一种检测二氯三(1,10-邻二氮杂菲)钌(Ⅱ)的电位传感器及其检测方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及传感器，具体地说是一种检测二氯三(1,10-邻二氮杂菲)钌(Ⅱ)的电位传感器及其检测方法和应用。电位传感器包括工作电极、参比电极和电位测定仪，电位测定仪通过导线分别连接工作电极和外参比电极，工作电极和外参比电极插入盛有检测液的检测池中，工作电极底部粘附有聚合物敏感膜，检测池中设有具有扰动溶液作用的动力装置；本发明提供的用于检测二氯三(1,10-邻二氮杂菲)钌(Ⅱ)的电位传感器灵敏度高、选择性高，同时该电位传感器能够用于基于DNA的生物传感；基于DNA的生物传感可通过选择不同的核酸适体，能够实现不同靶分子的检测，检测时能够与循环等温链置换聚合反应和杂交链式反应及纳米材料放大技术相结合，进一步提高检测的灵敏度、选择性。
【专利说明】—种检测二氯三(1, 10-邻二氮杂菲)钌(II )的电位传感器及其检测方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及传感器，具体地说是一种检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II ) (Dichlorotris (I, 10-phenanthroline) ruthenium(II))的电位传感器及其检测方法和应用。
【背景技术】
[0002]二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )是一种高效的化学发光试剂，广泛应用基于化学发光的分析技术。然而上述化学发光技术容易受到样品的颜色和浊度的影响，从而限制了其广泛应用。基于聚合物敏感膜离子选择性电极的电位检测技术灵敏度高、选择性好、响应速度快，且检测过程不受样品的颜色和浊度干扰。因而发展高灵敏的二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )聚合物敏感膜离子选择性电极具有重要的应用价值。
[0003]聚合物膜离子选择性电极具有操作简便、响应快速、设备价廉等优点，特别适合现场检测以及大批样品的检测，已广泛应用于全血、血清、尿、组织、细胞内液及其稀释液中各种电解质离子的直接测定。然而其应用多集中在电解质离子检测。核酸适体(Aptamer)是指利用指数富集的配体进化技术从特定的寡核苷酸库中筛选出对目标靶有特异性相互作用的寡核苷酸(DNA或RNA)，作为一种新型的分子识别元件，能够高效、特异地结合各种靶分子，具有易合成、易储存和稳定性好等优点；然而核酸适体本身不具有显示信号的功能。目前基于核酸适体的检测方法通常需要标记荧光、纳米材料，从而可产生检测信号，这类检测方法一方面检测成本高、操作繁琐；另一方面标记过程也影响了核酸适体的结合能力。
【发明内容】
[0004]本发明目的在于提供一种检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II ) (Dichlorotris (I, 10-phenanthrol ine) ruthenium (II))的电位传感器及其检测方法和应用。
[0005]为实现上述目的，本发明采用的技术方案为:
[0006]一种检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的电位传感器，包括工作电极、参比电极和电位测定仪，其特征在于:电位测定仪通过导线分别连接工作电极和外参比电极，工作电极和外参比电极插入盛有检测液的检测池中，工作电极底部设有聚合物敏感膜，检测池中设有具有扰动溶液作用的动力装置；
[0007]所述聚合物敏感膜由聚合物基体材料、增塑剂和阳离子交换剂按20-40:40-80:
0.1-10:0.1-10的重量份数比混合，而后融入到四氢呋喃溶液中，混均后在室温下放置12-24h，即得到有弹性的聚合物敏感膜；
[0008]所述聚合物基体材料为聚氯乙烯、羧基化聚氯乙烯、聚丁基丙烯酸酯、聚丙烯酸丁酯、聚醚酰亚胺、橡胶、溶胶凝胶膜、甲基丙烯酸甲酯-葵基甲基丙烯酸甲酯共聚物或丙烯酸正丁酯-甲基丙烯酸羟乙酯共聚物；增塑剂为邻-硝基苯辛醚、二 -2-乙基己基癸酯、癸二酸二丁酯或癸二酸二辛酯；阳离子交换剂为四(3，5-二(三氟甲基)苯基)硼酸钠，二壬基萘磺酸或二壬基萘磺酸盐或硼酸盐。[0009]所述工作电极与聚合物敏感膜之间设有传导层材料。
[0010]所述工作电极为液体电极或固体电极；其中，液体工作电极为内盛有内充液并插入有内参比电极的电极；工作电极为液体电极时敏感膜融入到四氢呋喃溶液中，混均后在室温下放置12-24h，而后黏附于电极载体底部；工作电极为固体电极时，敏感膜溶于二氯甲烷(预先通氮气除氧)中，膜材料滴加涂覆在固体电极底部表面。
[0011]所述固体工作电极为碳电极、金电极、铜电极、银电极、钼电极、氧化铟锡电极、氧化锌电极、硅电极、碳纤维电极、碳化硅电极、多孔金电极、碳纳米管修饰电极、金纳米修饰电极、钼纳米修饰电极、石墨烯修饰电极、C60修饰电极，多孔碳修饰电极、碳丝网印刷电极、金丝网印刷电极、纸芯片电极或陶瓷芯片电极；
[0012]所述传导层材料为3-烷基噻吩，聚吡咯、聚噻吩、聚苯胺、聚乙炔、聚正辛基噻吩、六聚噻吩、聚乙撑二氧噻吩、碳纳米管、石墨烯、钼纳米、金纳米、二硫化钥、介孔碳、多孔金或氧化铟锡纳米。
[0013]一种检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的方法，将所述电位传感器的工作电极和外参比电极插入含有待测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的检测液中，通过电位测定仪测定工作电极上聚合物敏感膜上的电位变化，根据电位变化信号以及标准工作曲线测得待测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )浓度。
[0014]一种检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的电位传感器的应用，所述电位传感器可作为基于DNA或核酸适体的生物传感器，对不同靶分子定量的检测。
