专利名称：一种苦参总黄酮提取物及其制备方法、质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物及其制备方法、质量检测方法，具体涉及一种苦参总黄酮提取物及其制备方法、质量检测方法。
背景技术：
中药苦参为豆科植物苦参Sophora flvescens Ait.的干燥根。始载于汉代神农本草经，列为中品，在2000多年来的临床实践中发挥了诸多功效。具有清热燥湿，杀虫，利尿的功能。临床用于热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下，阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风；外治滴虫性阴道炎。文献报道[1.郑顺亮.清络方活性部位物质基础研究[D]北京协和医学院-中国医学科学院硕士研究生学位论文.2009 ;2.赵平、张颖君、山本浩文等.苦参异戊稀基黄酮类化合物的化学、活性及其生物合成研究进展[J]天然产物研究与开发，2004，16 (2)；172-178]苦参主要有下列药理活性:抗肿瘤作用、抗炎抑菌作用、抗病毒作用、免疫调节作用、抗肝损伤、抗过敏和平喘、降血糖、对酶的抑制作用、对中枢神经的抑制作用；此外苦参中的苦参碱和黄烷酮类化合物对胃粘膜损伤均有明显的保护作用，其异戊烯基二氢黄酮类化合物具有抗雄性激素样作用；苦参尚具有抗寄生虫、体外杀精、利尿、利胆、止泻等药效作用。苦参中主要含有生物碱和黄酮体两大类成分。生物碱为苦参的主要活性成分，至今已从中分离得到34种生物碱(包括喹诺里西啶类、金雀花碱型、臭豆碱型、鹰爪豆碱型、羽扇豆碱型和双呱啶类)，其中含量较高、活性较强的为氧化苦参碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱及槐果碱。苦参中另一大类成分为黄酮类化合物，至今已得到85个，具有八种结构类型，包括二氢黄酮类33个、二氢黄酮醇类22个、黄酮醇类(3-0H取代)4个、异黄酮类8个、二氢异黄酮类9个、查尔酮类6个、双黄酮类2个以及其他类型的黄酮I个；其中的60个化合物均具有异戊烯基 侧链。这些化合物中的异戊烯基侧链包括A E五种类型以及两种与苯环成吡喃环形式的共七种类型，侧链均存在于A环上；大多数化合物则多以Iavandulyl的分枝异戍烯基侧链及其轻基化形式存在于A环的C_8位上。这是苦参的这类黄酮化合物区别于同属其他植物最明显的化学结构特征。
发明内容
本发明目的在于公开一种苦参总黄酮提取物及其制备方法、质量检测方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的:所述苦参总黄酮提取物中黄酮类成分的含量以重量计为60 95%，其中黄酮类成分包括三叶豆紫檀苷、苦参酮、降苦参酮、苦参醇、苦参醇1、苦参醇A、苦参醇E等多种化合物。三叶豆紫檀苷、苦参酮和降苦参酮三种含量较高、活性较强的黄酮化合物占全部黄酮类成分含量以重量计为30 45%，其中三叶豆紫檀苷占总黄酮类成分含量以重量计为9 12%、苦参酮占总黄酮类成分含量以重量计为15 25%、降苦参酮占总黄酮类成分含量以重量计占6 8%。所述苦参总黄酮提取物是从野生或栽培的豆科槐属植物苦参的干燥根中提取获得。本发明的苦参总黄酮提取物经HPLC-MS-MS (负离子)分析表明，主要含有下列化合物:三叶豆紫檀苷、苦参醇、(2S)-8-异戊烯基-5-甲氧基-7，2’，4’ -三羟基-5-甲氧基二氢黄酮、苦参醇Q、苦参醇1、苦参醇N、5-甲氧基苦参醇C、苦参酮、苦参醇C、苦参醇X、降苦参酮、苦参醇L、苦参醇E、苦参啶、苦参醇A等。结构式如下:
权利要求
1.一种苦参总黄酮提取物，其特征在于该提取物中黄酮类成分的含量以重量计为60 95%，;三叶豆紫檀苷、苦参酮和降苦参酮占全部黄酮类成分含量以重量计为30 45% ；其中三叶豆紫檀苷占总黄酮类成分含量以重量计为9 12%、苦参酮占总黄酮类成分含量以重量计为15 25%、降苦参酮占总黄酮类成分含量以重量计占6 8%。
2.如权利要求1所述的苦参总黄酮提取物，其特征在于所述苦参总黄酮提取物是从野生或栽培的豆科槐属植物苦参的干燥根中提取获得。
3.如权利要求1所述的苦参总黄酮提取物，其特征在于该提取物主要含有下列化合物:三叶豆紫檀苷、苦参醇、2S-8-异戊烯基-5-甲氧基-7，2’，4’ -三羟基-5-甲氧基二氢黄酮、苦参醇Q、苦参醇1、苦参醇N、5-甲氧基苦参醇C、苦参酮、苦参醇C、苦参醇X、降苦参酮、苦参醇L、苦参醇E、苦参啶、苦参醇A。
4.如权利要求1、2或3所述的苦参总黄酮提取物的制备方法，其特征在于该方法为: 取苦参干燥根，粉碎成粗粉，以95%乙醇6 8倍回流提取三次，每次提取1-2小时，减压回收溶剂得到乙醇浓缩物；乙醇浓缩物以聚酰胺分散后置聚酰胺层析柱上干法上样，先以水充分洗脱，直至用糖类显色试剂、生物碱的鉴别试剂检测除尽单糖、寡糖、及无机盐；再以浓度为5 8%的乙醇洗脱，以除尽生物碱，并和上述水洗脱浓缩物一并另器保存；提高洗脱液乙醇的浓度至10 20%，经减压回收溶剂，以黄酮类化合物的鉴别试剂检测浓缩的洗脱液，收集含黄酮体的浓缩液段A ;再提高洗脱液乙醇浓度至50 60%，得到浓缩液段B ;最后用95%乙醇或无水乙醇把黄酮类洗脱净，得到浓缩液段C，将浓缩液段A、B、C合并，得到本发明苦参总黄酮提取物。
5.如权利要求4所述的苦参总黄酮提取物的制备方法，其特征在于所述糖类显色试剂包括但不限于Fehling试剂、Molish试剂；所述黄酮类化合物的鉴别试剂包括但不限于三氯化铝乙醇试剂、盐酸-镁粉试剂、浓氨水溶液；所述生物碱的鉴别试剂包括但不限于Dragendorff 试剂、Mayer 试剂。
6.如权利要求4所述的苦参总黄酮提取物的制备方法，其特征在于所述乙醇浓缩物提取方法为:以95%乙醇回流提取三次，第一次用8倍量提取2小时，第二、三次用6倍量提取1.5小时。
