用于清瘟败毒散中地黄的检测方法与流程

本发明涉及一种检测方法，具体涉及用于清瘟败毒散中地黄的检测方法。

背景技术：

清瘟败毒散是清代著名温病学家余师愚所创制的名方，载于其所著的《疫疹一得》一书中，现收录于《中华人民共和国兽药典》2010年版二部。本药由石膏、地黄、水牛角、黄连等14味药材组成，是“白虎汤”、“黄连解毒汤”和“犀角地黄汤”三方加减化裁而得。清瘟败毒散的处方包括:生石膏120g、生地黄30g、水牛角60g、黄连20g、栀子30g、牡丹皮20g、黄芩25g、赤芍25g、玄参25g、知母30g、连翘 30g、桔梗25g、甘草15g、淡竹叶25g；具有泻火解毒，凉血的功效，在兽药临床上主要用于治疗热毒发斑，高热神昏。

2010年版《中华人民共和国兽药典》二部中清瘟败毒散的质量标准仅有显微鉴别和黄连的薄层鉴别，很难控制其质量，保证产品的安全性、有效性与质量可控性。但现有技术中公开的地黄薄层鉴别方法的效果较差，不能满足需求。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是：现有技术中清瘟败毒散用地黄薄层鉴别方法效果较差，目的在于提供检测效果优异的用于清瘟败毒散中地黄的检测方法。

本发明通过下述技术方案实现：

用于清瘟败毒散中地黄的检测方法，包括以下步骤：

（1）利用清瘟败毒散制备供试品溶液；

（2）吸取供试品溶液点于硅胶薄层板上，以比例为14∶1∶0.1的三氯甲烷、甲醇、以及氨水为展开剂，展开，取出，晾干；

（3）喷以香草醛硫酸溶液，然后加热至斑点清晰。

现有技术中该地黄的薄层鉴别采用的展开剂组合种类多样，但由于不同药物中各组成成份不同，适用于其他药物的地黄薄层鉴别用展开剂的组合方式和组成比例并不能够适用于本发明清瘟败毒散中地黄的鉴别，而现有技术中用于清瘟败毒散中地黄鉴别的展开剂展开效果并不是很好。

通过上述配比的展开剂对供试品溶液展开，其展开性能优异，清瘟败毒散中其他组成成分对地黄无影响，且通过色谱显示可知，采用本发明的方法，供试品溶液的色谱上斑点分离度极佳，与对照药材溶液的色谱相对应的位置，供试品溶液的色谱显示相同颜色的斑点，且阴性样品溶液无干扰。

作为最优地处理方法，所述供试品溶液的制备过程如下：

取清瘟败毒散2g，加甲醇25ml，超声30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水10ml使其溶解，然后采用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解。

为了达到最佳的分离效果，所述硅胶薄层板采用硅胶G薄层板。

优选地，所述香草醛硫酸溶液的浓度为5%，加热温度为105℃以下。

进一步，所述硅胶薄层板上还点有对照药材溶液与阴性样品溶液，该对照药材溶液与阴性样品溶液的制备方法如下：

取对照药材地黄1g，加甲醇25ml，超声30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水10ml使其溶解，然后采用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，即制成对照药材溶液；

首先配置不包括地黄的清瘟败毒散处方，取处方量的1/500，加入加甲醇25ml，超声30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水10ml使其溶解，然后采用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，即制成阴性样品溶液。

本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：

本发明检测方法的展开性能优异，清瘟败毒散中其他组成成分对地黄检测效果无影响，且供试品溶液的色谱上斑点分离度极佳，阴性样品溶液对其无干扰，效果非常显著。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明实施例的限定。在附图中：

图1为实施例1的薄层层析图。

图2为实施例2的对照薄层层析图。

图3为实施例3的对照薄层层析图。

图4为实施例4的对照薄层层析图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。

实施例1

用于清瘟败毒散中地黄的检测方法，包括以下步骤：

（1）分别利用清瘟败毒散、地黄和不包括地黄的清瘟败毒散处方制备供试品溶液、对照药材溶液、以及阴性样品溶液；具体制备过程如下：

取清瘟败毒散2g，加甲醇25ml，超声30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水10ml使其溶解，然后采用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，制成供试品溶液；

取对照药材地黄1g，加甲醇25ml，超声30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水10ml使其溶解，然后采用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，即制成对照药材溶液；

首先配置不包括地黄的清瘟败毒散处方，取处方量的1/500，加入甲醇25ml，超声30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水10ml使其溶解，然后采用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，即制成阴性样品溶液。

（2）吸取供试品溶液、对照药材溶液、以及阴性样品溶液点于硅胶G薄层板上，以比例为14∶1∶0.1的三氯甲烷、甲醇、以及氨水为展开剂，展开，取出，晾干。

（3）喷以5%香草醛硫酸溶液，然后在105℃以下的温度下加热至斑点清晰。

干燥后显现的色谱结果如图1所示，从左至右依次为对照药材溶液、供试品溶液、以及阴性样品溶液，每个溶液均为两个。对照药材溶液和供试品溶液的色谱显示斑点清晰，供试品溶液上与对照药材溶液色谱相对应的位置处，供试品溶液的色谱显示相同颜色的斑点，阴性样品溶液的色谱上的相应位置处没有相同颜色的斑点，表示该阴性样品溶液无干扰。

实施例2

本实施例是实施例1的对照实施例，本实施例中该展开剂的组成和比例不同，本实施例中该展开剂采用二氯甲烷、甲醇和氨水，该二氯甲烷、甲醇和氨水的比例为12∶1∶0.1。

该展开剂的检测结果如图2所示，该图片中从左至右依次为对照药材溶液、供试品溶液、以及阴性样品溶液，采用该比例下的展开剂时，发现阴性有干扰，效果不理想，极大地影响检测效果准确度的判断。

实施例3

本实施例是实施例1的对照实施例，本实施例中该展开剂的组成和比例不同，本实施例中该展开剂采用三氯甲烷、甲醇和氨水，该三氯甲烷、甲醇和氨水的比例为12∶1∶0.1。采用本实施例的展开剂，检测结果如图3所示，从左至右依次为对照药材溶液、供试品溶液、以及阴性样品溶液，每个溶液均为两个。采用该比例下的展开剂时，展开剂极性偏大，分离度不好。

实施例4

本实施例是实施例1的对照实施例，本实施例中该展开剂的组成和比例不同，本实施例中该展开剂采用三氯甲烷、正丁醇和氨水，该三氯甲烷、正丁醇和氨水的比例为5∶5∶0.2。采用本实施例的展开剂，检测结果如图4所示，该图片中从左至右依次为对照药材溶液、供试品溶液、以及阴性样品溶液，采用该比例下的展开剂时，展开速度变慢了，没有斑点。

实施例5

本实施例是实施例1的对照实施例，本实施例中该展开剂的组成和比例不同，本实施例中该展开剂采用三氯甲烷、甲醇和水，该三氯甲烷、甲醇和水的比例为14∶6∶1；并且采用茴香醛试液喷涂后加热显色。采用本实施例比例下的展开剂时，显色后没有斑点。

以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。