[0015]进一步的是，将核酸适体作为识别分子，二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )作为嵌入分子，核酸适体和互补DNA形成双链DNA，二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )嵌入双链DNA，通过所述电位传感器中的电位仪测定靶分子与核酸适体作用后引起的指示离子二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )浓度变化导致的电位变化，根据电位变化信号以及标准工作曲线测得靶分子待测物浓度。
[0016]更进一步的是，加入二氯三(1,10-邻二氮杂菲)钌(II )浓度KT1-KT9摩尔，与双链DNA界面作用时间0.1-10小时，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应；而后测定靶分子与核酸适体作用后，加入二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )浓度KT1-1O-9摩尔，与双链DNA界面作用时间0.1-10小时，溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，两者差值的电位信号根据电位变化信号通过标准工作曲线测得靶分子的浓度。
[0017]或，加入二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )浓度KT1-1O-9摩尔，与双链DNA界面作用时间0.1-10小时，而后通过调节温度至95度，界面双链DNA解链，释放出二氯三(I, 10-邻二氮杂菲)钌(II )至缓冲溶液中，测定缓冲溶液中二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应；测定靶分子与核酸适体作用后，加入二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )浓度KT1-KT9摩尔，与双链DNA界面作用时间0.1-10小时，而后通过调节温度至95度，界面双链DNA解链，释放出二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )至缓冲溶液中，测定缓冲溶液中双链DNA释放的二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，两者差值根据电位变化信号通过标准工作曲线测得靶分子的浓度。
[0018]所述核酸适体加入于待检测液中，或与基底固定后加入于检测液中。
[0019]所述固定核酸适体和互补DNA的基底为四氧化三铁磁性纳米颗粒、磁性石墨烯基底、碳基底、金基底、铜基底、银基底、钼基底、氧化铟锡基底、氧化锌基底、碳纤维基底、碳化硅基底、多孔金基底、碳纳米管修饰基底、金纳米修饰基底、钼纳米修饰基底、石墨烯修饰基底、C60修饰基底，多孔碳修饰基底等表面、碳丝网印刷电极基底、金丝网印刷电极基底、纸芯片电极基底或陶瓷芯片电极基底。
[0020]所述核酸适体和互补DNA形成双链DNA为核酸适体与单条互补链形成双链DNA ;或核酸适体通过循环等温链置换聚合反应和杂交链式反应(Hybridization chainreaction, HCR)形成长的双链DNA。
[0021]所述核酸适体包括:以重金属离子、有机染料、氨基酸、有机小分子、核酸、RNA、多糖、酶、生长因子、抗体、细菌、细胞、病毒为配体的各类核酸适体。其中，核酸适体还可以用含有特定碱基序列的DNA所代替。
[0022]本发明所具有的优点:
[0023]本发明提供的用于检测二氯三(I, 10-邻二氮杂菲)钌(II ) (Dichlorotris (I, IO-phenanthroline) ruthenium (II))的电位传感器灵敏度高、选择性高，同时该电位传感器能够用于基于DNA的生物传感；基于DNA的生物传感可通过选择不同的核酸适体，能够实现不同靶分子的检测，检测时能够与循环等温链置换聚合反应和杂交链式反应及纳米材料放大技术相结合，进一步提高检测的灵敏度、选择性。
[0024]另，二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )是一种小分子，能够选择性的嵌入双链DNA。核酸适体是一种能够高效、特异地识别特定靶分子的DNA片段。通过引入与核酸适体互补的DNA单链，形成DNA双链，此时二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )能够选择性的嵌入双链DNA。靶分子与核酸适体作用前后，改变了溶液中或者核酸适体功能化基底表面二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的浓度，从而产生电极电位的变化，据此实现靶分子的检测。通过选择不同的核酸适体，该方法具有一定的通用性，能够实现不同靶分子的检测。通过引入循环等温链置换聚合反应和杂交链式反应(Hybridization chain reaction, HCR)形成长的双链DNA，或者纳米材料负载大量DNA，实现电位检测信号的放大。
【专利附图】
【附图说明】
[0025]图1为本发明实施例提供的传感器示意图。
[0026]图2为本发明实施例提供的传感器示意图。
[0027]图3为本发明实施例提供的液膜电极检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )实时电位响应图。
[0028]图4为本发明实施例提供的固体接触式电极检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )实时电位响应图。
[0029]图5为本发明实施例提供的磁性纳米表面核酸适体和互补DNA杂交链式反应形成长的双链DNA图。
【具体实施方式】
[0030]实施例1
