专利名称：活血止痛膏的特征图谱测定和其质量检测方法
技术领域：
本发明涉及活血止痛膏生产领域，具体涉及一种活血止痛膏的特征图谱测定和其质量检测方法。
背景技术：
活血止痛膏为安徽安科余良卿药业有限公司生产的一种中成药，用于活血止痛，舒筋通络，主治筋骨疼痛，肌肉麻痹，痰核流注，关节酸痛。目前，在生产中对活血止痛膏的质量控制主要是测定樟脑、薄荷脑、冰片、水杨酸甲酯含量和对当归、陈皮、颠茄流浸膏、大黄和香加皮等组分进行薄层鉴别，上述方法虽能在一定程度上控制产品质量，但还是无法全面的反映产品的质量状况，为弥补其不足，使其质量控制技术更加完善、科学并对其今后的标准化生产提供一种可利用的质量控制模式，因此有必要建立起该产品的标准特征图谱，用于产品的质量控制。发明目的本发明的首要目的是提供一种活血止痛膏的特征图谱测定方法，该方法操作简便、精密度高、重现性好。其采取的方案为，一种活血止痛膏的特征图谱测定方法，是将各标准活血止痛膏在相同的浸提操作下浸提得到的进样液分别注入液相色谱仪，在相同的色谱条件下进行分离试验，然后将得到的色谱图导入中药指纹图谱分析仪检测得到活血止痛膏的特征图谱。中药指纹图谱分析仪应理解为安装有中药指纹图谱分析软件且可进行运行的设备。通过上述方法，可有效测定出活血止疼膏制剂的特征图谱，且操作方便、重现性好。本发明的另一个目的是提供一种利用上述测得特征图谱检测活血止疼膏质量的方法。其方案为一种活血止痛膏的质量检测方法，其特征在于是通过数据采集单元对按相同的实验条件下测定的活血止痛膏产品的色谱图进行采集，数据采集单元将采集的色谱图输入至处理单元，处理单元调取已测得的活血止痛膏的特征图谱与输入的色谱图进行检测和对照，然后输出检测结果信号至显示单元，显示单元显示产品的质量状况。通过上述方法，可有效的对活血止疼膏制剂的产品质量进行检测，从而对活血止疼膏的产品质量进行有效控制，实现活血止疼膏制剂标准化生产。进一步的操作为，还包括在相同实验条件下测定大黄素甲醚的色谱，处理并获得活血止痛膏特征图谱的各特征峰的相对保留时间。通过测定大黄素甲醚的色谱图，将大黄素甲醚的色谱图与各标准活血止痛膏测得色谱图进行比对，确定两者之间的共有特征峰，亦即找出各标准活血止痛膏测得色谱图上的大黄素甲醚的特征峰，从而以大黄素甲醚特征峰的相对保留时间为1，计算出其他特征峰的相对保留时间，便于后续的活血止疼膏产品的检测。其中，本申请中所指的相同实验条件是指浸提操作和色谱测定的色谱条件都与标准活血止痛膏进行浸提操作和色谱测定操作时完全相同的条件。具体的操作为浸提操作为取5 10片标准活血止疼膏除去盖衬,剪成小碎片,加入50 200ml的三氯甲烧，浸泡30 60分钟，搅拌后倾取得到一次膏液，然后加50 IOOml的甲醇，搅拌，静置5 10分钟，倾取得到二次膏液，残渣再加50 IOOml的甲醇，搅拌，静置5 10分钟，倾取得到三次膏液，合并上述所得膏液，水浴蒸干，将所得膏体加甲醇溶解，过滤后转移至IOml的第一容量瓶内并加甲醇定容，然后再精密量取第一容量瓶内的溶液2ml转移至IOml的第二容量瓶内并加甲醇定容，定容后的溶液即为进样液。本申请中所进行操作的活血止疼膏的规格为7cm*10cm，当然采用其他不同大小的标准产品进行实验时，所采用的三氯甲烷和甲醇的体积可以发生相适应的变化。所述的色谱条件为色谱柱以十八烷基键和硅胶为填充剂，流动相由体积比为35 :65 85 15的A相和B相组成，A相为甲醇或乙腈，B相为质量分数为O. 05 O. 15%的磷酸或O. 1% 1. 5%的冰醋酸，梯度洗脱，检测波长为254±2nm，流速为O. 5 1. 5ml/min,柱温为30 40°C，进样液的进样量为10 20 μ 1，理论塔板数不低于6000，所指的理论塔板数是按照大黄素甲醚峰计算的。
