确认材料的方法与流程

wo2008/019161描述了一种利用表面强化raman光谱(sers)标记的燃料确认方法。这种方法包括使具有已知raman光谱的物质与一定量燃料关联。在一个实施方案中，可以将包含sers活性核的纳米颗粒与燃料供应混合。在一个替代实施方案中，可以将包含raman活性报告分子的sers活性染料与一定量燃料混合。如果所述一定量燃料被含有raman活性报告分子的染料标记，则确认所述一定量燃料的方法可以包括向燃料样品中混入raman强化金属颗粒的胶体，和然后获取与所述标记相关的raman活性报告分子的raman光谱。合适的金属包括但不限于银或金。替代地，一部分样品可以与sers活性基质关联。虽然在wo2008/019161中描述了所述程序的半定量实例，但我们发现标记的sers响应倾向于变化，从而结果由于不可重复而包括明显的不确定性。在wo2012/052779中描述了一种改进的通过sers定量分析材料以确定材料样品中sers活性标记物的量的方法。该方法包括如下步骤：向样品中加入sers活性标记化合物的同位素修饰版本作为内标，使所述样品/内标混合物与sers基质接触，然后使所述混合物和sers基质经受raman光谱。然后由(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标的响应的比计算样品中sers活性标记化合物的浓度。虽然所述方法比现有技术的方法有所改进，但我们发现标记材料来源的变化可能影响所获得的结果，导致需要对每种标记材料提供附加的标定数据。燃料如汽油和柴油为石油的蒸馏馏分，和它们本身包含化合物的混合物，其确认取决于石油来源和石油所经受的调节其组成的任意处理。所述处理可以包括脱除不想要的化合物如含硫化合物和重金属。某些燃料添加剂如清净剂、防腐剂、润滑剂、金属清除剂、辛烷值改进剂等也可能存在于零售燃料中。由于所有这些原因，燃料组合物随供应商和时间会发生很大变化。组成变化可能导致不同的燃料样品给出不同的sers响应，从而对于每种待分析标记物浓度的不同类型燃料都必须进行标定。

本发明的目的是提供应用标记法确认材料的方法，该方法克服了至少一些现有技术方法的缺点。

技术实现要素：

按照本发明，提供一种测量有机液体样品中特定sers活性化合物的量的方法，包括如下步骤：

a)使所述样品与不可混溶液体混合；

b)分离所述混合物为至少第一和第二相,其中第一相包含不可混溶液体和第二相包含有机液体的样品；

c)处理第一相脱除源自有机液体的痕量化合物以提供处理后的第一相；

d)稀释所述第一相或处理后的第一相的样品；

e)使所述稀释和处理后的第一相的样品与sers基质接触；

f)在内标化合物存在下使所述稀释和处理后的第一相的样品和sers基质经受raman光谱；和

g)计算(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标化合物的响应的比。

按照本发明的第二个方面，提供一种比较有机液体样品与参考有机液体的方法，包括如下步骤：

a)使所述样品与不可混溶液体混合；

b)分离所述混合物为至少第一和第二相,其中第一相包含不可混溶液体和第二相包含有机液体的样品；

c)处理第一相脱除源自有机液体的痕量化合物以提供处理后的第一相；

d)稀释所述第一相或处理后的第一相的样品；

e)使所述稀释和处理后的第一相的样品与sers基质接触；

f)在内标化合物存在下使所述稀释和处理后的第一相的样品和sers基质经受raman光谱；

g)计算(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标的响应的比；

h)比较(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标的响应的比与参考值，所述参考值代表在含已知浓度的sers活性标记化合物的参考材料样品中测量的(iii)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(iv)raman光谱检测器对内标的响应的比。

按照本发明的第三个方面，提供一种确定有机液体样品是否为已知有机液体样品的方法，其中已经向所述已知有机液体样品中加入已知浓度的sers活性标记化合物作为标记物，包括如下步骤：

a)使所述样品与不可混溶液体混合；

b)分离所述混合物为至少第一和第二相,其中第一相包含不可混溶液体和第二相包含有机液体的样品；

c)处理第一相脱除源自有机液体的痕量化合物以提供处理后的第一相；

d)稀释所述第一相或处理后的第一相的样品；

e)使所述稀释和处理后的第一相的样品与sers基质接触；

f)在内标化合物存在下使所述稀释和处理后的第一相的样品和sers基质经受raman光谱；

g)计算(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标的响应的比；

h)比较(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标的响应的比与参考值，所述参考值代表在含已知浓度的sers活性标记化合物的参考材料样品中测量的(iii)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(iv)raman光谱检测器对内标的响应的比。