[0031]电位传感器，包括工作电极1、外参比电极2、内参比电极3和电位测定仪4，电位测定仪4通过导线分别连接内参比电极3和外参比电极2，内参比电极3插入盛有内充液8(内充液为10_3摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II ))的工作电极I内，工作电极I和外参比电极2插入盛有检测液6的检测池5中，工作电极I为固定有聚合物敏感膜7的电极载体，检测池5中设有具有搅拌作用的磁性搅拌子9，检测池底配套有磁力搅拌器以转动磁力搅拌子。固定有聚合物敏感膜7的电极载体为聚氯乙烯管。
[0032]检测方法:
[0033]a.以阳离子交换剂四(3，5-二(三氟甲基)苯基)硼酸钠掺杂的聚合物膜为工作电极敏感膜，银-氯化银电极为内外参比电极，内参比电极与电化学工作站CHI760D的工作电极接头连接，外参比电极与参比电极接头连接(参见图1)，选择“开路电位-时间”技术测定电位值。
[0034]工作电极敏感膜的制备:按照质量百分数1%:33%:66%将四(3，5_ 二(三氟甲基)苯基)硼酸钠、聚氯乙烯、邻-硝基苯辛醚混合，所得混合物共345mg，将其溶解于3.5mL四氢呋喃溶液中，室温下在平底玻璃环(内径为3.6cm)中放置，约8h后四氢呋喃蒸发完毕，即得到均匀的聚合物敏感膜。
[0035]固定有聚合物敏感膜的电极载体工作电极的制备:将上述所得聚合物敏感膜用打孔器打取直径约0.7cm的聚合物敏感膜，并通过四氢呋喃将打取的膜固定于聚氯乙烯管底部。电极使用前在KT3M 二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )中活化约8h。
[0036]b.搅拌条件下，测定电极在KT3-KT9M标准溶液(KT3-KT9M标准溶液为KT3-KT9M的二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II ))中的电位响应(参见图3)，依据电位响应，作出电位变化值对二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )浓度的标准工作曲线。
[0037]c.将电极置入未知浓度二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的待测样品液中，记录电极电位的响应，而后根据标准曲线求得二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的浓度。
[0038]实施例2
[0039]电位传感器，包括工作电极1、参比电极2和电位测定仪3，电位测定仪3通过导线分别连接工作电极I和外参比电极2，工作电极I和外参比电极2插入盛有检测液的检测池4中，工作电极I为固定有聚合物敏感膜5的固体电极，检测池4中设有具有搅拌作用的磁性搅拌子6，检测池底配套有磁力搅拌器以转动磁力搅拌子(参见图2)。
[0040]检测方法:
[0041]a.以阳离子交换剂四(3，5-二(三氟甲基)苯基)硼酸钠掺杂的聚合物膜为工作电极敏感膜，银-氯化银电极为外参比电极，选择“开路电位-时间”技术测定电位值。
[0042]将50mg(其中四(3，5_ 二(三氟甲基)苯基)硼酸钠0.5mg,四(十二烷基)_四(4-氯苯基)硼酸铵(ETH500)5mg，聚合物膜甲基丙烯酸甲酯-葵基甲基丙烯酸甲酯44.5mg)膜组分溶于0.5mL 二氯甲烷(预先通氮气除氧)中，搅拌两小时后再通氮气除氧后备用。取100微升上述膜材料滴加在抛光处理的固体碳电极上，并将此电极置于恒温干燥箱中挥发干燥12h以上。
[0043]干燥后的电极即可浸泡于10_4moL/L Ru2+溶液中活化48h后测定。电极测定时使用Ag-AgCl作参比电极，测定时:固体电极I聚合物敏感膜I I样品溶液|3M KCl溶液
Ag-AgCl。
[0044]b.搅拌条件下，测定电极在KT3-KTkiM标准溶液中的电位响应，依据电位响应(参见图4)，作出电位变化值对二氯三(1，10_邻二氮杂菲)钌(II )浓度的标准工作曲线。[0045]c.将电极置入未知浓度二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的待测样品，记录电极电位的响应，而后根据标准曲线求得二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的浓度。
[0046]实施例3
[0047]与实施例1与2不同之处在于:本实施例发展基于上述实施例的电位传感，并以核酸适体识别和二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )为指示离子，采用发展的二氯三(I, 10-邻二氮杂菲)钌(II )作为检测器的电位传感方法。本实施例以农药腚虫脒检测为例，检测方法如下:
[0048]电位传感:包括工作电极1、参比电极2和电位测定仪3，电位测定仪3通过导线分别连接工作电极I和外参比电极2，工作电极I和外参比电极2插入盛有检测液的检测池4中，工作电极I为固定有聚合物敏感膜5的固体电极，检测池4中设有具有搅拌作用的磁性搅拌子6，检测池底配套有磁力搅拌器以转动磁力搅拌子(参见图2)。
[0049]以阳离子交换剂四(3，5-二(三氟甲基)苯基)硼酸钠掺杂的聚合物膜为工作电极敏感膜，银-氯化银电极为外参比电极，选择“开路电位-时间”技术测定电位值。
[0050]将10 μ L 25mmol/ L P0T-CH2C12溶液滴于金电极表面，完全干燥后再将50mg(其中四(3，5- 二(三氟甲基)苯基)硼酸钠0.5mg,四(十二烷基)_四(4-氯苯基)硼酸铵(ETH500)5mg，聚合物膜甲基丙烯酸甲酯-葵基甲基丙烯酸甲酯44.5mg)膜组分溶于0.5mL二氯甲烷(预先通氮气除氧)中，搅拌两小时后再通氮气除氧后备用。取100微升上述膜材料滴加在抛光处理的固体金电极上，并将此电极置于恒温干燥箱中挥发干燥12h以上。干燥后的电极即可浸泡于l(T4m0L/LRU2+溶液中活化48h后测定。
[0051]检测:
[0052](a)核酸适体功能化双链DNA界面的制备:将工作电极置于10_6M5’端巯基功能化的核酸适体(以腚虫脒为例)溶液中，核酸适体在电极表面反应24小时，进一步将金电极置于10_6M的巯基己醇中反应12h，将上述金电极置于10_6M与腚虫脒核酸适体部分互补的DNA作用2h，得到核酸适体功能化双链DNA界面。
