一种治咳川贝枇杷滴丸的hplc指纹图谱测定方法
【专利摘要】一种治咳川贝枇杷滴丸的HPLC指纹图谱测定方法，包括以下步骤：（1）治咳川贝枇杷滴丸供试品溶液的制备：精密称定治咳川贝枇杷滴丸，用30%-100%的乙醇作为提取溶剂，超声提取，作为供试品溶液；（2）将步骤（1）得到的溶液注入高效液相色谱仪进行测定，得到治咳川贝枇杷滴丸的指纹图谱。本发明根据治咳川贝枇杷滴丸的自身特点，采用HPLC法建立指纹图谱，找到了优化的色谱条件，使测定结果精密，重现性和稳定均良好。
【专利说明】一种治咳川贝枇杷滴丸的HPLC指纹图谱测定方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，尤其是涉及一种治咳川贝枇杷滴丸的HPLC指纹图谱测定方法。
【背景技术】
[0002]治咳川贝枇杷滴丸是由枇杷叶、平贝母、桔梗、水半夏、薄荷脑组成，采用现代化制剂工艺技术精制而成，具有宣肺降气、清热化痰的作用，用于痰热郁肺所致咳嗽，症见咳嗽、咯痰、咽干、咽痛、发热，全身不适；感冒及支气管炎见上述症候者，是受国家重点保护的中药品种。
[0003]中药质量的优劣，归根到底在于其内所含化学成分及其含量上存在的差异。这种差异可以通过中药的色谱指纹图谱反应出来。作为多组分复杂样品的整体性评价中药质量的有效控制手段，中药指纹图谱是目前能够为国内外广泛接受的全面评价中药质量模式的一种方法。
[0004]目前有关于治咳川贝枇杷滴丸指纹图谱方面的研究在国内外尚未见报道，为了更好的控制其质量，保证临床用药的安全性和有效性，更好的指导生产，使工艺控制更加严格合理，有必要研究建立其指纹图谱质量控制方法。
【发明内容】
[0005]本发明提供一种治咳川贝枇杷滴丸的HPLC指纹图谱测定方法，该方法包括以下步骤:
[0006](I)治咳川贝枇杷滴丸供试品溶液的制备:精密称定治咳川贝枇杷滴丸，用30%-100%的乙醇作为提取溶剂，超声提取，作为供试品溶液；
[0007](2)将步骤(I)得到的溶液注入高效液相色谱仪进行测定，得到治咳川贝枇杷滴丸的指纹图谱。
[0008]优选的，步骤(I)中提取溶剂为30%乙醇或80%乙醇。
[0009]进一步，步骤(2)中的液相色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。
[0010]优选的，步骤⑵中的液相色谱采用0.2%甲酸水溶液-乙腈做流动相，液相色谱条件为:
[0011]色谱柱:ACQUITYUPLC HSS T3,1.8um, 2.1 X 100mm，Waters，以乙腈为流动相 A，以
0.2%甲酸水溶液为流动相B,进行梯度洗脱；柱温为40°C;流速为每分钟0.2ml,检测波长为320nm，梯度洗脱条件为:_时_ (miii) I流动相A (%)~I 流动相B (%)
?)5i)910 ^"
I195Λ
[0012]8--8X0
916J815
[0013]优选的，步骤(2)中的液相色谱采用0.2%甲酸水溶液-甲醇做流动相，液相色谱条件为:色谱柱:ACQUITY UPLC HSS T3,1.8um, 2.1 X 100mm, Waters，以甲醇为流动相 A,以0.2%甲酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；柱温为40°C ;流速为每分钟0.2ml，检测波长为320nm，梯度洗脱条件为:
I~时间(min) I流动tt A (%)~ 流动相B (%).-
825.075.0
[0014]----
928.072.0
_40.0
_^40.0
[0015]本发明的参照物溶液为绿原酸对照品:取绿原酸适量精密称定，加甲醇配制成每I毫升含0.1mg绿原酸的溶液。
[0016]分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各I μ 1，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，制定治咳川贝枇杷滴丸液相指纹图谱；供试品液相指纹图谱选择具有代表性的样品作为标准指纹图谱，供试品指纹图谱中应呈现25个共有峰，与参照物峰相应的峰为S峰，标为6号峰，计算各共有峰与S峰的相对保留时间。