在参考材料中sers活性标记化合物的浓度优选与已知有机液体中sers活性标记化合物的浓度相同或具有已知的关系。所述参考材料可以是已知有机液体的样品。参考值可以为参考源如手册、计算机内存、仪表操作代码中提供的数值。所述参考值可以替代地为应用含已知量sers活性标记化合物的已知有机液体样品测量的数值。

所述方法适合于确认多种类型的有机液体。可以理想地实施本发明方法的材料的例子包括烃、燃料、矿物油、植物油、已知用于掺杂燃料和油的液体如有机溶剂、醇和其它高价值或高征税产品。已经发现所述方法特别适用于确认烃燃料：通过用标记物标记燃料和然后测量燃料样品中的标记物浓度，以确定所述样品是否为标记燃料的样品和燃料是否已被未标记或不同标记的液体所稀释。正如本说明书中所提到的，标记物是在材料中存在的可以用于确认所述材料的化合物。因此，如果在材料分配前向其中添加已知量的标记化合物以形成标记材料，则通过分析材料以确定标记化合物存在与否及其浓度并与样品分配前材料中的标记物浓度比较，可以确认所分配材料的样品。通过比较分配前和分配后材料中标记物的浓度也可以检测分配材料的掺杂情况，例如被未标记或不同标记材料所稀释。

当在本说明书中提及sers时，旨在包括其它形式的表面强化光谱(ses)如serrs(表面强化共振raman光谱)。为了简洁起见，这些方法通称为sers。

sers活性标记化合物为当接触或接近sers基质时可由其raman信号确认的化学化合物。合适的标记物因此能够表现出表面强化的raman散射。当被标记的材料为液体时，所述标记物优选可溶于作为液体的被标记的待用所述标记物标记至其应用浓度的液体中。对于烃液体如燃料中的应用，所述标记物优选可溶于燃料中至应用sers分析可测量的浓度。与在sers分析前用于萃取标记物的溶剂中相比，在被标记的材料中标记物可能略微难溶。当sers基质为金属胶体的水溶液时，所述标记物可能能够吸附到金属表面，同时在与样品混合后保持胶体颗粒分配到含水相的能力。因此标记物的选择必须考虑其通过应用sers方法产生增强的raman信号的能力、其对sers基质表面的亲和性及其溶解度和分配特性。当内标为sers-活性化合物的同位素修饰版本时，所述标记物也必须在方法中可作为同位素修饰版本获得以用作内标。产生同位素修饰分子的方法是公知的和通常包括用氘替换标记物分子中的至少一个氢原子或用c¹³替换碳原子。sers活性标记物的同位素修饰版本本身必须是sers活性的和必须产生可由标记物产生的信号中分辨出来的sersraman信号。

sers基质是一种基质，其表面能够强化接近或接触所述表面的分子的光谱响应，即能够促进表面强化光谱(ses)。sers基质可以为表现出表面等离子强化的任何材料。sers基质通常包括金属如银、金和铜。也有可能应用其它sers基质，特别是金属，包括na和al和过渡金属如pt、ni、ru、rh、pd、co、fe、cr。随着表面强化光谱新方法的开发，可获得不同的ses促进基质，和可以在本发明方法中应用。sers基质可以采用小颗粒形式，通常为纳米颗粒，典型地用作胶体溶液，特别是含水胶体溶液。替代地，sers基质可以采用具有金属表面或图案表面的平板材料的形式，所述金属表面包含固定化金属胶体形式的微结构，所述图案表面由金属如金、银或铜制成或涂覆有所述金属。合适的sers基质可广泛地商购获得，作为胶体金或银溶液或者作为具有等离子表面的sers的专用平面材料，如klarite^tm。

sers活性标记化合物和/或内标可以被结合在包含sers基质的“纳米标记物”中。合适的纳米标记物包括例如在wo01/25758中描述和包含ses(表面强化光谱)金属纳米颗粒的sers活性复合纳米颗粒、接近金属表面的ses活性物质层和包含聚合物、玻璃或其它介电材料的包封外壳。内标可以包括结合sers活性标记化合物的同位素修饰版本的纳米标记物。例如，内标可以包括ses金属纳米颗粒、接近金属表面的ses活性物质层和包含聚合物、玻璃或其它介电材料的包封外壳，其中ses活性物质用作内标。

