本发明属于鉴定荷花花芽分化时期的技术领域，涉及一种活体取样并鉴定荷花花芽分化时期的方法。
背景技术：
荷花(Nelumbo nucifera)为莲科莲属多年生水生草本植物，是我国十大传统名花之一，栽培历史悠久，有着深厚的文化底蕴；其花高雅脱俗，具有很高的观赏价值，其藕(根状茎)、莲子、叶可食用或药用，具有很大的经济价值，是我国目前种植面积最大，品种资源最丰富的观赏植物和水生经济植物。荷花开花及花发育的分子机理是目前的研究热点，通常需要采集处于分化状态的花芽鲜样作为研究材料，但由于以下几个原因导致荷花花芽鲜样的采集工作十分困难：一、荷花花芽的分化时间很短，自花芽开始孕育到分化结束只有3-5天；二、由于荷花的花芽发生于地下的根状茎(藕鞭)上，要想准确取到处于分化状态的花芽必须将根状茎挖出，操作十分不便。三、虽然采用组织切片法在显微镜下能够准确鉴定花芽分化的时期，但这种方法耗时较长，且要杀死并破坏花芽(纵切或横切)，无法满足花芽活体取样的要求，导致对花芽本身的研究无法进行。
借助体视显微镜进行活体剥芽观察，可辨别花芽分化的时期，而且不会破坏花芽的芽体，可进行花芽鲜样的保存。通过大量观察，可以将花芽的发育状态与解剖观察结果相对应，甚至可以直接通过花芽发育状态判断其所处分化时期。
技术实现要素：
本发明的目的是克服组织切片法鉴定花芽分化时期与获取确定分化时期的活体花芽不可兼得的矛盾，提供一种活体获取荷花花芽并可根据花芽的发育状态准确鉴定荷花花芽所处的分化时期的方法。
本发明的目的可通过以下技术方案实现：
一种活体取样并鉴定荷花花芽分化时期的方法，包括：
在已开花的盆栽荷花植株上，首先根据叶片的幼嫩程度确定最新长出的立叶，然后从该立叶的叶柄基部深入到泥中向下挖，直到触碰到立叶所着生的藕节，将其挖出，紧邻该立叶着生一个花枝，自花枝向立叶的生长方向即为藕鞭生长的方向；顺着该方向，继续沿藕鞭向前挖，依次可以看到未出泥的叶芽、花芽、最新生成的顶芽，该花芽以及顶芽内的花芽即为仍处于分化状态的花芽；
通过顶芽及花芽生长状态直接确定花芽所处的分化时期：顶芽中的花芽处于雄蕊分化期，未出泥的花芽处于雌蕊分化期；刚出泥未出水的花芽处于心皮发育时期；当花芽出水，花柄上已形成被刺时，花芽分化已完全结束。
本发明方法优选包括以下步骤：
(1)获取处于分化状态的花芽：在已开花的盆栽荷花植株上，首先根据叶片的幼嫩程度确定最新长出的立叶，然后从该立叶的叶柄基部深入到泥中向下挖，直到触碰到立叶所着生的藕节，将其挖出，紧邻该立叶着生一个花枝，自花枝向立叶的生长方向即为藕鞭生长的方向；顺着该方向，继续沿藕鞭向前挖，依次可以看到未出泥的叶芽、花芽、最新生成的顶芽，该花芽以及顶芽内的花芽即为仍处于分化状态的花芽；
(2)体视显微镜解剖观察并鉴定：对于顶芽，将其在体视显微镜下使用镊子、解剖针等工具解剖，将顶芽外面包裹的鳞片剥去，即可看到叶芽和伴生的花芽以及一个复合芽，再将花芽的花瓣剥去，进行观察鉴定；对于未出水的花芽，则直接剥去花瓣，进行观察鉴定；通过体视显微镜解剖观察并鉴定可获得与组织切片法鉴定分化时期一致的结果。
(3)简便判定花芽分化时期：顶芽中的花芽处于雄蕊分化期，该时期雄蕊原基分化形成许多小的突起；未出泥的花芽基本处于雌蕊分化期，该时期雄蕊分化完成，雌蕊原基分化形成若干个小丘状的突起；刚出泥未出水的花芽处于心皮发育时期，该时期雌雄蕊分化完成，心皮正分化出珠孔；当花芽出水，花柄上已形成被刺时，花芽分化已完全结束。
所述的体视显微镜型号优选为Motic SMZ-168。
本发明的有益效果：
(1)根据本发明方法能够快速并准确获得不同发育状态的花芽，并根据花芽的发育状态准确判断其所处的花芽分化时期。本发明将花芽的发育状态与其分化时期相对应，可以不用解剖仅通过观测花芽发育状态即可判断花芽的分化时期；适用于不同的荷花品种。
(2)本发明通过体视显微镜对花芽芽体进行观察，不破坏花芽芽体本身，可以在准确确定花芽分化时期的同时并对花芽鲜样进行保存。
具体实施方式
实施例1
分别于2015、2016年6月-7月在南京艺莲苑水生花卉公司，对盆栽重瓣粉色荷花品种‘H6-1’进行花芽的活体取样及鉴别实验。在2015年6月25日-7月20日，选取已开花的130盆植株，分别找最幼嫩的立叶，然后用手从该立叶的叶柄基部深入到泥中向下挖,直到触碰到立叶所着生的藕节，将其挖出，在紧邻该立叶处可以看到一个花枝，其中有的已出水，有的已出泥但未出水。顺着花枝向立叶的生长方向，沿藕鞭向前挖，得到未出泥的叶芽及花芽、最新生成的顶芽。将顶芽在体视显微镜下使用镊子、解剖针等工具解剖，将顶芽外面包裹的鳞片剥去，即可看到叶芽和伴生的花芽以及一个复合芽(第二复合芽)，再将花芽的花瓣剥去，进行观察鉴定；将已获取的未出水的花芽剥去花瓣，进行观察鉴定。经鉴定，可分辨出雄蕊分化期，该时期雄蕊原基分化形成许多小的突起；雌蕊分化期，该时期雄蕊分化完成，雌蕊原基分化形成若干个小丘状的突起；心皮发育期，该时期雌雄蕊分化完成，心皮正分化出珠孔。同时，将花芽的发育状态与解剖观察结果相对应，可以发现顶芽中的花芽处于雄蕊分化期，未出泥的花芽基本处于雌蕊分化期，刚出泥未出水的花芽处于心皮发育时期，当花芽出水，花柄上已形成被刺时，花芽分化已完全结束。
2016年6月21日-7月15日，根据上述方法分别取顶芽作为处于雄蕊分化期的花芽、未出泥的花芽作为雌蕊分化期的花芽、刚出泥未出水的花芽作为心皮发育期的花芽，并从中随机选取多个进行体视显微镜观察，证实花芽分化时期与上述判断一致，再次证明本发明技术的可靠性。
因此，应用本发明可以节约时间，提高效率，准确获得处于不同分化时期的花芽鲜样。