[0017]各共有峰的与S峰的相对保留时间为:I号峰0.347、2号峰0.618、3号峰0.715、4号峰 0.864,5 号峰 0.932,6 号 S 峰 1.000,7 号峰 1.066,8 号峰 1.133,9 号峰 1.268、10 号峰 1.284、11 号峰 1.304、12 号峰 1.332、13 号峰 1.393、14 号峰 1.453、15 号峰 1.539、16 号峰 1.628,17 号峰 1.771,18 号峰 1.798,19 号峰 1.822,20 号峰 1.941,21 号峰 2.165,22 号峰 2.290,23 号峰 2.434,24 号峰 2.466,25 号峰 2.539。
[0018]本发明还提供了一种治咳川贝枇杷滴丸的质量控制方法，包括以下步骤:
[0019](I)取合格有的治咳川贝枇杷滴丸产品，按照上述测定方法建立治咳川贝枇杷滴丸的标准指纹图谱；
[0020](2)取待检的治咳川贝枇杷滴丸，按照上述测定方法得到指纹图谱；
[0021](3)将步骤(2)得到的指纹图谱与步骤(1)得到的标准指纹图谱进行对比，符合即为合格产品，不符合即为不合格产品。
[0022]其中，合格产品的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度不得低于0.90 ;非共有峰总面积不得大于总峰面积的10%。
[0023]本发明具有的优点和积极效果是:
[0024](I)本发明在建立治咳川贝枇杷滴丸的指纹图谱过程中，确认了 25个共有特征峰，并对其相对保留时间和相对峰面积进行了研究，保证了制剂的化学组成稳定性和使用安全性。
[0025](2)治咳川贝枇杷滴丸药味中化学成分复杂，要实现其特征指纹峰的分离难度大，本发明在建立起指纹图谱的过程中，采用了梯度洗脱的方法，解决了指纹特征峰难以分开和杂质峰的干扰问题。
[0026](3)建立治咳川贝枇杷滴丸标准指纹图谱，克服了单一成分含量测定难以反映整体含量的缺陷，可以从整体上、宏观上控制治咳川贝枇杷滴丸的内在质量。
[0027](4)以治咳川贝枇杷滴丸中各有效成分指纹图形作为一个整体看待，注重各个特征峰的前后顺序和相互关系，既避免了因只测定一、二个化学成分而判定治咳川贝枇杷滴丸整体质量的片面性，又减少了为质量达标而人为处理的可能性。为完整、准确评价治咳川贝枇杷滴丸的质量提供了新的方法和手段。
[0028](5)本发明方法稳定性好、精密度高、重现性好、便捷且易于掌握。
【专利附图】
【附图说明】
[0029]图1是本发明10批治咳川贝枇杷滴丸液相色谱图叠加图谱
[0030]图2是治咳川贝枇杷滴丸的液相色谱对照指纹图谱
【具体实施方式】
[0031]实施例1:治咳川贝枇杷滴丸的HPLC指纹图谱测定方法
[0032]1.1仪器和试剂
[0033]仪器:WatersACQUITY TM UPLC 超高效液相色谱仪，Masslynx ?4.0 工作站；
[0034]色谱柱:ACQUITYUPLC HSS T3,1.8um, 2.1 X 100mm, Waters
[0035]试剂:甲醇、乙腈、甲酸为色谱纯(Fisher)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
[0036]1.2参照物溶液的制备
[0037]绿原酸(自制，结构经过MS、UV、FIR、NMR确证)的保留时间为7.99min，在本条件下响应较强，与前后杂质基本能达到基线分离，因此，指定其为参照物。取绿原酸适量，精密称定，加甲醇配制成每I毫升中含0.1mg绿原酸的溶液，摇匀，即得。
[0038]I.3供试品溶液的制备
[0039]标准供试品溶液质量合格的10批治咳川贝枇杷滴丸作为标准品(天津中新药业集团股份有限公司第六中药厂提供，批号分别为630120、631017、631021、631024、631026、631036、631039、631045、631048、632002共10批)。精密称定0.5g，置于三角锥瓶中，精密加入80%乙醇水溶液10mL，超声提取15min，静置至室温，滤过，取续滤液，即得。
[0040]1.3.1、提取溶剂醇水比例的选择
[0041]考察30%乙醇水溶液、50%乙醇水溶液、80%乙醇水溶液、100%乙醇溶液超声提取的供试品溶液在确定的检测方法下进行检测，发现100%乙醇溶液超声提取的供试品溶液的色谱图中个别色谱峰峰形较差，50%乙醇溶液超声提取的供试品溶液的色谱图中色谱峰峰面积均偏低，而30%乙醇溶液超声提取的供试品溶液和80%乙醇溶液超声提取的供试品溶液的色谱图基本无显著差异，考虑到供试品溶液的存放稳定性，故选择80%乙醇水溶液作为提取溶剂。
[0042]1.3.2、提取溶剂体积的选择