sers活性标记物通过标准方法加入待标记的材料中，例如当所述材料在生产或分配位置以主体体积保持时。可以将不同标记物加入到相同主体组成的不同体积材料中，以用于不同目的或不同领域或来源于不同批次材料。替代地，可以将不同标记物加入到具有不同组成的材料的不同主体体积中，例如用于区分不同等级的燃料。材料中标记物的浓度可以为1ppt(即0.001ppb)-100ppm，更优选为0.1ppb-10ppm。标记物通常以小于10ppm的量加入到材料中。“ppt”指万亿分之一份。“ppb”指十亿分之一份。“ppm”指百万分之一份。可以将多种标记物加入到单个材料中，和以变化的相对量应用不同标记物的组合可以应用相对较以少标记化合物提供大量独特的标记材料。

可以将标记物加入到以主体形式存在的有机液体中，或可以将其加入到待标记的液体组分中。例如，当材料为农业化学品时，可以将标记物加入到组合物的一个组分中，如分散剂中。当待标记的材料为燃料时，则可以将标记物加入到燃料添加剂中，随后所述添加剂在主体燃料分配前加入所述燃料中。在这些工况中，当结合标记物的组分在制备或生产过程中加入材料组合物中时，所述材料就被标记物标记了。替代地，可以将所述标记物加入或混合入溶剂，随后所述溶剂与待标记的材料混合。

当需要确定有机液体样品中特定sers活性标记物的量时，应用本发明的方法。

本发明方法分析所应用的样品量通常精确已知。制样的合适方法是已知的和可以包括应用注射器、体积烧瓶或采样回路。用于分析的样品量可以变化。在一个典型方法中，10μl–10ml用于方法的步骤(a)的分析。10μl–1ml范围内的量可以用于方法的步骤(a)。

待分析以确定sers-活性化合物的存在和/或含量的有机液体的样品首先与不可混溶液体混合。所述液体的不可混溶程度应使一起混合时它们分离为可相互区分的至少第一和第二相。液体的一些组合物可以形成超过两相。所述不可混溶液体可以包括水或含水溶液。在这种情况中，第一相为含水相和第二相为有机相。可能有用的合适不可混溶液体包括影响与sers基质接触的混合物中的离子浓度的化合物。这些化合物及其溶液对于用作sers聚集剂来说可能是已知的。这些包括活性或惰性盐、酸和碱；聚合物或长链离子，其可能影响胶体金属sers基质的表面电荷或以其它方式改变胶体特性，例如通过替换胶体稳定剂或与其相互作用而影响胶体的空间相互作用或稳定性。特别合适的包括氯化钠、硫酸钠、硝酸钠、硝酸钾、氯化钾、氯化钙、硝酸、硫酸、亚硫酸、盐酸、粗胺和聚(l)赖氨酸的溶液。在优选的实施方案中，所述不可混溶液体为可能包括盐溶液的含水溶液。在这种情况中，所述盐溶液可以包含已知在sers分析中用作聚集剂的盐。

在分析方法中应用内标很普遍。目标化合物和内标对分析技术的相对响应很可能不敏感以至于在实施方法或样品的性质中不一致，和因此应用内标可以减小由于这些因素造成的分析误差。对于分析燃料中的sers活性标记物，应用内标可克服误差，因为内标和标记物的相对响应应该只取决于内标和标记物的相对浓度。但是，sers非常依赖于sers基质对sers活性化合物的吸附、已吸附的金颗粒的聚集以及在有机液体分析时sers活性化合物和金纳米颗粒在有机相和含水相之间的分配。标记化合物的同位素修饰(或“同位素编辑”)版本在化学上尽可能地类似于sers活性标记化合物，从而它们以相同的方式起作用。所应用的内标的浓度可能大于或小于预期在样品中存在的sers活性标记物的浓度。与样品混合的内标的浓度优选为1ppt(即0.001ppb)-100ppm，更优选0.1ppb-10ppm。如果进行参考比较，则与样品混合的内标的浓度可以与参考样品中内标的浓度相同。