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梯度洗脱的时间及流动相比例为0 5min，A相35 40%、B相65 60% ；5 10min，A 相40 45%、B 相60 55% ；10 25min，A 相45 62%、B 相55 38% ；25 35min，A 相62 83%、B 相38 17% ；35 40min，A 相83 85%、B 相17 15% ；40 65min, A 相85 85%、B 相15 15%。至少取15批标准活血止痛膏分别进行浸提操作，并将得到的进样液分别注入液相色谱仪进行试验。按上述限定参数进行操作，制取的进样液中各组分的分离效果最好，测得的活血止痛膏的特征图最为准确。本申请中，所指的标准活血止痛膏是指质量完全符合相关国家医药标准的活血止痛膏。活血止疼膏是通过以下原料和制备方法制得。其中原料组成为白芷9 18份、牡丹皮2 4份、荆芥4 8份、陈皮9 18份、干姜16 32份、细辛4 8份、山柰9 18份、辛夷3 6份、生天南星5 10份、辣椒2 4份、川弯3 6份、薄荷脑4 8份、独活3 6份、没药2 4份、香加皮4 8份、大黄8 16份、丁香5 10份、生半夏8 16份、甘松8 16份、樟脑4 8份、当归5 10份、冰片4 8份、乳香2 4份、颠爺流浸膏6 12份、桂枝4 8份、胡椒5 10份、苍术2 4份、水杨酸甲酯6 12份；制备方法为二十八味原料中除薄荷脑、冰片、水杨酸甲酯、颠茄流浸膏、樟脑外；将其余的二十三味粉碎成粗粉，按照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用90%乙醇作溶剂，进行渗漉，收集漉液，漉液浓缩成相对密度约为1.05的清膏，然后加入上述薄荷脑等剩余五味原料，搅匀，再按常规方法制成活血止疼膏；或将将其余的二十三味粉碎成粗粉温浸、CO2回流或超临界萃取后回流，用90%乙醇作溶剂，收集提取液，浓缩成相对密度约为1.05的清膏，加入上述薄荷脑等剩余五味，搅匀，按常规方法制成活血止疼膏。按照上述的操作，所测得标准特征图谱(如图4所示)共有特征峰有6个，其中5号色谱峰为大黄素甲醚的特征峰，以大黄素甲醚的特征峰的相对保留时间为1，计算其他峰的相对保留时间，即得到活血止痛膏的标准特征图谱为I号峰相对保留时间O. 56 O. 622号峰相对保留时间O. 64 O. 703号峰相对保留时间O. 78 O. 864号峰相对保留时间O. 92 1. 015号峰相对保留时间I· 006号峰相对保留时间1. 20 1. 33。在进行产品检测时，将抽检的产品按照相同实验条件测得其色谱图，若处理单元检测得到色谱图中出现特征图谱中相同的6各特征峰且各特征峰的保留时间与上述特征图谱中各特征峰的相对保留时间误差在5%以内，则该产品质量合格，反之则不合格，从而快速的对活血止疼膏制剂进行检测。
图1为测得的大黄素甲醚图谱；图2为实施例2测得的活血止痛膏的特征图谱；图3为实施例3中测得 的十五批活血止疼膏色谱图导入中药指纹图谱软件中进行分析的截图；图4为实施例3测得活血止痛膏的特征图谱；
具体实施例方式实施例1为测定大黄素甲醚色谱图，实施例2、3为测定活血止疼膏的特征图谱，其中实施例1、2、3所用的仪器、药品如下仪器与试药仪器Waters高效液相色谱仪，2489检测器。药品磷酸、三氯甲烷等(均为分析纯)；甲醇(色谱纯)；标准活血止痛膏(安徽安科余良卿药业有限公司生产)。实施例1测定大黄素甲醚图谱进样液的制备取大黄素甲醚对照品适量，精密称重，加甲醇制成40μ g/ml的进样液溶液。色谱测定操作取20 μ I进样向液高效液相色谱仪进行进样，具体操作按《中国药典》(2010版)第一部附录中“高效液相色谱法试验”的规定进行操作，得到大黄素甲醚特征峰的保留时间和色谱图，如图1所示。其中色谱条件色谱柱以十八烷基键和硅胶为填充剂，以甲醇为A相，O. 08 O. 10%磷酸为B相组成流动相；采用梯度洗脱方式，其洗脱时间及流动相比例为0 5min，A 相35 40%、B 相65 60% ；5 lOmin，A 相40 45%、B 相60 55% ；10 25min，A 相45 62%、B 相55 38% ；25 35min，A 相62 83%、B 相38 17% ；35 40min，A相83 85%、B相17 15% ；40 65min, A相85 85%、B相15 15% ;检测波长为254±2nm，流速O. 5 1. 5ml/min，柱温30 40°C，理论塔板数不低于6000。