[0043]分别考察5mL、10mL、25mL、50mL80%乙醇溶液超声提取的供试品溶液在确定的检测方法下进行检测，发现5mL提取溶剂提取的供试品溶液的色谱图中各个峰的峰面积均较低，IOmL提取溶剂提取的供试品溶液的色谱图中色谱峰信息较丰富且峰形较好，25mL和50mL提取溶剂提取的供试品溶液的色谱图中分别色谱峰峰形较差，因此选择提取溶剂的体积为10mL。
[0044]1.3.3、提取时间的选择
[0045]考察80%乙醇溶液超声分别提取15min、30min、45min的供试品溶液在确定的检测方法下进行检测，发现三者的色谱图基本无显著差异，因此选择提取时间为15min。
[0046]1.4色谱条件
[0047]以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，(柱长为10cm，内径为2.1mm,粒径为1.8um)，以乙腈为流动相A，以0.2%甲酸水溶液为流动相B，按表1进行梯度洗脱；柱温为40°C ;流速为每分钟0.2ml，检测波长为320nm。理论塔板数按参照物峰计算应不低于80000。
[0048]表1梯度洗脱条件
【权利要求】
1.一种治咳川贝枇杷滴丸的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于，包括以下步骤: (O治咳川贝枇杷滴丸供试品溶液的制备:精密称定治咳川贝枇杷滴丸，用30%-100%的乙醇作为提取溶剂，超声提取，作为供试品溶液； (2)将步骤(1)得到的溶液注入高效液相色谱仪进行测定，得到治咳川贝枇杷滴丸的指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于:所述步骤(1)中提取溶剂为30%乙醇或80%乙醇。
3.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于:所述步骤(2)中的液相色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。
4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于:所述液相色谱采用0.2%甲酸水溶液-乙腈做流动相。
5.根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于:所述步骤(2)中的液相色谱条件为: 色谱柱:ACQUITY UPLC HSS T3,1.8um, 2.1 X 100mm, Waters,以乙腈为流动相 A，以0.2%甲酸水溶液为流动相B,进行梯度洗脱；柱温为40°C;流速为每分钟0.2ml,检测波长为320nm，梯度洗脱条件为:
BtfSJ Cmia) 流动相A (%)流动相B (%) 05.095.0
15.095.0813.087.0。 916583.5 25 24,0 76.0
6.根据权利要求5所述的测定方法，其特征在于:所述液相色谱采用0.2%甲酸水溶液-甲醇做流动相。
7.根据权利要求6所述的测定方法，其特征在于:所述步骤(2)中的液相色谱条件为:色谱柱:ACQUITY UPLC HSS T3,1.8um, 2.1 X 100mm, Waters,以甲醇为流动相 A,以 0.2% 甲酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；柱温为40°C;流速为每分钟0.2ml，检测波长为320nm，梯度洗脱条件为: ^~时间(min)流动相A (%)I 流动相B (%) O12J88Λ 825,075,0928:072:0° 2060Λ40i 25600400
8.一种治咳川贝枇杷滴丸的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤:(1)取合格的治咳川贝枇杷滴丸产品，按照权利要求1-7所述的测定方法建立治咳川贝枇杷滴丸的标准指纹图谱； (2)取待检的治咳川贝枇杷滴丸，按照权利要求1所述的测定方法得到指纹图谱； (3)将步骤(2)得到的指纹图谱与步骤(1)的到的标准指纹图谱进行对比，符合即为合格产品，不符合即为不合格产品。
【文档编号】G01N30/02GK103487528SQ201310472601
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年10月11日 优先权日:2013年10月11日
【发明者】刘丹, 王金磊, 杨柳 申请人:天津中新药业集团股份有限公司第六中药厂