内标化合物存在于与sers基质接触的混合物中。可以在所述方法的任何阶段至该点处将内标加入混合物。因此可以在步骤(a)之前或任意步骤(a)–(f)期间将其加入样品中。例如，在所述方法的步骤(e)中可以将内标化合物加入到与sers基质接触的混合物中。在所述方法的某些实施方案中，可以将内标和不可混溶液体混合在一起，之后与有机液体的样品混合。作为一个替代，内标和不可混溶液体可以分别与样品混合。在本发明的一个实施方案中，预定量的内标和预定量的不可混溶液体混合在一起和作为预混合的试剂提供用于本发明的方法。包含预定量内标和预定量不可混溶液体的预混合的试剂可以作为主体液体提供，其可以被以等份分配以在本发明方法的步骤(a)中与样品混合。在本发明的具体实施方案中，预定量的内标和预定量的含水盐溶液混合在一起和作为预混合试剂提供用于本发明的方法。替代地，预混合试剂可以在密封容器如小瓶中以测量量提供。在这种情况中，待分析的测量量的样品可以分配入含预混合试剂的容器。作为测量量的预混合试剂提供不可混溶液体和内标有几个优点。以这种方式，所述方法对操作者来说变得更简单，因为不再需要确认正确的盐溶液、内标、查找待应用和测量的每种试剂的量以及单独分配每种试剂。应用预混合试剂也减少了分析被污染物影响的机会。内标可以存在于或加入到所述方法的步骤(d)中应用的稀释剂中。可以提供含内标的预混合稀释剂用于步骤(d)中。这种预混合稀释剂可以如上所述大量或以测量量提供。

当化合物混合在一起时，通过搅拌混合物，例如通过振荡其中已分配了混合物组分的容器，通常足以混合各组分。可以应用替代的混合方法。可以应用微流体方法。

可以用合适的有机溶剂或用更多体积的含主体样品的液体稀释样品。在烃液体样品、特别是燃料样品的分析中，我们发现可以应用非极性溶剂如链烷烃如异-辛烷、正-辛烷、癸烷、甲苯或十二烷混合样品。样品与所用溶剂的体积比通常为1:1–50。溶剂的应用可以强化标记物分配入含水相中。合适的溶剂可以辅助混合物分离为第一和第二相。当应用溶剂时，优选在样品与sers基质接触前将其加入样品中。还优选在加入溶剂前向样品中加入内标。

在步骤(a)中混合后，混合物分离为第一和第二相，例如含水相和有机相。可以通过在混合后允许混合物静置而使其分离。优选从混合物脱除一部分第一相用于方法的步骤(c)–(g)。可以通过任意实际方法实现此操作，包括例如利用插入混合物的注射器或通过微流体而抽出含水相。

处理由步骤(b)得到的第一相(或其一部分)以脱除源自有机液体的痕量化合物。我们发现液体如烃燃料如汽油或柴油可能含有干扰化合物，其干扰利用sers的raman光谱测量。这些化合物的确认不是已知的，和可能根据燃料来源或类型而随燃料变化。所述干扰化合物可能影响sers活性标记化合物或内标与sers基质的连接，从而减小或堵塞sers响应。其它类型的干扰化合物可能产生sers响应或可能影响胶体sers基质的聚集。所述处理可能包括或由能够脱除干扰化合物的方法组成，所述干扰化合物如有机组分例如已经在步骤(b)中分离的含水相中保留的组分。这种处理包括使第一相流过过滤介质。某些过滤介质对有机组分有亲和性。我们发现一种塑料的注射过滤器(例如含ptfe)可有效脱除痕量干扰有机化合物。在优选的实施方案中，所选择的处理不会从含水相中脱除sers活性标记化合物或内标。

第一相在方法的步骤(d)中被稀释。所述稀释步骤可以在所述处理步骤(c)之前、之后或与之同时发生。所述稀释可以通过将等份的第一相放入一定体积的稀释液体中实施。所述稀释液体可以是水或其它含水液体，例如其可以为盐溶液。所述稀释液体可以是非含水的。如果稀释液体是盐溶液，其可能含有与步骤(a)应用的含水盐溶液类似的盐。所述稀释液体可以用作用于胶体金属颗粒的聚集剂。稀释液体可以选自如上提到的聚集剂。稀释液体可以与步骤(a)中应用的不可混溶液体的量相同或不同。作为实例，当在步骤(a)中应用的不可混溶液体为含水盐溶液时，步骤(b)的第一相可以存在于配备有塑料注射过滤器的注射器中，并然后第一相的液滴可以通过过滤器流出注射器进入一定体积的含水盐溶液，所述含水盐溶液可以与步骤(a)中应用的含水盐溶液相同或不同。

