专利名称：脉络通胶囊质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种药物制剂的质量控制方法，具体涉及脉络通胶囊的质量控制方法。
背景技术：
脉络通具有益气活血、化瘀止痛、通脉活络的功能。适用于胸痹引起的心胸疼痛、胸闷气短、头痛眩晕及冠心病、心绞痛具有上述诸症，中风引起的肢体麻木、半身不遂等症。脉络通颗粒剂和片剂列入《国家基本医疗保险和工伤保险药品目录(2004版)》乙类药品。脉络通颗粒剂和胶囊剂均列入《江苏省基本医疗保险和工伤保险药品目录》乙类药品。江苏扬子江药业集团有限公司生产的脉络通颗粒组方出自《中药部颁标准》的“脉络通颗粒”，且于1987年独家生产、上市。南京海陵药业有限公司生产的脉络通胶囊组方与江苏扬子江药业集团有限公司生产的脉络通颗粒相同。络通胶囊的组方中，以党参、当归为君药，益气兼以养血；红花、丹参、川芎、地龙为臣药，辅助君药达到活血通脉的功效；山楂为佐药,通行气血,活血祛瘀止痛；木贼、葛根、槐米为使药,能够升清通痹,助药上行,直达病所。君臣佐使，全方配伍，益气活血、化瘀止痛，适用于气虚血瘀、心脉痹阻的冠心病心绞痛患者。由于脉络通中药成分复杂，现有的脉络通质量检测方法，为常规的高效液相检测方法，分离效果差，检测时间长，检测灵敏度和准确度不高，稳定性也较差。因此为了控制好脉络通胶囊制剂的临床安全性，维护患者的利益，很有必要在现有技术的基础之上研究设计出能准确检测脉络通胶囊制剂中有效成分的检测方法。
发明内容
发明目的:本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种能够很好的将脉络通各成分分离，检测灵敏度高，检测速度快，检测结果准确，可以客观、全面、准确的评价脉络通胶囊的质量，对控制脉络通胶囊剂的质量和保证疗效具有重要意义。技术方案:为了实现以上目的，本发明所提供的脉络通胶囊质量控制方法，包括以下步骤:(I)标准品溶液的制备:精密称取葛根素对照品适量，加浓度30%乙醇制成每Iml中含80ug的葛根素对照品溶液；(2)脉络通胶囊样品溶液的制备:取脉络通胶囊内容物，研细，精密称取0.25g，置锥形瓶中，加浓度为35%的乙醇15ml，振荡溶解，超声提取，抽滤，合并滤液，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得；(3)标准曲线的制备:取步骤⑴得到的标准品溶液注入超高效液相色谱仪制备标准曲线，色谱条件为:色谱柱:反相C18柱；流动相为甲醇和水，梯度洗脱，流速为
0.4 0.6ml/min，检测波长为250 260nm，柱温为25 30°C ；(4)脉络通胶囊样品中葛根素的含量测定:精密吸取步骤(2)脉络通胶囊样品溶液1μ 1，注入超高效液相色谱仪分析10分钟，色谱条件为:反相C18柱；流动相为甲醇和水；梯度洗脱，流速为0.4^0.6ml/min,检测波长为25(T260nm，柱温为25 30°C;并按步骤(3)标准曲线测量脉络通胶囊中葛根素的含量。作为优选方案，本发明提供的脉络通胶囊质量控制方法，步骤(3)中以脉络通胶囊的峰面积为纵坐标，浓度μ g/ml为横坐标绘制标准曲线为:Y = 12262X-24.945,r=0.9999 ο作为优选方案，本发明所述的脉络通胶囊质量控制方法，步骤(3)和(4)所述的梯度洗脱方式为:O分钟，甲醇和水的体积比为77:23 ；5分钟，甲醇和水的体积比为77:23 ；5.1分钟甲醇和水的体积比为30:70 ；7分钟甲醇和水的体积比为30:70 ；7.1分钟甲醇和水的体积比为77:23ο作为优选方案，以上所述的脉络通胶囊质量控制方法，步骤(3)和(4)所述的流速为0.4ml/min,检测波长为250nm。作为优选方案，本发明所述的脉络通胶囊质量控制方法，步骤(3)和(4)所述的步骤⑶和⑷所述的柱温为25°C。作为优选方案，本发明所述的脉络通胶囊质量控制方法，步骤(3)和(4)所述的反相 C18 柱为 Poroshell20SB-C18O作为优选方案，以上所述的脉络通胶囊质量控制方法，步骤(3)和(4)所述的超高效液相色谱仪的检测器为DAD检测器。