[0053](b)建立标准工作曲线:步骤a所得双链DNA界面置于lmLlO—5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0054]步骤a所得双链DNA界面与10_3-10,摩尔啶虫脒标准溶液作用Ih后，界面与溶液分离，与上述标准溶液反应后的双链DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为标准溶液的电位响应。
[0055]根据标准溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值的电位变化信号建立标准工作曲线。
[0056](c)未知浓度啶虫脒的待测样品的测定:
[0057]步骤a所得双链DNA界面置于lmLlO—5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0058]步骤a所得双链DNA界面与未知浓度啶虫脒的待测样品作用Ih后，界面与溶液分离，与上述待测样品反应后的双链DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II)溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为待测样品的电位响应。
[0059]待测样品溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值，差值再通过标准工作曲线，最终得到测得待测样品中啶虫脒的浓度。
[0060]或，
[0061]步骤a所得双链DNA界面置于lmLlO—5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，而后再将界面置于pH7.410_3摩尔磷酸盐缓冲溶液中加热至95度，界面上结合的二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )释放到缓冲溶液中，再将工作电极置于缓冲溶液中，测定缓冲溶液中二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0062]步骤a所得双链DNA界面与未知浓度啶虫脒的待测样品作用Ih后，界面与溶液分离，与上述待测样品反应后的双链DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，而后再将界面置于PH7.410_3摩尔磷酸盐缓冲溶液中加热至95度，界面上结合的二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )释放到缓冲溶液中，再将工作电极置于缓冲溶液中，测定缓冲溶液中二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，待测样品溶液中释放到缓冲溶液的二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值，差值再通过标准工作曲线，最终得到测得待测样品中啶虫脒的浓度。
[0063]啶虫脒的核酸识体序列5- (SH) - (CH2) 6_TGTAA TTTGTCTGCAG CGGTTCTTGATCGCTGA-CACCATATTATGAA GA-3.与腚虫脒核酸适体部分互补的DNA序列为:3_AAGAACTAGC GACTGTGGRATAATAC TTCT-5
[0064]实施例中核酸适体也可以用重金属离子如钾、汞、铅、铜、锌、铀；有机染料如磺基罗丹明B、活性墨绿KE-4BD ;氨基酸如精氨酸、L-酪氨酸胺；有机小分子如可卡因、胆酸、阿斯巴甜(含苯丙氨酸)，(R)-沙利度胺、17 β-雌二醇、双酚A、腚虫脒；核酸如三磷酸腺苷、腺苷酸、二磷酸腺苷；RNA如TAR-RNA ;多糖如纤维二糖、唾液乳糖；酶如凝血酶、蛋白激酶、中心粒细胞弹性蛋白酶、HIV-1逆转录酶；毒素如蓖麻毒素；生长因子如碱性纤维母细胞生长因子、血小板源性生长因子B链；抗体如人免疫球蛋白IgE ;细菌和细胞如孢子、肺癌细胞、致病菌为配体的各类核酸适体替换。
[0065]实施例4
[0066]采用实施例3的工作电极，以核酸适体与DNA杂交链式反应相结合，实现电位检测信号放大。本实施例以双酚A检测为例，
[0067]检测方法如下:
[0068]a.将50ul异硫氰酸根修饰的磁性纳米置于5X 10_6M5’端氨基功能化的核酸适体(以双酚A为例)溶液中，37度反应I小时，磁性分离，再将上述核酸适体修饰的磁性纳米置于5%牛血清白蛋白的溶液中反应I小时，磁性分离得到核酸识体功能化磁性纳米颗粒。将核酸识体功能化磁性纳米颗粒与辅助DNA溶液反应2小时，在磁性纳米表面发生杂交链式反应，磁性分离，将磁性纳米置于DNA杂交缓冲溶液(1mM Tris-HCl+lmM EDTA+500mMNaCl+lmM MgCl2, pH7.4)中，构建了核酸适体功能化双链DNA界面。
[0069]其中，辅助DAN溶液为辅助DNA2和DNA3反应2小时后，加入辅助DNAl得到。[0070](b)建立标准工作曲线:30 μ L步骤a所得双链DNA界面分离后，置于lmLlO—5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0071]步骤a所得双链DNA界面与I(T3-K)-12M双酚A标准溶液作用Ih后，界面与溶液分离，与上述标准溶液反应后的双链DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为标准溶液的电位响应。
[0072]根据标准溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值的电位变化信号建立标准工作曲线。
[0073](c)未知浓度双酚A的待测样品的测定:
[0074]30 μ L步骤a所得双链DNA界面磁性分离后，置于lmLlO—5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II)溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0075]步骤a所得双链DNA界面与未知浓度双酚A的待测样品作用Ih后，界面与溶液分离，与上述待测样品反应后的双链DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为待测样品的电位响应
