本发明涉及医学检测领域。更具体的，本发明涉及一种氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡及其制备方法。
背景技术：
Rh血型是1940年首次发现的一个血型系统。Rh血型的发现，对更加科学地指导输血工作和进一步提高新生儿溶血病的实验诊断和维护母婴健康，都有非常重要的作用。
Rh血型系统含有6种抗原，即C、c、D、d、E、e。凡红细胞含D抗原为Rh阳性，否则为阴性。Rh血型无天然抗体，其抗体多由输血或妊娠免疫生成，具有重要临床意义。一旦形成抗体，如再输入Rh阳性血液，可发生严重输血反应。
用于Rh血型分型的试剂目前国内尚未实现标准化，很多医疗机构尚不进行Rh血型分型检查。
在国外，已经有用于Rh血型的分型试剂卡，其多采用葡聚糖凝胶。但是葡聚糖凝胶会受温度、盐浓度、渗透压、pH的变化而致颗粒的孔径会改变，床外的空间也会改变，导致离心层析结果受影响。由于是一种凝胶状的颗粒，物理强度较差，随着保存期的延长，会导致变形，非特异吸附高，会影响试验结果。另外，价格也比较昂贵。
因此，本领域需要开发成本低、稳定性好的Rh血型定型试剂卡。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服上述不足，提供一种灵敏度高、特异性好且质量稳定的氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡。
第一方面，本发明提供一种氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡，所述试剂卡包括：
装有含IgM性质的单克隆抗C抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗c抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗E抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗e抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗D抗体的氧化锆微珠的微柱管。
装有含有氧化锆微珠悬浮介质的氧化锆微珠的微柱管。
上述氧化锆微珠颗粒直径为63-125米。
上述IgM性质的单克隆抗C抗体的效价≥16；上述IgM性质的单克隆抗c抗体的效价≥16；上述IgM性质的单克隆抗E抗体的效价≥16；上述IgM性质的单克隆抗e抗体的效价≥16；上述IgM性质的单克隆抗D抗体的效价≥64，且与DVI表型反应为阴性。
上述氧化锆微珠与各抗体的体积比均为2:1。
上述微柱管开口处设铝箔封片。
上述含有抗体的氧化锆微珠微柱管分别有1根；含有氧化锆微珠悬浮介质的氧化锆微珠微柱管有1-3根。
本发明第二方面提供上述氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(a)筛选出颗粒直径为63-125微米的氧化锆微珠，用微珠悬浮介质洗涤3-5次，除去微珠破损碎片以及聚集的微珠颗粒，收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形的微珠；
(b)将步骤(a)制备的微珠与各抗体分别按照体积比2：1的比例混合，配制成含有各抗体的微珠；
(c)将步骤(a)制备的微珠分别与微珠悬浮介质按照体积比2：1的比例混合，配制成含有氧化锆微珠悬浮介质的微珠；
(d)按照每管22-28微升的量，将步骤(b)、步骤(c)配制的微珠分别分装到检测卡的微柱管中。
上述方法还包括以下步骤：
(e)用铝箔纸通过压膜方式将微柱管上口密封。
上述微珠悬浮介质的组份为：
pH值为6.6-6.8。
本发明所述微珠悬浮介质中“水”为蒸馏水、纯化水或去离子水，优选蒸馏水。
本发明的有益效果是：
本发明的第一个方面，提出了一种标准化的氧化锆微珠悬浮介质体系，用于氧化锆微珠的洗涤和悬浮，并可以长时间维持抗体以及氧化锆微珠的稳定，其特点在于：