步骤(e)包括使稀释和处理后的含水相与sers基质接触。当sers基质为金属胶体溶液时，通过混合例如振荡胶体溶液和样品足够时间以使样品中的分子吸附于金属表面，可以使样品中的sers活性标记化合物和内标与sers基质接触。带有吸附的sers活性分子的金属颗粒通常形成聚集体。然后应用已知方法使样品和sers基质经受raman光谱以获得raman光谱。

对于胶体金属颗粒，通常有利的是在sers活性标记化合物的存在下形成包含几个颗粒的聚集体。聚集可以自发发生，这取决于待分析的混合物中存在的胶体和化合物的性质。作为一个选项，可以应用一种或多种聚集剂，以改进在sers活性标记化合物存在下胶体金属颗粒的聚集。合适的聚集剂可以根据胶体金属和/或sers活性标记化合物的性质进行选择。在本发明方法的某些实施方案中，如果在步骤(a)中应用的和任选在步骤(d)中用作稀释剂的不可混溶液体作为聚集剂是有活性的，则是有利的。在这种情况中，在步骤(e)中或之后可能不必加入附加的聚集剂。

可以由(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标的响应的比计算sers活性标记化合物和内标的相对量。检测器响应比可以为sers光谱的选定峰(峰高、峰面积)的比。替代地，可以应用整个sers光谱计算响应比。优选地，在所述样品中所述sers活性标记化合物的浓度由方法步骤(g)中计算的比计算。可以将步骤(g)中计算的比与参考值比较，所述参考值代表含已知浓度的sers活性标记化合物的参考样品的(iii)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(iv)raman光谱检测器对内标的响应的比。由只含目标sers活性标记物或内标的参考样品获得的sers光谱可以用于确认为标记物或内标的特征的合适峰，可以选择所述峰用于比较化合物的相对响应。可以由归属于每种化合物的一个峰或多个峰的相对强度或面积计算相对响应。作为替代，可以优选以矢量形式比较由接触sers基质的样品的raman光谱获得的整个光谱或其一部分与由接触sers的包含已知浓度sers活性标记化合物的参考样品获得的光谱和由接触sers基质的包含已知浓度内标化合物的参考样品获得的光谱。光谱的计算特性，列如与存在的一种或每种化合物的参考光谱比较的相对响应，可以用于代表由于sers活性标记物和/或内标引起的检测器响应。不必总是收集和展示raman光谱。因为标记物和内标的确认是已知的，可能足以在一个或多个预定的raman迁移波数或波数范围下测量检测器响应和由所测量的响应计算标记物的浓度。可以是显示给用户的计算结果为浓度值、相对浓度(例如作为已知加入真实液体的标记物量的百分比表示)、“通过/失败”结果或基于含标准量标记物的溶液的值作为质量的绝对值或类似值。比较光谱和计算相对响应和峰比的方法是公知的和通常应用合适的用光谱数据处理软件编程的计算机实施。sers活性标记化合物的浓度与raman检测器响应比间的关系可以通过标定法确定。

所要求保护的方法的具体实施方案的例子包括：

首先，一种测量有机液体样品中特定sers活性化合物的量的方法，包括如下步骤：

a)使所述样品与包含所述sers活性化合物的同位素修饰版本的内标和含水盐溶液混合；

b)将混合物分离为含水相和有机相；

c)处理含水相脱除源自有机液体的痕量化合物以提供处理后的含水相；

d)稀释所述含水相或处理后的含水相的样品；

e)使所述稀释或处理后的含水相的样品与sers基质接触；

f)使所述样品和sers基质经受raman光谱；和

g)计算(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标的响应的比。

其次，一种比较有机液体样品与参考有机液体的方法，包括如下步骤：

a)使所述样品与包含所述sers活性化合物的同位素修饰版本的内标和含水盐溶液混合；

b)将混合物分离为含水相和有机相；

c)处理含水相脱除源自有机液体的痕量化合物以提供处理后的含水相；

d)稀释所述处理后的含水相的样品；

e)使所述稀释后的样品与sers基质接触；

f)使所述样品和sers基质经受raman光谱；和

g)计算(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标的响应的比；

h)比较(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标的响应的比与参考值，所述参考值代表在含已知浓度的sers活性标记化合物的所述参考材料的样品中测量的(iii)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(iv)raman光谱检测器对内标的响应的比。

