. 01-0. 2mol/L的PBS溶液按照如下方法制备而得将NaCl、KH2PO4和Na2HPO4 12H20以质量比8. 0 0. 2 2. 96的比例溶于水中，用水定容到1L。
11.由权利要求7所述化合物得到的抗体。
12.权利要求7所述化合物和/或权利要求11所述抗体在检测样品中氯虫苯甲酰胺中的应用； 权利要求7所述化合物和/或权利要求11所述抗体在制备用于检测样品中氯虫苯甲酰胺的酶联免疫试剂盒、氯虫苯甲酰胺的发光免疫试剂盒或免疫亲和色谱柱中的应用；所述检测样品为水体、药品、食品或土壤。
全文摘要
本发明公开了一种氯虫苯甲酰胺抗原及其制备方法与应用。该氯虫苯甲酰胺抗原如式C所示，是氯虫苯甲酰胺与载体蛋白通过酰胺键连接形成的偶联物。本发明提供的制备氯虫苯甲酰胺抗原的方法，能够方便、快捷地获得氯虫苯甲酰胺抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的氯虫苯甲酰胺抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。本发明的制备氯虫苯甲酰胺抗原的方法及由该方法获得的氯虫苯甲酰胺抗原在氯虫苯甲酰胺的快速免疫检测应用中将有广阔的前景。式C
文档编号G01N33/53GK102627628SQ201210060248
公开日2012年8月8日 申请日期2012年3月8日 优先权日2012年3月8日
发明者刘尚钟, 刘峰, 南铁贵, 孙硕, 崔永亮, 徐川, 曹振, 欧俊军, 王敏, 王毅, 王磊, 谭桂玉 申请人:中国农业大学