1、设计了具有很强缓冲能力的缓冲体系，采用磷酸钾盐、钠盐以及氨基酸组成的缓冲体系，使体系的pH值维持在6.6-6.8。与输血领域通常采用的单一的枸橼酸缓冲体系相比，具有缓冲能力更强的特点，有利于保持整个体系处于要求的缓冲范围，同时保证了整个氧化锆微珠悬浮介质的离子强度；
2、具有更加有效的低盐浓度体系，从其组成可以看出，本发明的氧化锆微珠悬浮介质采用氨基酸和氯化钠作为添加剂，辅助以微量的磷酸盐来雏持低离子强度环境，保持氧化锆微珠颗粒呈圆球颗粒并维持氧化锆微珠颗粒的直径大小在所要求的范围内(63-125微米)；
3、本发明具有独特的润滑体系，采用一定浓度的牛血清白蛋白，使得红细胞通过氧化锆微珠间隙时获得合适的润滑能力，使无凝集的红细胞具有完全通过氧化锆微珠颗粒间隙的能力，而凝集的红细胞则不能通过；
4、本发明具有优越的防腐体系，选择苯甲酸钠作为防腐剂，采用聚乙烯吡咯烷酮协同作用,具有更好的防腐能力。有效防止细菌的繁衍，获得较长时间的保存期，同时不仅避免使用叠氮钠化学防腐剂对氧化锆微珠悬浮介质体系的离子强度提升从而对Rh血型分型卡的灵敏度和特异性产生不良影响，也避免使用抗生素类在保存过程中所代谢产生的中间体对氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡的特异性产生的不良影响。
另一方面，为了保证本发明氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡的质量，在制备过程中还需要对氧化锆微珠进行筛选，即，首先要选择适当的氧化锆微珠，一般应该满足的条件是：选择颗粒直径为63-125微米，对筛选获得的氧化锆微珠原料需要进行洗涤、悬浮，目的是让氧化锆微珠颗粒洗涤去除破损的氧化锆微珠颗粒、聚集的氧化锆微珠颗粒、内径在63-125微米以外的超大或超小氧化锆微珠颗粒以及氧化锆微珠以外的其它杂质成分。
再一方面，为了保证本发明氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡的质量，在制备道程中还对与氧化锆微珠混合的抗体原料进行筛选。
综上所述，本发明的氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡之所以可以具有优良的特异性、灵敏度以及长达1年的保存期，是在于整个体系各种成分的协同作用。含有5种Rh分型抗体的氧化锆微珠微柱管排列于一张卡上可以保证仅使用一张氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡就能完成Rh血型系统所有5个抗原的检查。缓冲体系可以维持试剂卡反应体系需要的pH。低盐浓度体系可以保证氧化锆微珠颗粒得到充分溶胀且氧化锆微珠颗粒直径在所需要的范围内。润滑体系可以保证氧化锆微珠颗粒之间适当的润滑能力。防腐剂可以防止氧化锆微珠或抗体因为细菌繁殖而失效。标准化的氧化锆微珠可以保证微珠颗粒之间的合适的间隙。标准化的抗体可以保障抗原的有效检出。
用此氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡检测Rh血型，产生的阳性反应均不低于1+。一般在18-25℃条件下保存有效期不低于12个月。
总之，本发明的实施提供了标准化的氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡产品，各医院和采供血机构可以直接从生产供应商处得到标准一致的氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡，为准确鉴定Rh分型、保证安全输血、尽早诊断和治疗新生儿溶血病创造了条件。
附图说明
图1为氧化锆微珠显微镜图；
图2为本发明Rh血型检测试剂卡的结构示意图。
1-8.氧化锆微珠微柱管；9.检测试剂卡；11.氧化锆微珠；12.微珠悬浮介质；13.微柱管；14.空卡片。
具体实施方式
以下通过具体实施例详细说明本发明的实施和所具有的有益效果，旨在帮助阅读者更好的理解本发明的精神和实质，并不能对本发明的实施范围构成任何限定。所有试剂与仪器均为市售的。