第三，在一个具体的实施方案中，提供了确定有机液体样品是否为已知有机液体样品的方法，其中已经向已知有机液体样品中加入已知浓度的sers活性标记化合物作为标记物，包括获得所述有机液体的样品的步骤，然后：

a)使所述样品与包含所述sers活性化合物的同位素修饰版本的内标和含水盐溶液混合；

b)将混合物分离为含水相和有机相；

c)处理含水相脱除源自有机液体的痕量化合物以提供处理后的含水相；

d)稀释所述处理后的含水相的样品；

e)使所述稀释样品与sers基质接触；

f)使所述样品和sers基质经受raman光谱；和

g)计算(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标的响应的比；

h)比较(i)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(ii)raman光谱检测器对内标的响应的比与参考值，所述参考值代表在含已知浓度的sers活性标记化合物的参考材料样品中测量的(iii)raman光谱检测器对sers活性标记化合物的响应与(iv)raman光谱检测器对内标的响应的比。

参考材料中sers活性标记化合物的浓度优选与已知有机液体中sers活性标记化合物的浓度相同或具有已知关系。

参考附图，本发明的方法将在如下实施例中进行验证：

图1：柴油中标记物a/氘化标记物a的比相对于标记物a浓度的图线(实施例1)。

图2：汽油中标记物a/氘化标记物a的比相对于标记物a浓度的图线(实施例2)。

图3：柴油中标记物a/氘化标记物a的比相对于标记物a浓度的(对比)图线(实施例3)。

图4：汽油中标记物a/氘化标记物a的比相对于标记物a浓度的(对比)图线(实施例4)。

图5：由实施例3的柴油标定线绘制的实施例4的(对比)汽油结果。

图6：由实施例1的柴油标定线绘制的实施例2的汽油结果。

在这些实施例中应用的标记物是sers活性的有机化合物，即产生易于确认的sers响应和在研究浓度范围内与烃燃料混溶并且能够分配入含水液体中。所述化合物称为标记物a。所应用的内标为标记物a的氘化版本。

实施例1

制备含0.9ppm标记物a的柴油燃料。所述混合物用更多柴油燃料稀释至不同浓度而制备进一步的混合物，目的是标定sers响应对标记物a浓度的响应。通过如下方法分析每种混合物的样品。

将250μl样品加入含800μl处于10wt％nacl水溶液中的0.281ppm的氘化标记物a的小瓶中并振荡30秒。当含水层和有机层分离时，应用钝针和一次性注射器从含水层取0.2ml。使注射器中的样品流过0.45微米的ptfe注射器过滤器，和将一滴(约10μl)洗脱入含900μl的0.111mnacl水溶液的gc小瓶中。加入500μl的au胶体并振荡样品。应用raman光谱仪用785nm的激励波长和约1秒的积分时间分析所得的混合物。在图1中绘制了对标记物a的响应与对氘化标记物a的响应的比与标记物a浓度的关系。标定线的参数为y＝0.00107x+0.00391，其中r²的值为0.9978。

实施例2

应用商购汽油重复实施例1中实施的标定方法。在图2中给出了结果曲线。标定线的参数为y＝0.00109x+0.00489，其中r²的值为0.9985。

这些结果表明汽油和柴油的标定非常类似，这使得在分析两类燃料时能够应用同一标定。因此所述方法提供应用所述方法分析不同燃料的可能性，而不需要对待分析的每种燃料实施标定。如果待分析液体的原始来源或特性未知时，这是特别有利的，当对由零售来源收集的样品进行标记物分析时可能就是这种情况。

实施例3(对比例)

应用不同方法分析实施例1中制备的柴油标定混合物。将500μl样品加入含400μl处于0.25mnacl水溶液中的1.125ppm的氘化标记物a的gc小瓶中。振荡混合物30秒。静置后混合物分离为含水层和有机层。向含水层加入500μlau胶体和倒置混合物以确保混合。应用raman光谱仪应用785nm的激励波长和约1秒的积分时间分析所得的混合物。在图3中绘制了对标记物a的响应与对氘化标记物a的响应的比与标记物a浓度的关系。标定线的参数为y＝0.00108x+0.01146，其中r²的值为0.9994。

实施例4(对比例)

应用商购汽油重复在实施例3中实施的标定方法。在图4中给出了结果的曲线。标定线的参数为y＝0.00106x+0.36919，其中r²的值为0.9883。

图5给出了与实施例3的柴油标定线一起绘制的在实施例4的汽油标定中获得的点。这表明当应用比较分析方法时，应用柴油标定对汽油给出不精确的结果。图6给出了与实施例1的柴油标定线一起绘制的在实施例2的汽油标定中获得的点。这表明当应用本发明的分析方法时，应用柴油标定对汽油将给出精确的结果。