本发明所述的脉络通胶囊质量控制方法，通过筛选不同浓度:20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇提取溶剂，实验结果表明，浓度为30%乙醇具有提取效率最高，活性化合物提取率高。因此本发明选用浓度为30%乙醇作为提取溶剂。同时本发明对提取方法:回流提取法、超声提取法、煎煮法等提取方法进行筛选，实验结果表明，超声提取法具有提取效率闻，提取完全等优点，因此本发明优选超声提取法。脉络通胶囊含有多味药物，化学成分复杂，常规的高效液相色谱分离度差，检测结果不准确，为了严格控制好脉络通胶囊的质量，制定检测脉络通胶囊含量的方法，本发明经过大量实验对流动相组成、流动相的洗脱程序、流速、检测波长及色谱柱进行筛选。1、本发明针对脉络通胶囊成分复杂，选用葛根素化合物作为目标检测化合物，通过全波长扫描和3D等高线观察，确定目标化合物在250nm处有较大的吸收，灵敏度高，因此本发明采用250nm作为检测波长，可以准确灵敏的检测到目标化合物。2、脉络通胶囊成分复杂，在色谱柱上的分离度很差，目标化合物和其它成分无法很好分离，导致检测结果不准确，本发明对流动相的组成进行了大量筛选，确定采用梯度洗脱，梯度洗脱方 式为:O分钟，甲醇和水的体积比为77:23 ；5分钟，甲醇和水的体积比为77:23 ；5.1分钟甲醇和水的体积比为30:70 ；7分钟甲醇和水的体积比为30:70 ；7.1分钟甲醇和水的体积比为77:23。各化合物在色谱柱上能很好的分离，不会出现峰重叠等现象，目标化合物峰形好，能保证在色谱柱上有很好的分离度，从而能保证检测结果准确。3、同时本发明还对流动相的流动速度进行了考察，如流速过快，分离度不够理想，因此本发明分别考察了 1.5mL/min、lmL/min、0.8mL/min、0.6mL/min、0.5mL/min、0.4mL/min和0.2mL/min不同流速，实验结果表明，当流动相的流速为0.4mL/min时，各化合物的峰形最好、分离度最好，理论塔板数最高，因此本发明采用流动相的流速为0.4mL/min。4、同时本发明对色谱柱的柱温进行了筛选，考察了色谱柱在20 V、25 °C、28 V、30°C和35°C条件下化合物的分离效果，实验结果表明，色谱柱在25°C条件下分离效果最好，分离重复性和稳定性最好。因此本发明采用色谱柱的柱温为25°C。5、本发明采用超高效液相色谱分析目标化合物，选用安捷伦(Agilent) 1290Infinity系统。同时本发明对多种色谱柱也进行了筛选，实验结果表明，Poroshel 120SB-C18柱的分离效果最好。因此，本发明以Poroshel 120SB_C18柱作为分析柱。有益效果:本发明提供的脉络通胶囊质量控制方法和现有技术相比具有以下优
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本发明首选超高效液相色谱仪，并且根据脉络通胶囊中活性成分和杂质成分的结构性质特点，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成和梯度洗脱程序、流速，检测波长、色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的脉络通胶囊质量控制方法可以快速，灵敏、准确的检测目标活性成分，因此具有很高的分析效率，可以克服现有检测方法分离速度慢，分离效果差，检测灵敏度低、准确度低、稳定性差等诸多缺点，且本发明提供的质量检测方法稳定性好、对各分析成分的分离度好，可定性、定量检测分析各化合物。因此，本发明提供的脉络通胶囊质量控制方法可以客观、全面、准确的评价脉络通胶囊的质量，对控制脉络通胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。
图1为葛根素标准品的超高效液相色谱检测分析图。
图2为脉络通胶囊样品中葛根素化合物的超高效液相色谱检测分析图。
