一种睡莲花的检测方法
【专利摘要】本发明公开一种睡莲花的检测方法，包括睡莲花样品上C18色谱柱，采用甲醇-水进行梯度洗脱，得到色谱图，其中，水的体积百分数随时间变化为：0～10min，由95%降至90%；10～20min，由90%降至75%；20～40min，由75%降至55%；40～50min，由55%降至15%；50～60min，由15%降至0%；再将从色谱图上得到没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的色谱峰面积，标准曲线，得出睡莲花样品中没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的含量。本发明方法可以定量检测睡莲花中的没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素，且具有良好的准确度和重复性，从而实现睡莲花质量的有效控制。
【专利说明】一种睡莲花的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物检测领域，具体涉及一种睡莲花的检测方法。
【背景技术】
[0002] 睡莲花为睡莲科雪白睡莲)的干燥花蕾，分布于我国 新疆的南部地区，具有降热止咳、益心护脑、安神止痛功效，临床主要用于感冒发热、头痛咳 嗽、咽痛等表症，是维吾尔医常用的单方或复方抗病毒药中的主要药物。对睡莲花质量的有 效控制是保证药物获得稳定、可靠的疗效的前提。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一种睡莲花的检测方法，以提高现有睡莲花的质量控制水 平。
[0004] 本发明实现上述目的所采用的技术方案如下： 一种睡莲花的检测方法，步骤包括： (1) 睡莲花样品上C18色谱柱，采用甲醇-水进行梯度洗脱，得到色谱图，其中，水的体 积百分数随时间变化为：〇?10 min，由95%降至90% ;10?20 min，由90%降至75% ;20? 40 min，由 75% 降至 55% ;40 ?50 min，由 55% 降至 15% ;50 ?60 min，由 15% 降至 0% ; (2) 用没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的标准溶液绘制浓度-色谱峰面积的 标准曲线； (3) 从步骤（1)的色谱图上得到没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的色谱峰面 积，再代入步骤（2)的标准曲线，得出睡莲花样品中没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮 素的含量。
[0005] 进一步，步骤（1)中，用甲醇将睡莲花样品配制成甲醇溶液。
[0006] 本发明方法可以定量检测睡莲花中的没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素， 且具有良好的准确度和重复性，从而可以实现对睡莲花质量的有效控制。
【专利附图】
【附图说明】
[0007] 图1.供试样品溶液的色谱图； 图2.标准溶液的色谱图； 图3.供试样品溶液中没食子酸的一级质谱图； 图4.标准溶液中没食子酸的一级质谱图； 图5.供试样品溶液中没食子酸甲酯的一级质谱图； 图6.标准溶液中没食子酸甲酯的一级质谱图； 图7.供试样品溶液中烟花苷的一级质谱图； 图8.标准溶液中烟花苷的一级质谱图； 图9.供试样品溶液中槲皮素的一级质谱图； 图10.标准溶液中槲皮素的一级质谱图； 图11.供试样品溶液中没食子酸的二级质谱图； 图12.标准溶液中没食子酸的二级质谱图； 图13.供试样品溶液中没食子酸甲酯的二级质谱图； 图14.标准溶液中没食子酸甲酯的二级质谱图； 图15.供试样品溶液中烟花苷的二级质谱图； 图16.标准溶液中烟花苷的二级质谱图； 图17.供试样品溶液中槲皮素的二级质谱图； 图18.标准溶液中槲皮素的二级质谱图。
【具体实施方式】
[0008] 以下结合实施例及附图对本发明做进一步详细说明。
[0009] 6批睡莲花药材分别采购于新疆奇康哈博维药有限公司、维吾尔药业、维吾尔医 院，经鉴定为睡莲科雪白睡莲妙?/Aaea 的干燥花蕾。没食子酸对照品(批 号：110831-2012054,中国食品药品检定研究院)、没食子酸甲酯对照品、烟花苷对照品（新 疆药物研究所）、槲皮素对照品(批号=20111013,上海源叶生物科技有限公司） 液相色谱-质谱联用仪：包括Agilent 1200高效液相色谱仪，1100型紫外检测器，6310 ion trap液质联用系统，美国Agilent公司。
[0010] 检测过程如下： 1、供试样品溶液的制备：将6批睡莲花药材分别粉碎，分别精确称取1 g睡莲花药材粉 末，置于100 mL具塞锥形瓶中，加入50 mL甲醇，称重，超声处理30 min (功率80 W，频率 100 Hz)，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的质量，过滤，取滤液，用0. 45 μ m微孔滤膜过滤， 备用。
[0011] 2、标准溶液的制备：精确称取没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素，混合，用 甲醇溶解，得到一系列不同浓度的标准溶液。
