栝楼桂枝汤的质量检测方法
【专利摘要】本发明提供了栝楼桂枝汤的质量检测方法，它是采用高效液相-串联质谱法（HPLC-MS)测定栝楼桂枝汤中瓜氨酸和Y-GABA含量的方法，其中，色谱条件：色谱柱：Ultimate?aq-c18S(4.6X100mm，3um);流动相为乙腈-0.1%甲酸水（15:85)，流速:0.3mL/min，柱温30。。;质谱条件：电喷雾离子源（ESI)，源喷射电压2500V;源温度：350°;正离子多反应监测（MRM)模式检测。本发明采用HPLC-MS法应用于复方栝楼桂枝汤中2种主要氨基酸含量测定，所建立的含量方法简便，准确，稳定，重复性好，与高效液相色谱法比较，缩短了分析的时间，灵敏度高，在一定质量浓度范围内被测物质有较好的线性关系，可作为栝楼桂枝汤中瓜氨酸与Y-氨基丁酸的含量测定方法。
【专利说明】栝楼桂枝汤的质量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及栝楼桂枝汤的质量检测方法。
【背景技术】
[0002] 复方栝楼桂枝汤来源于东汉末年张仲景的《金匮要略》[1]，由天花粉、白芍、桂枝、 生姜、甘草及大枣6味药组成。该方具有解肌调营，养营生津之功效，现代临床用于治疗颈 椎病、癫痫等。目前，该复方经临床剂量增减后被批准为福建省第二人民医院院内制剂（批 件号：闽2013S0001)，用于治疗太阳柔痉体强证，即脑卒中后肢体痉挛 [4]，症见肢体肌肉痉 挛为特征的临床病理综合征。
[0003] 处方中君药天花粉富含大量氨基酸，其中瓜氨酸和氨基丁酸是主要的具有生 理调节作用的物质。瓜氨酸不能通过食物蛋白得到，只能通过其他氨基酸进行转化，临床上 具有增强免疫力、促进血液循环、维持血糖平衡、保持胆固醇正常、维护肺功能、提高脑力清 晰度、降低压力、提高男性性功能等重要作用 [5]。
[0004] 氨基丁酸（简称Y-GABA)也是一种非蛋白氨基酸，是中枢神经系统中重要的 抑制性神经传达物质。Y -GABA具有临时降压、缓解精神压力、对胰腺癌细胞SW1990细胞的 生长及血管内皮生长因子表达的影响，以及作为哺乳动物摄食和味觉的调控因子等 [6]。因 此测量两种氨基酸的含量对于栝楼桂枝汤的质量控制评价有一定的意义。
[0005] 近年来，2010年版中国药典仅用瓜氨酸对天花粉进行定性鉴别，并无定量鉴别方 法，本文采用HPLC-MS法分别测定栝楼桂枝汤中瓜氨酸和γ -GABA的含量，为建立复方的质 量评价标准提供一定的理论依据。
[0006]
【权利要求】
1. 栝楼桂枝汤的质量检测方法，其特征在于：它是采用高效液相-串联质谱法 (HPLC-MS)测定栝楼桂枝汤中瓜氨酸和γ-GABA含量的方法，其中，色谱条件：色谱 柱：Ultimate ?△〇-〇18柱（4.6父10〇111111，34111);流动相为乙腈-0.1% 甲酸水（15:85)， 流速：〇· 3mL/min，柱温 30°C ; 质谱条件：电喷雾离子源（ESI)，源喷射电压2500V ;源温度：350° ;正离子多反应监测 (MRM)模式检测。
2. 根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：所述的质谱条件为：用于定量分 析的离子瓜氨酸m/z 176 -m/z 70,裂解电压（Fragmentor)为75V，碰撞能量（CE)为30eV; 氨基丁酸 m/z 104 -m/z 87,裂解电压（Fragmentor)为 50V，碰撞能量（CE)为 10eV。
3. 根据权利要求1或2所述的质量检测方法，其特征在于：所述的栝楼桂枝汤的制备 方法为：桂枝和生姜分别加10倍量水用蒸馏法提取6h，收集挥发油，将两者的药渣与天花 粉、白芍、生姜、甘草、大枣混合，按处方比例量加10倍量水煎煮2次，每次1. 5h，过滤合并两 次药液，浓缩药液，置-4°C冰箱保存备用。
4. 根据权利要求1或2所述的质量检测方法，其特征在于：它包括如下步骤： a、 混合对照品溶液制备：分别精密称取瓜氨酸和Y-GABA适量，用超纯水溶解，定容， 摇匀，配置成质量浓度为〇. 〇98mg/mL和1. 060mg/mL对照品贮备液，置4°C冰箱保存； b、 供试品溶液制备：精密量取栝楼桂枝汤lmL，用超纯水定容至100mL，作为供试品储 备液，临用前将供试品贮备液稀释25倍，定容，混匀，经0. 45 μ m微孔滤膜过滤，取续滤液混 匀，作为供试品溶液； c、 采用高效液相-串联质谱法（HPLC-MS)测定栝楼桂枝汤中瓜氨酸和γ-GABA含量。
【文档编号】G01N27/62GK104215707SQ201410443142
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月2日 优先权日:2014年9月2日
【发明者】李煌, 陈立典, 张玉琴, 徐伟, 褚克丹 申请人:福建中医药大学