实施例1：氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡的制备
步骤一、氧化锆微珠悬浮介质的配制
所述氧化锆微珠悬浮介质配方如下：
以上试剂用蒸馏水溶解，调pH值为6.6-6.8。
步骤二、氧化锆微珠的制备
选用氧化锆微珠，颗粒直径为63-125微米。用步骤一配制的氧化锆微珠悬浮介质洗涤3-5次，除去氧化锆微珠破损碎片以及聚集的氧化锆微珠颗粒，收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形的适用的氧化锆微珠。
步骤三、抗体的选择
选择IgM性质的单克隆抗C抗体，效价≥16；
选择IgM性质的单克隆抗c抗体，效价≥16；
选择IgM性质的单克隆抗E抗体，效价≥16；
选择IgM性质的单克隆抗e抗体，效价≥16；
选择IgM性质的单克隆抗D抗体，效价≥64，且与DVI表型反应为阴性。
步骤四、氧化锆微珠的配制
将步骤二制备的氧化锆微珠与步骤三选择的各抗体按照体积比2：1的比例混合，分别配制成含有IgM性质的单克隆抗C抗体的氧化锆微珠、含有IgM性质的单克隆抗c抗体的氧化锆微珠、含有IgM性质的单克隆抗E抗体的氧化锆微珠、含有IgM性质的单克隆抗e抗体的氧化锆微珠和合有IgM性质的单克隆抗D抗体的氧化锆微珠；将步骤二制备的氧化锆微珠与步骤一配制的氧化锆微珠悬浮介质按照体积比2：1的比例混合，配制成含有氧化锆微珠悬浮介质的氧化锆微珠。
步骤五、分装
按照每管22-28微升的量，将步骤四配制的各氧化锆微珠分别加入到一块空白卡片的微柱管中。上述含有抗体的氧化锆微珠微柱管分别有1根；含有氧化锆微珠悬浮介质的氧化锆微珠微柱管有1-3根。检测卡可对一个样品进行Rh血型分型。为了便于识别标记，在试剂卡下方贴有标签纸。
步骤六、半成品测定
要求含有抗体的氧化锆微珠微柱管中，具有与抗体相应抗原的红细胞产生≥1+的阳性反应，即红细胞集中在氧化锆微珠上层表面，呈现直线型。而与不含有抗体对应抗原的红细胞产生阳性反应，即红细胞可以全部通过氧化锆微珠到达微管底部，沉积在微管底部。而不含抗体只含有氧化锆微珠悬浮介质和氧化锆微珠混合物的氧化锆微珠微柱管中红细胞可以全部通过氧化锆微珠到达微管底部，沉积在微管底部，呈现阴性反应。
步骤七、封口
用铝箔纸通过压膜方式将微柱管上门密封。贴标签标记后于18-25℃保存。
步骤八、保存试验
上述氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡卡保存了1年以上，在此保存期间，该氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡具有以下检测结果：
(1)外观
氧化锆微珠Rh血型分型试剂卡卡中的氧化锆微珠均应呈均匀白色，微珠层上端有1～2毫米清澈透明的无色透明液体，氧化锆微珠颗粒之间不应有气泡和异物。
(2)灵敏度
含有抗体的微柱氧化锆微珠微柱管中，具有与抗体相应抗原的红细胞产生≥1+的阳性反应，即红细胞集中在氧化锆微珠上层表面，呈现直线型。
(3)特异性
含有抗体的微柱氧化锆微珠微柱管中，具有与抗体相应抗原的红细胞产生阳性反应，即红细胞集中在氧化锆微珠上层表面，呈现直线型。与不含有抗体对应抗原的红细胞产生阴性反应，即红细胞可以全部通过氧化锆微珠到达微管底部，沉积在微管底部。而不含抗体只含有氧化锆微珠悬浮介质和氧化锆微珠混合物的氧化锆微珠微柱管中红细胞可以全部通过氧化锆微珠到达微管底部，沉积在微管底部，呈现阴性反应。
通常葡聚糖凝胶价格是氧化锆的30余倍。另外，氧化锆是白色无臭无味晶体，不溶于水、盐酸和稀硫酸。化学性质不活泼，且高熔点、高电阻率、高析射率和低热膨胀系数的性质，是重要的耐高温材料，陶瓷绝缘材料。
氧化锆微珠的特点是化学物理稳定性高，非特异性吸附低，细菌等微生物不会生长，填料反压特低。
以上为对本发明实施例的描述，通过对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其他实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例。