[0012] 3、供试样品溶液用液相色谱-质谱联用仪进行测定，色谱条件：采用C18色谱 柱，以甲醇为流动相A、水为流动相B进行梯度洗脱，流速：lmL/min ;进样量：20 μ L ;柱温： 30°C，梯度洗脱时，流动相Β (水）体积百分数随时间变化为：0?10 min，由95%线性降至 90% ;10 ?20 min，由 90% 线性降至 75% ;20 ?40 min，由 75% 线性降至 55% ;40 ?50 min， 由55%线性降至15% ;50?60 min，由15%线性降至0%。得到的色谱图如图1所示。
[0013] 4、将一系列不同浓度的标准溶液在相同的色谱条件进行测定。以浓度为横坐标、 色谱峰面积为纵坐标绘制相应没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的浓度-色谱峰 面积标准曲线。得到没食子酸的线性回归方程为Y= 16065X - 462 (r = 0.9991)，没食子 酸甲酯的线性回归方程为Y = 74059X - 110. 43 (r = 0. 9991)，烟花苷线的性回归方程为 Y = 8558. 6X - 360. 59 (r = 0· 9997)，槲皮素的线性回归方程为 Y = 17285X - 76. 10 (r =0. 9991)。结果表明，没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素分别在0. 818?6. 428Pg、 0· 152?1.68Pg、l. 182?n.OOOPg和0· 124?1.02Pg范围内具有良好的线性关系。得到 的色谱图如图2所示。
[0014] 如图1和图2的色谱图可以看出，供试样品出现与标准溶液保留时间一致的色谱 峰。
[0015] 相应联用的质谱分析可进一步明确其中的A即为没食子酸、B即为没食子酸甲酯、 C即为烟花苷、D即为槲皮素。具体如下：质谱条件为：电喷雾负离子扫描模式（ESI+);雾 化气(氮气）压力为30 psi ;离子喷雾电压为3500 V ;干燥气(氮气）温度为350°C ;干燥气 流速为12 L/min ;-级质谱扫描范围为m/z 100?650 ;二级质谱扫描范围为m/z 100? 650。在全扫描一级质谱中，标准溶液中没食子酸出现m/zl68. 7分子离子峰，供试样品出现 的分子离子峰与之一致（图3?4);标准溶液中没食子酸甲酯出现m/zl82. 7分子离子峰， 供试样品出现的分子离子峰与之一致（图5?6);标准溶液中烟花苷出现m/z593. 3分子离 子峰，供试样品出现的分子离子峰与之一致（图7?8);标准溶液中槲皮素出现m/z300. 8分 子离子峰，供试样品出现的分子离子峰与之一致（图9?10)。在全扫描二级质谱中，以m/ zl68. 7作为母离子，破碎电压0. 4 V，标准溶液中没食子酸出现显著的离子碎片m/zl24. 7， 供试样品同样出现相应的离子碎片（图11?12);以m/zl82. 7作为母离子，破碎电压0.4V， 标准溶液中没食子酸甲酯出现显著的离子碎片m/zl23. 7、m/zl67. 6,供试样品同样出现相 应的离子碎片（图13?14);以m/z593. 3作为母离子，破碎电压1 V，标准溶液中烟花苷出 现显著的离子碎片m/z284. 7,供试样品同样出现相应的离子碎片（图15?16);以m/z300. 8 作为母离子，破碎电压〇. 6 V，标准溶液中槲皮素出现显著的离子碎片m/zl06. 7、m/zl50. 6、 m/z 178. 6,供试样品同样出现相应的离子碎片（图17?18)。
[0016] 由从步骤3得到的色谱图上分别测出没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素 的色谱峰面积，并将得到的色谱峰面积代入步骤4相应的标准曲线或回归线性方程，分别 得到6批睡莲花药材中没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的含量如下：
【权利要求】
1. 一种睡莲花的检测方法，步骤包括： (1) 睡莲花样品上C18色谱柱，采用甲醇-水进行梯度洗脱，得到色谱图，其中，水的体 积百分数随时间变化为：〇?10 min，由95%降至90% ;10?20 min，由90%降至75% ;20? 40 min，由 75% 降至 55% ;40 ?50 min，由 55% 降至 15% ;50 ?60 min，由 15% 降至 0% ; (2) 用没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的标准溶液绘制浓度-色谱峰面积的 标准曲线； (3) 从步骤（1)的色谱图上得到没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮素的色谱峰面 积，再代入步骤（2)的标准曲线，得出睡莲花样品中没食子酸、没食子酸甲酯、烟花苷和槲皮 素的含量。
2. 根据权利要求1所述睡莲花的检测方法，其特征在于，步骤（1)中，用甲醇将睡莲花 样品配制成甲醇溶液。
【文档编号】G01N30/02GK104267114SQ201410456354
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月10日 优先权日:2014年9月10日
【发明者】周晓英, 季志红, 陈金成, 李洁, 李柯翱, 丁文欢 申请人:新疆奇康哈博维医药研究院（有限公司）