[0076]待测样品溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值，差值再通过标准工作曲线，最终得到测得待测样品中双酚A的浓度。
[0077]所述步骤a中，HCR反应如下(如图5所示):
[0078](I)异硫氰酸根末端磁性微粒溶液购自西安金磁纳米生物科技有限责任公司(xMag?)。实验中依据试剂盒标准程序进行核酸适体标记。取2支1.5mL离心管并一次标记为1、2、而后分别加入30 μ L标记好的xMag?异硫氰酸根末端磁性微粒溶液，磁性分离去上清。
[0079](2)离心管I中加入30微升DNA杂交缓冲溶液(1mM Tris-HCl+lmM EDTA+500mMNaCl+lmM MgCl2, pH7.4)，离心管2中加入30微升DNAl液，37°C水浴中反应lh，而后磁性分
尚取上清。
[0080](3)对于步骤2中的离心管，I中加入40微升DNA杂交缓冲溶液(1mMTris-HCl+lmM EDTA+500mM NaCl+lmM MgCl2, pH7.4)，2 中加入 40 微升 DNA2 和 DNA3 杂交反应溶液(加入前杂交反应时间2h)，37°C水浴中反应2h，而后磁性分离去上清。其中双酚A核酸适体序列如下:5’ -GGG CCG TTC GAA CAC GAG CAT GCC GGT GGG TGG TCA GGT GGG ATA GCGTTC CGC GTA TGG CCC AGC GCA TCA CGG GTT CGC ACC AGG ACA GTA CTC AGG TCA TCC TAG-3，，辅助 DNAl 的序歹Ij:3’ -GCG TGG TCC TGT CAT GAG TCC AGT AGG ATC ACT AAA AGG GTC TGA GGG-5’ ；辅助 DNA2 的序列:5’ -TGA TTT TCC CAG ACT CCC CGT GGA CCC CCT CAT-3’ ；辅助 DNA3 的序列:3’ GCA CCT GGG GGA GTA ACT AA A AGG GTC TGA GGG-5’。
[0081]实施例中核酸适体也可以用重金属离子如钾、汞、铅、铜、锌、铀；有机染料如磺基罗丹明B、活性墨绿KE-4BD ;氨基酸如精氨酸、L-酪氨酸胺；有机小分子如可卡因、胆酸、阿斯巴甜(含苯丙氨酸)，(R)-沙利度胺、17 β-雌二醇、双酚A、腚虫脒；核酸如三磷酸腺苷、腺苷酸、二磷酸腺苷；RNA如TAR-RNA ;多糖如纤维二糖、唾液乳糖；酶如凝血酶、蛋白激酶、中心粒细胞弹性蛋白酶、HIV-1逆转录酶；毒素如蓖麻毒素；生长因子如碱性纤维母细胞生长因子、血小板源性生长因子B链；抗体如人免疫球蛋白IgE ;细菌和细胞如孢子、肺癌细胞、致病菌为配体的各类核酸适体替换。
[0082]实施例中核酸适体也可以固定在碳纳米管、金纳米、四氧化三铁磁性纳米颗粒、石墨烯负载磁性纳米颗粒、石墨烯表面、金电极表面或碳电极表面。
[0083]实施例5
[0084]采用实施例3的工作电极，以核酸酶和自由基损伤DNA检测为例，检测方法如下:
[0085]a.核酸适体功能化双链DNA界面的制备:将工作电极置于10_6M5’端巯基功能化的随机序列DNA溶液中，DNA在电极表面反应24小时，进一步将金电极置于10-6Μ的巯基己醇中反应12h，将上述金电极置于10_6M与5’端巯基功能化的上述随机序列DNA部分互补的DNA作用2h，得到DNA功能化双链DNA界面。
[0086]b.建立标准工作曲线:步骤a所得双链DNA界面置于lmLlO—5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0087]步骤a 所得双链 DNA 界面分别于 0.lU/mL、lU/mL、5U/mL、10U/mL、30U/mL、50U/mL的核酸酶作用1min,而后分别加入ImM乙二胺四乙酸(EDTA)停止酶反应,界面与溶液分离，与上述不同浓度的核酸酶溶液反应后的双链DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中 剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为标准溶液的电位响应。
[0088]根据标准溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值的电位变化信号建立标准工作曲线。
[0089](c)未知浓度样品酶的待测样品的测定:步骤a所得双链DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0090]步骤a所得双链DNA界面与待测的样品酶溶液作用1min后，加入ImM乙二胺四乙酸(EDTA)停止酶反应，界面与溶液分离，与上述待测样品反应后的双链DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10_邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为待测样品的电位响应。
[0091]待测样品溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值，差值再通过标准工作曲线，最终得到测得待测样品中样品酶活度。
[0092]步骤a中，核酸适体/DNA的序列可以根据酶的选择性作用位点进行设计。如限制性内切酶Anal的碱基序列中含有5’ -TTA…TAA3’，省略部分为随机序列，与之互补的序列中含有3’ -ΑΑΤ...ΑΤΤ5’。其它限制性内切酶按照上述原则进行设计。
[0093]步骤b中，待测物亦可以用于与核酸适体/DNA相互作用的物质，包括脱氧核糖核酸酶、限制性内切酶、外切核酸酶、连接酶、核酸酶S1、核酸酶和其抑制剂的混合物，羟基自由基，或者抗氧化剂和羟基自由基混合溶液。
[0094]实施例6