7.如权利要求1或3所述的三叶豆紫檀苷的提取纯化方法，其特征在于该方法为: 苦参干燥根，粉碎成粗粉，以95%乙醇6 8倍回流提取三次，每次提取1-2小时，减压回收溶剂得到乙醇浓缩物；乙醇浓缩物以聚酰胺分散后置聚酰胺层析柱上干法上样，先以水充分洗脱，直至用糖类显色试剂检测除尽单糖、寡糖及无机盐；再以浓度为5 8%的乙醇洗脱，以除尽生物碱，洗脱浓缩物和上述水洗脱浓缩物一并另器保存；提高洗脱液乙醇的浓度至10 20%，经减压回收溶剂，以黄酮类化合物的鉴别试剂检测浓缩的洗脱液，收集含有三叶豆紫檀苷粗品的析出物，得到的粗品经重结晶法得纯品，纯度大于98%。
8.如权利要求7所述的三叶豆紫檀苷的提取纯化方法，其特征在于所述乙醇浓缩物提取方法为:以95%乙醇回流提取三次，第一次用8倍量提取2小时，第二、三次用6倍量提取1.5小时。
9.如权利要求1、2或3 所述的苦参总黄酮提取物的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定方法中的一种或几种:A.紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量 对照品溶液的制备:取纯度> 98%的苦参酮适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含25ug的溶液，即得； 供试品溶液制备:取总黄酮提取物适量，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成每Iml含0.2 mg的溶液，摇匀，即得； 标准曲线的制备:精密吸取对照品溶液0.5ml、I ml、l.5 ml,2 ml,2.5 ml,3 ml,3.5 ml和4 ml分别置5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；以甲醇为空白，照紫外-可见分光光度法，在288nm的波长处分别测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；回归方程为:Y=41.601x + 0.0126，r=0.999 8 ； 测定法:精密吸取供试品溶液0.4,0.5,0.6 ml，分别置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；照标准曲线的制备项下的方法，自“以甲醇为空白”起，依法测定吸光度，代入回归方程计算，即得； B.HPLC法测定三叶豆紫檀苷含量 色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以20 30: 80 70的乙腈-水流动相；检测波长为310nm ;柱温30°C ;流速lmL/min ;三叶豆紫檀苷峰与相邻峰分离度不低于1.5，理论板数以三叶豆紫檀苷峰计算应不低于4000 ； 对照品溶液的制备:取经减压干燥至恒重的三叶豆紫檀苷5mg，精密称定，加甲醇制成每ImL含0.05mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备:取苦参总黄酮提取物10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇超声溶解，放置室温，加甲醇至刻度，摇匀，制成每ImL含0.4mg的溶液，即得； 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 15 ul，注入液相色谱仪，测定，即得； C.HPLC法测定苦参酮、降苦参酮含量 色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以的乙腈一 1%甲酸溶液为流动相；检测波长:290nm，流速:0.8mL 1.Ο/min ;柱温:30 35°C ;理论塔板数按苦参酮峰计算应不低于5000 ； 对照品溶液的制备:取苦参酮、降苦参酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含·0.1264mg的苦参酮和0.0286mg的降苦参酮溶液； 供试品溶液制备:取苦参总黄酮提取物10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇超声溶解，放置室温，加甲醇至刻度，摇匀即得； 测定:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液5 15 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
10.如权利要求1、2或 3所述的苦参总黄酮提取物在制备具有镇痛、抑制肿瘤、降血糖或增强免疫力的药物中的应用。三叶豆紫檀苷在抑菌、抗炎、抑制肿瘤的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种苦参总黄酮提取物及其制备方法、质量检测方法。所述苦参总黄酮提取物中黄酮类成分的含量以重量计为60～95%，三叶豆紫檀苷、苦参酮和降苦参酮三种含量较高、活性较强的黄酮化合物占全部黄酮类成分含量以重量计为30～45%，其中三叶豆紫檀苷占总黄酮类成分含量以重量计为9～12％、苦参酮占总黄酮类成分含量以重量计为15～25%、降苦参酮占总黄酮类成分含量以重量计占6～8%。以中药苦参(Sophora flavescens Ait.)为原料，经溶剂提取、聚酰胺吸附柱层析法分离，分部洗脱，收集含黄酮部位的洗脱液经减压回收溶剂得到苦参总黄酮提取物。
文档编号G01N30/88GK103070912SQ201210469050
公开日2013年5月1日 申请日期2012年11月19日 优先权日2012年11月19日
发明者张思巨, 姚梅芬, 王金华, 白水朋, 李琳, 张志伟, 厉博文, 雷娜 申请人:北京振东光明药物研究院有限公司