实施例2测定活血止痛膏特征图谱进样液的制备取十五批标准活血止疼膏，分别按照下述浸提操作制备得到15份进样液，标号Al A15。浸提操作取5 10片标准活血止疼膏除去盖衬，剪成小碎片，加入50 200ml的三氯甲烷，浸泡30 60分钟，搅拌后倾取得到一次膏液，然后加50 IOOml的甲醇，搅拌，静置5 10分钟，倾取得到二次膏液，残渣再加50 IOOml的甲醇，搅拌，静置5 10分钟，倾取得到三次膏液，合并上述所得膏液，水浴蒸干，将所得膏体加甲醇溶解，过滤后转移至IOml的第一容量瓶内并加甲醇定容，然后再精密量取第一容量瓶内的溶液2ml转移至IOml的第二容量瓶内并加甲醇定容，定容后的溶液即为进样液。色谱测定操作将十五批进样液分别取10 μ I向液高效液相色谱仪进行进样，具体操作按《中国药典》(2010版)第一部附录中“高效液相色谱法试验”的规定进行操作，得到十五张标准活血止疼膏的色谱图。其中色谱条件色谱柱以十八烷基键和硅胶为填充剂，以乙腈为A相，O. 1% 1. 5%的冰醋酸为B相组成流动相；采用梯度洗脱方式，其洗脱时间及流动相比例为0 5min，A相20 30%、B 相80 40% ；5 lOmin，A 相30 40%、B 相70 60% ;10 25min，A相40 57%、B 相60 43% ；25 35min，A 相57 62%、B 相43 38% ；35 45min，A相62 67%、B相38 33% ；45 65min, A相67 85%、B相33 15% ;检测波长为254±2nm，流速O. 5 1. 5ml/min，柱温30 40°C，进样量20 μ I ;理论塔板数按大黄素甲醚峰计，应不低于6000。特征图谱通过测得的15批标准活血止痛膏和大黄素甲醚的色谱图进行比较比较，确定活血止痛膏色谱图有6个共有峰，标号I 6，其中5号色谱峰为大黄素甲醚的特征峰，设定5号峰的相对保留时间为1，计算其他峰的相对保留时间。将得到的十五张活血止疼膏的色谱图导入中药指纹图谱软件中，相应操作后得到活血止痛膏的特征图谱(如附图3所示)。
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实验例3测定活血止痛膏特征图谱进样液的制备取十五批标准活血止疼膏，分别按照下述浸提操作制备得到15份进样液，标号SI S15。浸提操作取5 10片标准活血止疼膏除去盖衬，剪成小碎片，加入50 200ml的三氯甲烷，浸泡30 60分钟，搅拌后倾取得到一次膏液，然后加50 IOOml的甲醇，搅拌，静置5 10分钟，倾取得到二次膏液，残渣再加50 IOOml的甲醇，搅拌，静置5 10分钟，倾取得到三次膏液，合并上述所得膏液，水浴蒸干，将所得膏体加甲醇溶解，过滤后转移至IOml的第一容量瓶内并加甲醇定容，然后再精密量取第一容量瓶内的溶液2ml转移至IOml的第二容量瓶内并加甲醇定容，定容后的溶液即为进样液。色谱测定操作将十五批进样液分别取20 μ I向液高效液相色谱仪进行进样，具体操作按《中国药典》(2010版)第一部附录中“高效液相色谱法试验”的规定进行操作，得到15张标准活血止疼膏的色谱图。其中色谱条件色谱柱以十八烷基键和硅胶为填充剂，以甲醇为A相，O. 08 O. 10%磷酸为B相组成流动相；采用梯度洗脱方式，其洗脱时间及流动相比例为0 5min，A 相35 40%、B 相65 60% ；5 lOmin，A 相40 45%、B 相60 55% ；10 25min，A 相45 62%、B 相55 38% ；25 35min，A 相62 83%、B 相38 17% ；35 40min，A相83 85%、B相17 15% ；40 65min, A相85 85%、B相15 15% ;检测波长为254±2nm，流速O. 5 1. 5ml/min，柱温30 40°C，进样量20 μ I ;理论塔板数按大黄素甲醚峰计，应不低于6000。特征图谱将测得的15批活血止痛膏和大黄素甲醚的色谱图进行比较，确定活血止痛膏的色谱图有6个共有峰，标号I 6，其中5号色谱峰为大黄素甲醚的特征峰，设定5号峰的相对保留时间为1，计算其他峰的相对保留时间，具体结果相详见表I。将得到的十五张图谱导入中药指纹图谱软件中(如附图2所示)，相应操作后得到活血止痛膏的特征图谱(如附图3所示)。表I实施例3中的15批标准活血止疼膏图谱的特征峰的相对保留时间统计结果