[0095]采用实施例3的工作电极，以三磷酸腺苷检测为例，采用石墨烯作为二氯三(I, 10-邻二氮杂菲)钌(II )的嵌入载体，检测方法如下:
[0096](a)核酸适体功能化DNA界面的制备:将工作电极置于10_6M5’端氨基或羧基功能化的核酸适体(以三磷酸腺苷ATP为例)中，核酸适体在电极表面反应24小时，进一步将金电极置于10_6M的巯基己醇中反应12h，
[0097](b)建立标准工作曲线:步骤a所得DNA界面置于lmg/mL石墨烯溶液中2h，而后再置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三α，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0098]步骤a所得DNA界面与KT2-KT9M三磷酸腺苷标准溶液作用Ih后，而后再置于lmg/mL石墨烯溶液中2h，界面与溶液分离，与上述标准溶液反应后的DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )与石墨烯相互作用，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为标准溶液的电位响应。
[0099]根据标准溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值的电位变化信号建立标准工作曲线。
[0100](C)未知浓度三磷酸腺苷的待测样品的测定:
[0101]步骤a所得DNA界面置于lmg/mL石墨烯溶液中2h，而后再置于lmLlO—5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0102]步骤a所得DNA界面与未知浓度三磷酸腺苷的待测样品溶液作用Ih后，而后置于lmg/mL石墨烯溶液中2h，界面与溶液分离，与上述待测样品反应后的DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )与石墨烯相互作用，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为待测样品的电位响应。
[0103]待测样品溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值，差值再通过标准工作曲线，最终得到测得待测样品中三磷酸腺苷浓度。
[0104]实施例中核酸适体也可以用重金属离子如钾、汞、铅、铜、锌、铀；有机染料如磺基罗丹明B、活性墨绿KE-4BD ;氨基酸如精氨酸、L-酪氨酸胺；有机小分子如可卡因、胆酸、阿斯巴甜(含苯丙氨酸)，(R)-沙利度胺、17 β-雌二醇、双酚A、腚虫脒；核酸如三磷酸腺苷、腺苷酸、二磷酸腺苷；RNA如TAR-RNA ;多糖如纤维二糖、唾液乳糖；酶如凝血酶、蛋白激酶、中心粒细胞弹性蛋白酶、HIV-1逆转录酶；毒素如蓖麻毒素；生长因子如碱性纤维母细胞生长因子、血小板源性生长因子B链；抗体如人免疫球蛋白IgE ;细菌和细胞如孢子、肺癌细胞、致病菌为配体的各类核酸适体替换。
[0105]同时，石墨烯载体亦可以采用碳纳米管、二硫化钥或二硫化钨进行替换。
[0106]实施例7[0107]采用实施例4的工作电极，用于DNA的检测，具体为:
[0108]检测方法如下:
[0109]a.将50ul异硫氰酸根修饰的磁性纳米置于DNA识别探针(该探针末端部分与待测DNA碱基序列互补)溶液中，37度反应I小时，磁性分离，再将上述核酸适体修饰的磁性纳米置于5%牛血清白蛋白的溶液中反应I小时，磁性分离得到DNA功能化磁性纳米颗粒。将DNA功能化磁性纳米颗粒与辅助DNA溶液反应2小时，在磁性纳米表面发生杂交链式反应，磁性分离，将磁性纳米置于DNA杂交缓冲溶液(1mM Tris-HCl+lmM EDTA+500mMNaCl+lmM MgCl2, pH7.4)中，构建了核酸适体功能化双链DNA界面。
[0110]其中，辅助DAN溶液为辅助DNA2和DNA3反应2小时后，加入辅助DNAl得到。
[0111](b)建立标准工作曲线:
[0112]30 μ L步骤a所得双链DNA界面，磁性分离后置于lmLlO—5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II)溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0113]步骤a所得双链DNA界面与ΙΟ+ΙΟ—18摩尔待测DNA作用Ih后，界面与溶液分离，与上述标准溶液反应后的双链DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为标准溶液的电位响应。
[0114]根据标准溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值的电位变化信号建立标准工作曲线。
[0115](C)未知浓度DNA的待测样品的测定:
[0116]30 μ L步骤a所得双链DNA界面磁性分离后，置于lmLlO—5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II)溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0117]步骤a所得双链DNA界面磁性分离后与待测样品作用Ih后，界面与溶液分离，与上述待测样品反应后的双链DNA界面置于lmL10_5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为待测样品的电位响应
[0118]待测样品溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值，差值再通过标准工作曲线，最终得到测得待测样品中DNA的浓度。
[0119]所述步骤a中，HCR反应如下(如图5所示):
[0120](I)异硫氰酸根末端磁性微粒溶液购自西安金磁纳米生物科技有限责任公司(xMag?)。实验中依据试剂盒标准程序进行核酸适体标记。取2支1.5mL离心管并一次标记为1、2、而后分别加入30 μ L标记好的xMag?异硫氰酸根末端磁性微粒溶液，磁性分离去上清。
