一种利用fgf21因子诊断奶牛隐性酮病的方法
【专利摘要】一种利用FGF21因子诊断奶牛隐性酮病的方法。FGF21因子与奶牛隐性酮病呈正相关，应用ELISA试剂盒和生化分析仪测定牛血清中FGF21因子浓度以及酮病、隐性酮病时奶牛血清指标，通过统计学分析FGF21与隐性酮病呈明显相关，与临床酮病无相关性；当335ng/ml<FGF21<443ng/ml时可以诊断为奶牛隐性酮病。该方法确定FGF21与奶牛隐性酮病呈正相关，奶牛血清FGF21可以替代BHBA诊断奶牛隐性酮病，因此能够较早的监测出隐性酮病将会减少奶牛养殖业的损失。
【专利说明】-种利用FGF21因子诊断奶牛隐性酮病的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种诊断奶牛隐性酮病的方法，特别是一种利用FGF21因子诊断奶牛 隐性酮病的方法。
【背景技术】
[0002] 奶牛养殖业是我国畜牧业产业支柱之一，但是奶牛酮病给奶牛业带来了较严重 经济损失。尤其是奶牛隐性酮病，由于隐性酮病临床症状不明显，这就给诊断和防治带来 了极大的困难，因此较早的监测出隐性酮病将会减少奶牛养殖业的损失。
[0003] FGF21是成纤维细胞生长因子家族成员之一。最新研究表明，FGF21刺激脂肪细胞 摄取葡萄糖，而对其它类型细胞没有这个作用，这种作用实际上是相当于增强了胰岛素活 性。肥胖小鼠注射FGF21后，脂肪组织葡萄糖转运蛋白1显著增力口。在饮食诱导肥胖、低血 糖和高甘油三酯水平情况下，FGF21对糖尿病老鼠具有保护作用。进一步的研究结果表明， 动物注射FGF21后，导致能量消耗增加，脂肪利用和脂质排泄加快。且有FGF21可以用来作 为诊断脂肪肝的报道。
[0004] 目前隐性酮病的监测主要是根据BHBA浓度变化，当1. 2mmol/L〈BHBA〈l. 6mmol/L 时可诊断为奶牛隐性酮病，但是此种方法敏感性较低，容易造成漏诊。因此需要寻找灵敏度 更高的因子进行奶牛隐性酮病的监测。
【发明内容】
[0005] 本发明提供一种利用FGF21因子诊断奶牛隐性酮病的方法，所述FGF21对奶牛酮 病时酮体改变比较敏感，特别是在奶牛隐性酮病阶段，阐明能量代谢特征性指标BHBA与体 内FGF21之间的关系，表明FGF21与奶牛隐性酮病呈正相关。
[0006] 本发明所采用的技术方案是：一种利用FGF21因子诊断奶牛隐性酮病的方 法，FGF21因子与奶牛隐性酮病密切相关，应用ELISA试剂盒和生化分析仪测定牛血清中 FGF21因子浓度以及酮病、隐性酮病时奶牛血清指标，通过统计学分析FGF21与隐性酮病呈 明显相关，与临床酮病无相关性；当335ng/ml〈FGF21〈443ng/ml时可以诊断为奶牛隐性酮 病。
[0007] 上述方案中的分析血清FGF21代谢指标与临床酮病组、隐性酮病组、健康组主要 检测结果，临床酮病组，隐性酮病组和健康组血清FGF21具有统计学意义，P〈0. 05 ;健康 组，隐性酮病组、临床酮病组比较血清中BHBA具有统计学意义，P〈0. 05 ;隐性酮病时血清 FGF21因子与BHBA呈正相关，r = 0.659, p = 0.005 ;临床酮病时血清FGF21因子与BHBA 无相关 r = 0· 005, p = 0· 979。
[0008] 本发明具有的有益效果是：本发明基于上述背景通过对奶牛临床酮病、隐性酮 病和健康奶牛血液中FGF21对奶牛酮病时重要中间代谢产物BHBA水平反应，明确隐性酮 病时奶牛体内FGF21变化规律，测量牛群样本中的代谢指标及FGF21因子，确定FGF21 与奶牛隐性酮病呈正相关，奶牛血清FGF21可以替代BHBA诊断奶牛隐性酮病，当335ng/ ml〈FGF21〈443ng/ml时可以确定奶牛为隐性酮病，因此能够较早的监测出隐性酮病将会减 少奶牛养殖业的损失。
【具体实施方式】
[0009] 下面结合实验对本发明进一步说明：
[0010] 动物实验：奶牛均来自黑龙江省密山某牛场，奶牛间年龄、胎次差异无统计学 意义，所有奶牛围产期TMR饲喂。BHBA>1.2mm 〇l/L作为诊断奶牛酮病标准，如果奶 牛血清中BHBA>1.6mmol/L，且表现明显临床症状，被诊断为临床酮病组；如果1. 2mmol/ L〈BHBA〈1. 6mmol/L，且没有明显临床症状，被诊断为隐性酮病组；BHBA〈1. 2mmol/L且没有 任何临床症状表现，作为健康组。其中健康30头，隐性30头，临床30头。此外，其中患 有乳腺炎，子宫炎，流产，由于药物导致的肝病，发热等疾病的奶牛被排除本试验。
[0011] 样品采集和处理
[0012] 所有奶牛均于早晨空腹抽取尾静脉血，不加抗凝剂，将采样试管置于冰盒之中，lh 之内被带回实验室，3000g离心15min，分离血清-20°c下保存备用。
[0013] 指标测定方法：FGF21使用RD牛成纤维细胞因子ELISA试剂盒，其余代谢指标分 别在自动生化分析仪上进行测定。
[0014] 数据分析：所有数据应用IBMSPSS19. 0软件进行分析，计量资料用均数以i±s表 示，组间均值差异显著性采用单因素方差统计分析，相关性分析采用Pearson直线相关性 分析。p〈0. 05为显著相关。
[0015] 实验结果：
[0016] 单因素方差分析90例奶牛的FGF21，血糖，BHBA，NEFA检测结果见表1。
[0017] 表1奶牛血清主要检测指标情况
[0018]
【权利要求】
1. 一种利用FGF21因子诊断奶牛隐性酮病的方法，其特征在于：FGF21因子与奶牛隐 性酮病密切相关，应用ELISA试剂盒和生化分析仪测定牛血清中FGF21因子浓度以及酮病、 隐性酮病时奶牛血清指标，通过统计学分析FGF21与隐性酮病呈明显相关，与临床酮病无 相关性；当335ng/ml〈FGF21〈443ng/ml时可以诊断为奶牛隐性酮病。
2. 根据权利要求1所述的利用FGF21因子诊断奶牛隐性酮病的方法，其特征在于：分 析血清FGF21代谢指标与临床酮病组、隐性酮病组、健康组主要检测结果，临床酮病组，隐 性酮病组和健康组血清FGF21具有统计学意义，P〈0. 05 ;健康组，隐性酮病组、临床酮病组 比较血清中BHBA具有统计学意义，P〈0. 05 ;隐性酮病时血清FGF21因子与BHBA呈正相关， r = 0· 659, p = 0· 005 ;临床酮病时血清 FGF21 因子与 BHBA 无相关 r = 0· 005, p = 0· 979。
【文档编号】G01N33/68GK104215774SQ201410418651
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年8月22日 优先权日:2014年8月22日
【发明者】徐闯, 陈媛媛, 夏成, 张洪友, 许秋实, 杨威 申请人:黑龙江八一农垦大学