具体实施例方式下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。实施列I脉络通胶囊质量控制方法的方法学考察1.1稳定性实验取脉络通胶囊内容物，研细，精密称取0.25g，置锥形瓶中，加浓度为35%的乙醇15ml，振荡溶解，超声提取，抽滤，合并滤液，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过；分别在0，10，20，40，60，80分钟测定葛根素含量，计算峰面积(S)的相对标准偏差。具体实验结果如表I所示。表I稳定性试验结果
权利要求
1.脉络通胶囊质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)标准品溶液的制备:精密称取葛根素对照品，加浓度30%乙醇制成每Iml中含SOug的葛根素的对照品溶液； (2)脉络通胶囊样品溶液的制备:取脉络通胶囊内容物，研细，精密称取0.25g，置锥形瓶中，加浓度为35%的乙醇15ml，振荡溶解，超声提取，抽滤，合并滤液，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得； (3)标准曲线的制备:取步骤⑴得到的标准品溶液注入超高效液相色谱仪制备标准曲线，色谱条件为:色谱柱:反相C18柱；流动相为甲醇和水，梯度洗脱，流速为0.4^0.6ml/min，检测波长为25(T260nm，柱温为25 30°C ； (4)脉络通胶囊样品中葛根素的含量测定:精密吸取步骤(2)脉络通胶囊样品溶液Iμ 1，注入超高效液相色谱仪分析10分钟，色谱条件为:反相C18柱；流动相为甲醇和水；梯度洗脱，流速为0.4^0.6ml/min，检测波长为25(T260nm，柱温为25 30°C ;并按步骤(3)标准曲线测量脉络通胶囊中葛根素的含量。
2.根据权利要求1所述的脉络通胶囊质量控制方法，其特征在于，步骤(3)中以脉络通胶囊的峰面积为纵坐标，浓度μ g/ml为横坐标绘制标准曲线为:Y = 12262Χ-24.945,r =0.9999。
3.根据权利要求1所述的脉络通胶囊质量控制方法，其特征在于，步骤(3)和(4)所述的梯度洗脱方式为: O分钟，甲醇和水的体积比为77:23 ；5分钟，甲醇和水的体积比为77:23 ； 5.1分钟甲醇和水的 体积比为30:70 ；7分钟甲醇和水的体积比为30:70 ； 7.1分钟甲醇和水的体积比为77:23。
4.根据权利要求1所述的脉络通胶囊质量控制方法，其特征在于，步骤(3)和(4)所述的 流速为0.4ml/min,检测波长为250nm。
5.根据权利要求1所述的脉络通胶囊质量控制方法，其特征在于，步骤(3)和(4)所述的柱温为25 °C。
6.根据权利要求1所述的脉络通胶囊质量控制方法，其特征在于，步骤(3)和(4)所述的反相 C18 柱为 Poroshell 20 SB-Clgo
7.根据权利要求1所述的脉络通胶囊质量控制方法，其特征在于，步骤(3)和(4)所述的超高效液相色谱仪的检测器为DAD检测器。
全文摘要
本发明公开了脉络通胶囊质量控制方法，该方法采用超高效液相色谱法检测脉络通胶囊。本发明通过大量实验优选出最佳的流动相组成，梯度洗脱程序、流速，检测波长和色谱柱等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的脉络通胶囊质量控制方法，稳定性和重复性好、分析速度快，分析效率高、分离度好，可以灵敏准确的定性、定量检测目标化合物，从而可以客观、全面、准确的评价脉络通胶囊的质量，对控制脉络通胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。
文档编号G01N30/02GK103197004SQ20121056797
公开日2013年7月10日 申请日期2012年12月24日 优先权日2012年12月24日
发明者王丽楠, 陶元景 申请人:扬子江药业集团南京海陵药业有限公司