血浆8-异前列烷的用途
【专利摘要】本发明公开了血浆8-异前列烷在制备预测肺动脉高压患者预后效果的试剂盒中的用途，属于药物化学领域，本发明通过一项前瞻性、临床对照队列试验研究证明8-异前列烷在肺动脉高压患者血浆中浓度显著升高，且与WHO肺高压功能分级以及血流动力学指标有很好的相关性。血浆8-异前列烷浓度>97pg/ml提示患者生存率较差，是预测患者预后独立的风险因素和新的生物标志物。
【专利说明】 血浆8-异前列烷的用途
【技术领域】:
[0001 ] 本发明涉及药物化学领域，尤其涉及血浆8-异前列烷，特别是血浆8-异前列烷的新的用途。
【背景技术】:
[0002]8-异前列烷是脂质过氧化代谢特异性产物，在体内生成，稳定存在于血浆、组织液、体液中，且无种属差异。正常机体含量少，日常差别不大。8-异前列烷被广泛地认为是反映慢性心力衰竭的生化标志物。机体在氧化应激/损伤水平升高时大量产生8-异前列烷，因此肺动脉高压患者8-异前列烷水平也显著增加。最近的ー项研究结果显示，在110名PAH患者中尿中8-异前列烷水平明显升高，是独立的预后风险因素。但是尿中8-异前列烷浓度与这些患者血流动力学參数、6分钟步行距离相关性不高，且缺乏正常对照。但血浆中8-异前列烷水平是否能评估肺动脉高压患者生存率和预后尚未见报道。
【发明内容】
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[0003]本发明的目的在于提供了一种血浆中8-异前列烷的新的用途，所述的这种血浆中8-异前列烷的新的用途要解决现有生物标志物预测肺动脉高压患者生存率和预后效果不佳的技术问题。
[0004]本发明提供了血浆8-异前列烷在制备预测肺动脉高压患者预后效果的试剂盒中的用途。
[0005]本发明是采用(Cayman公司)的酶联免疫吸附(EIA)试剂盒来检测血浆中的8_异前列烷的浓度。酶联免疫试剂盒来检测血浆中的8-异前列烷的浓度方法是经过气相色谱/质谱法确定，并按照Cayman公司的酶联免疫试剂盒说明书推荐的常规使用方法。
[0006]发明人通过试剂盒检测血浆中的8-异前列烷的浓度，经过实验发现血浆8-异前列烷浓度>97pg/ml提示患者生存率较差，是预测患者预后独立的风险因素和新的生物标志物。
[0007]本发明和已有技术相比，其效果是积极和明显的。本发明通过ー项前瞻性、临床对照队列试验研究证明8-异前列烷在肺动脉高压患者血浆中浓度显著升高，且与WHO肺高压功能分级以及血流动力学指标有很好的相关性。血浆8-异前列烷浓度>97pg/ml提示患者生存率较差，是预测患者预后独立的风险因素和新的生物标志物。
【专利附图】
【附图说明】:
[0008]图1是标准曲线制备的示意图。
[0009]图2显示了标准曲线和样品设计的方案。
[0010]图3显示了样品浓度与吸光度值的标准曲线。
[0011]图4是8-异前列烷在肺动脉高压患者血浆中明显升高。
[0012]图5是血浆8-异前列烷浓度>97pg/ml提示患者生存率较差。[0013]图6是血浆8-异前列烷与WHO肺高压功能分级相关。
【具体实施方式】:
[0014]实施例1
[0015]本发明中使用试剂盒按照双抗体一步夹心法进行EIA免疫吸附试验。将8-异前列烷抗体预先包被微孔，依次加入标本、标准品、8-异前列烷こ酰胆碱酯酶(AChE)标记的检测抗体(8-异前列烷示踪物，Tracer)，经过温育并彻底洗涤。用结合AChE的底物显色，最终转化为深浅不同的黄顔色，用酶标仪在412nm波长下測定吸光度值，根据标准品的线性关系计算样品浓度。样品中8-异前列烷浓度与计算转换后的吸光度值呈正相关。该试剂盒适用于尿液、血浆中8-异前列烷浓度检测，灵敏性和特异性较好，可检测到的浓度至少为2.7pg/ml。试剂盒包括以下组成成分--①8-异前列烷EIA抗血清.’②8-异前列烷AChETracer !③8-异前列烷标准品原液(50ng/ml)冲液；④10XEIA缓冲液；? 400 X EIA洗涤液小鼠抗兔IgG预包被96孔板.’⑦96孔板覆盖膜Ellman试剂；@ EIA Tracer染料；⑩EIA抗血清染料。(本发明的实施例采用的试剂盒为=Caymen公司的的名称为“8-1soprostane EIA KU”，型号为N0.516351的试剂盒，具体使用说明书和采购可以根据Caymen公司的网站(www.caymanchem.com)或者其在全世界各地的经销商获取。)
[0016]具体检测步骤如下:
[0017](1) 1 XEIA缓冲液制备:将IOmllOXEIA缓冲液用90ml双蒸水稀释，制成I XEIA缓冲液备用。
[0018](2) IX洗涤液制备:将5ml400XEIA洗涤液用2L双蒸水稀释，制成I XEIA洗涤液备用。
[0019](3)EIA标准曲线制备:取100 u I浓度为50ng/ml的8-异前列烷标准品原液加入900 u I双蒸水制成5ng/ml贮存标准液。准备8支干净EP管，第I支加入900 yl I XEIA缓冲液，其余7支均加入750 u IlXEIA缓冲液；取100 u 15ng/ml标准液加入第I支EP管中充分混匀，标记为SI，从SI管中取500 u I混合液加入第2支EP管中，标记为S2 ;接下来从S2管中取500 ill混合液加入第3支EP管中，标记为S3，以此类推，直到S8为止。具体的制作过程见图1所示。
[0020](4)标准曲线和样品设计
[0021]取小鼠抗兔IgG预包被96孔板，按照下图设计标准曲线和加入样品。做两条标准曲线，样品需要做3个复孔，设计如图2所示。
[0022]BLK代表空白孔:不加入任何液体；
[0023]TA代表总结合力:只加入-异前列烷AChE Tracer ；
[0024]NSB代表非特异性结合:加入EIA缓冲液和8_异前列烷AChE Tracer ；
[0025]BO代表最大结合力:加入EIA缓冲液、8-异前列烷AChE Tracer和8_异前列烷EIA抗血清；
[0026]S1-S8代表标准曲线:加入各浓度的标准品、8-异前列烷AChE Tracer和8_异前列烷EIA抗血清；
[0027]1-24代表检测样品:加入样品、8-异前列烷AChE Tracer和8_异前列烷EIA抗血清；[0028](5)各个设计孔加入试剂成分和量
[0029]各个孔按照下图加入相应的试剂和量。
[0030]
【权利要求】
1.血浆8-异前列烷在制备`预测肺动脉高压患者预后效果的试剂盒中的用途。
【文档编号】G01N33/543GK103575879SQ201310548235
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年11月7日 优先权日:2013年11月7日
【发明者】荆志成, 张锐, 蒋鑫, 赵勤华, 王岚, 何晶 申请人:荆志成