权利要求
1.一种活血止痛膏的特征图谱测定方法，是将各标准活血止痛膏在相同的浸提操作下浸提得到的进样液分别注入液相色谱仪，在相同的色谱条件下进行分离试验，然后将得到的色谱图导入中药指纹图谱分析仪检测得到活血止痛膏的特征图谱。
2.如权利要求1所述的活血止痛膏的特征图谱测定方法，其特征在于还包括在相同实验条件下测定大黄素甲醚的色谱图，处理并获得活血止痛膏特征图谱的各特征峰的相对保留时间。。
3.如权利要求1或3所述的活血止痛膏的特征图谱测定方法，其特征在于，所述的色谱条件为色谱柱以十八烷基键和硅胶为填充剂，流动相由体积比为35 65 85 :15的A相和B相组成，A相为甲醇或乙腈，B相为质量分数为O. 05 O. 15%的磷酸或O. 1% 1. 5%的冰醋酸，梯度洗脱，检测波长为254±2nm，流速为O. 5 1. 5ml/min,柱温为30 40°C，进样液的进样量为10 20 μ I。
4.如权利要求2所述的活血止痛膏的特征图谱测定方法，其特征在于梯度洗脱的时间及流动相比例为0 5min，A相35 40%,B相65 60% ；5 10min，A相40 45%、B 相60 55% ；10 25min，A 相45 62%、B 相55 38% ；25 35min，A 相62 83%、B 相38 17% ；35 40min，A 相83 85%、B 相17 15% ；40 65min，A 相85 85%、B 相15 15%。
5.如权利要求1或2所述的活血止痛膏的特征图谱测定方法，其特征在于至少取15批标准活血止痛膏分别进行浸提操作，并将得到的进样液分别注入液相色谱仪中进行试验。
6.如权利要求1或2所述的活血止痛膏的特征图谱测定方法，其特征在于，浸提操作为取5 10片标准活血止疼膏除去盖衬，剪成小碎片，加入50 200ml的三氯甲烷，浸泡30 60分钟，搅拌后倾取得到一次膏液，然后加50 IOOml的甲醇，搅拌，静置5 10分钟，倾取得到二次膏液，残渣再加50 IOOml的甲醇，搅拌，静置5 10分钟，倾取得到三次膏液，合并上述所得膏液，水浴蒸干，将所得膏体加甲醇溶解，过滤后转移至IOml的第一容量瓶内并加甲醇定容，然后再精密量取第一容量瓶内的溶液2ml转移至IOml的第二容量瓶内并加甲醇定容，定容后的溶液即为进样液。
7.—种活血止痛膏的质量检测方法，其特征在于是通过数据采集单元对按相同的实验条件下测定的活血止痛膏产品的色谱图进行采集，数据采集单元将采集的色谱图输入至处理单元，处理单元调取已测得的活血止痛膏的特征图谱与输入的色谱图进行检测和对照，然后输出检测结果信号至显示单元，显示单元显示产品的质量状况。
全文摘要
本发明公开了一种活血止痛膏的特征图谱测定方法，是将各标准活血止痛膏在相同的浸提操作下浸提得到的进样液分别注入液相色谱仪，在相同的色谱条件下进行分离试验，然后将得到的色谱图导入中药指纹图谱分析仪检测得到活血止痛膏的特征图谱。中药指纹图谱分析仪应理解为安装有中药指纹图谱分析软件且可进行运行的设备。通过上述方法，可有效测定出活血止疼膏制剂的特征图谱，且操作方便、重现性好。
文档编号G01N30/02GK103048408SQ20121058964
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月29日 优先权日2012年12月29日
发明者刘道芳, 宋社吾, 刘海兵, 谢红星, 田湘玲, 徐莉莉, 廖华宁, 杨莉 申请人:安徽安科余良卿药业有限公司