[0121](2)离心管I中加入30微升DNA杂交缓冲溶液(1mM Tris-HCl+lmM EDTA+500mMNaCl+lmM MgCl2, ρΗ7.4)，，离心管2中加入30微升DNAl液，37°C水浴中反应Ih,而后磁性
分离取上清。
[0122](3)对于步骤2中的离心管，I中加入40微升DNA杂交缓冲溶液(1mMTris-HCl+lmM EDTA+500mM NaCl+lmM MgCl2, pH7.4)，2 中加入 40 微升 DNA2 和 DNA3 杂交反应溶液(加入前杂交反应时间2h)，37°C水浴中反应lh，而后磁性分离去上清。其中双酚A核酸适体序列如下:5’ -GGG CCG TTC GAA CAC GAG CAT GCC GGT GGG TGG TCA GGT GGG ATA GCGTTC CGC GTA TGG CCC AGC GCA TCA CGG GTT CGC ACC AGG ACA GTA CTC AGG TCA TCC TAG-3，，辅助 DNAl 的序歹Ij:3’ -GCG TGG TCC TGT CAT GAG TCC AGT AGG ATC ACT AAA AGG GTC TGA GGG-5’ ；辅助 DNA2 的序列:5’ -TGA TTT TCC CAG ACT CCC CGT GGA CCC CCT CAT-3’ ；辅助 DNA3 的序列:3’ GCA CCT GGG GGA GTA ACT AA A AGG GTC TGA GGG-5’。
[0123]本实施例步骤a中，DNA的序列可以根据待测DNA序列进行设计。
[0124]实施例8
[0125]检测方法如下:
[0126]电位传感:包括工作电极1、参比电极2和电位测定仪3，电位测定仪3通过导线分别连接工作电极I和外参比电极2，工作电极I和外参比电极2插入盛有检测液的检测池4中，工作电极I为固定有聚合物敏感膜5的固体电极，检测池4中设有具有搅拌作用的磁性搅拌子6，检测池底配套有磁力搅拌器以转动磁力搅拌子(参见图2)。
[0127]以阳离子交换剂四甲苯基硼酸钠掺杂的聚合物膜为工作电极敏感膜，银-氯化银电极为外参比电极，选择“开路电位-时间”技术测定电位值。
[0128]将10 μ L 25mmol/ L POT-CH2Cl2溶液滴于铜电极表面，完全干燥后再将50mg (其中0.5mg四甲苯基硼酸钠，四(十二烧基)-四(4-氯苯基)硼酸铵(ETH500) 5mg,聚合物膜甲基丙烯酸甲酯-葵基甲基丙烯酸甲酯44.5mg)膜组分溶于0.5mL 二氯甲烷(预先通氮气除氧)中，搅拌两小时后再通氮气除氧后备用。取100微升上述膜材料滴加在抛光处理的固体铜电极上，并将此电极置于恒温干燥箱中挥发干燥12h以上。干燥后的电极即可浸泡于10_3mOL/L Ru2+溶液中活化24h，10_9mOL/L Ru2+溶液中活化24h后用于测定。
[0129]本实施例用于IgG的检测，检测过程如下:
[0130]将ImL xMag?异硫氰酸根末端磁微粒磁性分离后置于ImL羊抗小鼠IgG抗体溶液中，37度反应0.5小时，采用清洗液清洗，磁性分离，再将上述核酸适体修饰的磁性纳米置于5%牛血清白蛋白的溶液中反应I小时，磁性分离得到抗体标记的磁性纳米颗粒。
[0131](b)建立标准工作曲线:
[0132]20 μ L抗体标记的磁性纳米颗粒，磁性分离后与20 μ L免疫反应缓冲液(500mL含有 4g NaCl, 0.1g KCl, 0.72g Na2HPO4, 0.12gKH2P04)，免疫反应一小时，磁性分离加入 20 μ LDNA标记的羊抗小鼠IgG抗体，免疫反应一小时。磁性分离后加入与标记DNA互补的DNA中反应一小时，磁性分离后置于lmL10_6摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0133]20 μ L抗体标记的磁性纳米颗粒，磁性分离后与20 μ L10_6-106ng/mL IgG标准溶液(500mL 含有 4g NaCl, 0.1g KCl, 0.72gNa2HP04, 0.12g KH2PO4)，免疫反应一小时，磁性分离加入20 μ L DNA标记的羊抗小鼠IgG抗体，免疫反应一小时。磁性分离后加入与标记DNA互补的DNA中反应一小时，磁性分离后置于lmLlO—5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为标准溶液的电位响应。
[0134]根据标准溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值的电位变化信号建立标准工作曲线。
[0135](c)未知浓度IgG的待测样品的测定:
[0136]20 μ L抗体标记的磁性纳米颗粒，磁性分离后与20 μ L免疫反应缓冲液(500mL含有 4g NaCl, 0.1g KCl, 0.72g Na2HPO4, 0.12g KH2PO4)，免疫反应一小时，磁性分离加入 20 μ LDNA标记的羊抗小鼠IgG抗体，免疫反应一小时。磁性分离后加入与标记DNA互补的DNA中反应一小时，磁性分离后置于lmL10_6摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为空白。
[0137]20 μ L抗体标记的磁性纳米颗粒，磁性分离后与20 μ L未知样品溶液，免疫反应一小时，磁性分离加入20 μ L DNA标记的羊抗小鼠IgG抗体，免疫反应一小时。磁性分离后加入与标记DNA互补的DNA中反应一小时，磁性分离后置于lmLlO—5摩尔二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )溶液中，作用I小时，界面与溶液分离，将工作电极置于分离后溶液，测定溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应，作为待测样品的电位响应。
[0138]待测样品溶液中剩余二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )产生的电位响应于空白的差值，差值再通过标准工作曲线，最终得到测得待测样品中IgG的浓度。
[0139]本实施例中如阳离子交换剂可以是四苯基硼酸钠(tetraphenylborate),四甲苯基硼酸钠(tetra (p-tolyl) borate)，四对甲苯基硼酸钠，四(4_氟基苯基)tetrakis硼酸钠(4-fluorophenyl),四3，5-双(1，I, I, 3，3，3-全氟代_2甲氧基_2丙基苯基)硼酸钠(tetrakis-[3, 5-bis (I, I, I, 3, 3, 3-hexafluoro-2-methoxy-2-prop yl)phenyl]-borate)。
[0140]本实施例中的抗体可以根据待测物质的不同，选择相应的抗体和DNA标记抗。
【权利要求】
1.一种检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的电位传感器，包括工作电极、参比电极和电位测定仪，其特征在于:电位测定仪通过导线分别连接工作电极和外参比电极，工作电极和外参比电极插入盛有检测液的检测池中，工作电极底部设有聚合物敏感膜，检测池中设有具有扰动溶液作用的动力装置； 所述聚合物敏感膜由聚合物基体材料、增塑剂和阳离子交换剂按20-40:40-80:0.1-10:0.1-10的重量份数比混合，即得到有弹性的聚合物敏感膜； 所述聚合物基体材料为聚氯乙烯、羧基化聚氯乙烯、聚丁基丙烯酸酯、聚丙烯酸丁酯、聚醚酰亚胺、橡胶、溶胶凝胶膜、甲基丙烯酸甲酯-葵基甲基丙烯酸甲酯共聚物或丙烯酸正丁酯-甲基丙烯酸羟乙酯共聚物；增塑剂为邻-硝基苯辛醚、二 -2-乙基己基癸酯、癸二酸二丁酯或癸二酸二辛酯；阳离子交换剂为四(3，5-二(三氟甲基)苯基)硼酸钠，二壬基萘磺酸或二壬基萘磺酸盐或硼酸盐。
2.按权利要求1所述的检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II)的电位传感器，其特征在于:所述工作电极与聚合物敏感膜之间设有传导层材料。
3.按权利要求1或2所述的检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II)的电位传感器，其特征在于:所述工作电极为液体电极或固体电极；其中，液体工作电极为内盛有内充液并插入有内参比电极的电极。
4.按权利要求3所述的检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II)的电位传感器，其特征在于:所述固体工作电极为碳电极、金电极、铜电极、银电极、钼电极、氧化铟锡电极、氧化锌电极、硅电极、碳纤维电极、碳化硅电极、多孔金电极、碳纳米管修饰电极、金纳米修饰电极、钼纳米修饰电极、石墨烯修饰电极、C60修饰电极，多孔碳修饰电极、碳丝网印刷电极、金丝网印刷电极、纸芯片电极或陶瓷芯片电极； 所述传导层材料为3-烷基噻吩，聚吡咯、聚噻吩、聚苯胺、聚乙炔、聚正辛基噻吩、六聚噻吩、聚乙撑二氧噻吩、碳纳米管、石墨烯、钼纳米、金纳米、二硫化钥、介孔碳、多孔金或氧化铟锡纳米。
5.一种检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的方法，其特征在于:将所述电位传感器的工作电极和外参比电极插入含有待测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的检测液中，通过电位测定仪测定工作电极上聚合物敏感膜上的电位变化，根据电位变化信号以及标准工作曲线测得待测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )浓度。
6.一种检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的电位传感器的应用，其特征在于:所述电位传感器可作为基于DNA或核酸适体的生物传感器，对不同靶分子定量的检测。
7.按权利要求6所述的检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II)的电位传感器的应用，其特征在于:将核酸适体作为识别分子，二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )作为嵌入分子，核酸适体和互补DNA形成双链DNA，二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )嵌入双链DNA,通过所述电位传感器中的电位仪测定靶分子与核酸适体作用后引起的指示离子二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )浓度变化导致的电位变化，根据电位变化信号以及标准工作曲线测得靶分子待测物浓度。
8.按权利要求7所述的检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II)的电位传感器的应用，其特征在于:所述核酸适体加入于待检测液中，或与基底固定后加入于检测液中。
9.按权利要求8所述的检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II)的电位传感器的应用，其特征在于:所述固定核酸适体和互补DNA的基底为四氧化三铁磁性纳米颗粒、磁性石墨烯基底、碳基底、金基底、铜基底、银基底、钼基底、氧化铟锡基底、氧化锌基底、碳纤维基底、碳化硅基底、多孔金基底、碳纳米管修饰基底、金纳米修饰基底、钼纳米修饰基底、石墨烯修饰基底、C60修饰基底，多孔碳修饰基底等表面、碳丝网印刷电极基底、金丝网印刷电极基底、纸芯片电极基底或陶瓷芯片电极基底。
10.按权利要求8所述的检测二氯三(1，10-邻二氮杂菲)钌(II )的电位传感器的应用，其特征在于:所述核酸适体和互补DNA形成双链DNA为核酸适体与单条互补链形成双链DNA ;或核酸适体通过循环等温链置换聚合反应和杂交链式反应(Hybridizat1n chainreact1n, HCR)形成长的双 链DNA。
【文档编号】G01N27/416GK104034782SQ201410242054
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月3日 优先权日:2014年6月3日
【发明者】丁家旺, 秦伟 申请人:中国科学院烟台海岸带研究所